高浓度尿酸对人近端肾小管上皮细胞氧化应激的影响

目的观察高浓度尿酸对人近端肾小管上皮细胞氧化应激的影响,探讨其可能的作用途径。方法体外培养人近端肾小管上皮HK-2细胞,以720μmol/L的尿酸干预0、12、24、48 h后收集细胞;DCHF-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）含量,分光光度计检测细胞上清液中的丙二醛（MDA）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）,MitoSOXTM染色观察活细胞线粒体中ROS的生成情况。结果尿酸干预12 h时细胞内总ROS含量较未干预时无明显变化,细胞上清中MDA含量、T-SOD活性亦较未干预时无明显差异（P均〉0.05）;干预24 h时总ROS含量有所升高,MDA含量上升,T-SOD活性降低,48 h时上述变化更为明显（P均〈0.05）;线粒体内ROS也在尿酸干预24 h时合成上调,48 h时升高更为显著（P〈0.05）。结论高浓度尿酸可诱导HK-2细胞氧化应激反应,线粒体ROS合成增多可能是其作用基础。     

大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养和鉴定

目的 建立较好的大鼠近端肾小管上皮细胞原代培养模型.方法 无菌取Wistar大鼠肾脏,取皮质剪碎,经Ⅰ型胶原酶消化和45%Percoll连续密度梯度离心进行纯化,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基原代培养并传代,观察细胞形态并以免疫细胞化学染色及酶化学染色鉴定.结果 培养4～5 d细胞融合成单层,呈典型的鹅卵石样,细胞角蛋白18及碱性磷酸酶染色均呈阳性,细胞可传2～3代.结论 此法可在短期获得数量较多、重复性好的近端肾小管上皮细胞,为体外研究肾小管细胞的病变提供了实验平台.     

姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞炎症因子表达的影响及其机制

目的探讨姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞表达炎症因子的影响及其相关机制。方法用脂多糖联合干扰素γ诱导巨噬细胞构建炎症细胞模型并设立不同浓度的姜黄素干预组和对照组,通过实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附法测定不同分组中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素12B(IL-12B)三种炎症因子的表达。Western blot检测各组细胞TLR4-MAPK/NF-κB信号通路的表达。结果实时荧光定量PCR显示,与对照组相比,姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6及IL-12B m RNA的表达均具有明显抑制作用(P0.001),酶联免疫吸附法也证实姜黄素能抑制以上炎症因子的分泌(P0.01)。Western blot检测显示,姜黄素能明显抑制TLR4的表达及下游MAPK(p38、ERK1/2及JNK1/2)和NF-κB(IκBα及p65)通路的磷酸化(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制TLR4-MAPK/NF-κB信号通路抑制脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞中TNF-α、IL-6及IL-12B这三种炎症因子的表达。     

miR-98通过调控PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的 明确miR-98对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响和机制.方法 肺泡上皮细胞A549分成Control、SP(肺炎链球菌刺激)、miR-NC+SP(转染mimics control,肺炎链球菌刺激)、miR-98+SP组(转染miR-98 mimics,肺炎链球菌刺激),qRT-PCR方法检测...     

马兜铃酸Ⅰ对肾小管上皮细胞超微结构的影响

目的：观察马兜铃酸Ⅰ（Aristolochic AcidⅠ）对肾小管上皮细胞超微结构的影响。并与庆大霉素所致损伤进行比较研究,方法：以体外培养的人近端肾小管上皮HKC细胞作为研究对象,分别给予马兜铃酸Ⅰ（200、800、3200μg/L）和庆大霉素（200、800、3200mg/L）,并设对照组,24h后检测细胞数量、细胞生存率、培养上清乳酸脱氢酶（LDH）和N－乙酰－β－D－氨基葡萄苷酶（NAG）含量。细胞经处理后,采用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化,单盲下随机计数20个细胞,统计各组细胞超微结构差异。结果：24h后,在各组细胞数、细胞生态率、培养上清LDH和NAG酶等指标都尚我显著变化时,给药组组织超微结构已以发生显著变化。马兜铃酸Ⅰ组细胞以核结构变异为主,表现为核畸形、核仁缺失、巨核、小核、核膜增生卷曲等;高浓度组细胞同时具有少量线粒体肿胀等膜性结构变化。马兜铃酸Ⅰ组中细胞核变异及膜性结构变异程度都与剂量成显著正相关。庆大霉素组细胞以溶酶体变化为主,产生髓样小体、残余小体等,并可见发育不良的线粒体等,变异程度与剂量成正相关。庆大霉素组核变异状况与正常对照组无显著差异,与药物剂量也无显著相关性。结论：马兜铃酸Ⅰ对人肾小管上皮细胞超微结构的影响以核变异为主,在高浓度偶见线粒体肿用等膜性结构改变。庆大霉素作用后细胞主要表现为产生大量髓样小体、残余小体、发育不良的线粒体等,细胞核变异不显著。两种药物对是能小管上皮细胞超微结构的影响存在明显差异。     

肾小管上皮细胞的免疫活性作用

研究表明，皮肤、消化道、关节、甲状腺、胰腺、肝脏和肾脏等处的实质细胞与免疫细胞发生相互作用以启动或调控局部的免疫反应。在肾脏疾病中，肾小管上皮细胞通过其抗原呈递功能参与肾脏疾病的发生、发展。研究显示，肾小管上皮细胞具备免疫细胞的潜质，在某些肾脏病理情况下表现出免疫细胞的活性，从而主动参与小管间质局部的免疫反应、炎症以及间质纤维化过程。本文将对肾小管上皮细胞免疫活性的激活、机制和结局作一综述。     

3种中药复方血清对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症因子

目的　研究四君子汤、血府逐瘀汤、补阳还五汤等3种中药复方血清对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）及细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响,探讨相关中药复方防治动脉粥样硬化的机制。方法　应用药物血清学方法制备四君子汤、血府逐瘀汤、补阳还五汤含药血清及正常空白血清,以供细胞实验使用。体外培养HUVEC,随机分为6组,即空白对照组、模型组、阿托伐他汀组、四君子汤组、血府逐瘀汤组、补阳还五汤组,用脂多糖刺激2　h后,分别加入阿托伐他汀和中药复方血清干预,24　h后收集细胞,用荧光定量PCR和Western　blot测定LOX-1、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达。结果　用脂多糖刺激HUVEC后,引起LOX-1、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,分别以血府逐瘀汤、补阳还五汤含药血清及阿托伐他汀干预后可显著抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达（P<0.05）,而四君子汤含药血清则未见显著影响（P>0.05）。结论　血府逐瘀汤、补阳还五汤可抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达,这可能是这两种中药复方防治动脉粥样硬化作用的机制之一。而四君子汤未见此作用。     

HBV-DNA阳性血清对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的研究HBV—DNA阳性血清对肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为对象，分别用健康人血清、HBV-DNA阳性血清刺激，用免疫组织化学检测角蛋白(CK)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α～SMA)和Ⅰ型胶原的蛋白表达。结果在HBV—DNA阳性血清直接作用下，肾小管上皮细胞免疫组化染色显示CK弱阳性，vimentin、α—SMA和Ⅰ型胶原增强。结论在HBV—DNA阳性血清直接作用下，体外培养的正常人近端肾小管上皮细胞系HK-2可发生上皮向间叶的表型转化。     

膜性肾病尿蛋白对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨膜性肾病尿蛋白对人肾小管上皮细胞凋亡存在剂量依赖关系。方法提取膜性肾病患者尿蛋白,进行蛋白成分分析、细菌内毒素试验、蛋白溶液的肌酐水平等质量鉴定后,试验组分别按1.0、2.0、4.0、8.0 mg/ml蛋白浓度刺激人肾小管上皮细胞48 h,空白组无蛋白,Ho-echst33258染色法观察人肾小管上皮细胞凋亡情况。结果膜性肾病尿蛋白由56.4%白蛋白、34.6%转铁蛋白、6.9%IgG组成。肌酐水平、内毒素均低于人体正常范围的下限。Hoechst33258染色法分析发现试验组与空白组之间,较大浓度尿蛋白组与较小浓度尿蛋白组之间人肾小管上皮细胞凋亡指数有显著差异(P<0.05)。结论肾小管上皮细胞凋亡程度与膜性肾病尿蛋白存在浓度依赖关系。     

乙型肝炎病毒DNA对肾小管上皮细胞凋亡的影响

乙型肝炎病毒(HBV)感染机体不仅引起肝脏功能和结构的改变，还可引起肝外多种脏器损伤。其中，HBV相关性肾炎最受关注，其发病机制尚不清楚。近来研究发现肾小管间质病变较肾小球病变在肾脏病进展中意义更为重要，而肾小管上皮细胞凋亡与增殖之间的不平衡可能足导致肾小管萎缩和肾功能恶化的重要机制之一。     

抗霉素诱导肾小管上皮细胞铁死亡的实验研究

目的:观察抗霉素诱导肾小管上皮细胞发生铁死亡(ferroptosis)的现象,初步探讨铁死亡参与急性肾损伤的病理生理机制。方法:以1、2. 5、5、10μmol/L抗霉素A(antimycin A)干预人近曲小管上皮细胞(HK-2) 2、4、8、16、24h。MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测细胞活性,透射电镜检测细胞线粒体形态,Western blot检测凋亡关键蛋白(caspase3)活化,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)。结果:HK-2细胞存活率随着抗霉素作用剂量和时间的增加而下降(P 0. 01)。2. 5μmol/L抗霉素A干预HK-2细胞2h后,细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放明显增加(P 0. 01),电镜观察发现铁死亡特征性改变,细胞线粒体膜密度增加,线粒体嵴减少,细胞内ROS含量明显增加(P 0. 05)。与抗霉素模型组相比,铁螯合剂去铁胺(deferoxamine)、铁死亡特异性拮抗剂Ferrostatin-1预处理HK-2细胞能明显减少抗霉素A损伤后LDH的释放、线粒体损伤及ROS的产生(P 0. 05),且该过程不伴有caspase3活化。结论:在缺氧诱导肾小管上皮细胞损伤过程中,铁死亡可能是肾小管上皮细胞较早出现的损伤方式;抑制细胞铁死亡的发生可以减轻缺氧对肾小管上皮细胞的损害。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

脂联素对高糖介导的大鼠近端肾小管上皮细胞单核趋化蛋白-1表达的影响

目的 体外实验研究脂联素对高糖刺激下的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）单核趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA及蛋白表达的影响.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM培养基体外培养NRK-52E细胞,分5组（每组4个样本,此实验重复4次）：A组：含5 mmol/L葡萄糖培养基对照组;B组：含30 mmol/L葡萄糖培养基组;C组：含30 nmol/L葡萄糖培养基＋1 mg/L脂联素组;D组：含30 mmol/L葡萄糖培养基＋5 mg/L脂联素组;E组：含30 mmol/L葡萄糖培养基＋10 mg/L脂联素组.以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法榆测比较各组细胞MCP-1 mRNA及蛋白表达的变化.组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果 A组细胞MCP-1 mRNA表达量为0.247±0.005,B组为0.691±0.009,显著高于A组（t=72.03,P＜0.01）;C组为0.425±0.013,显著高于A组（t=46.31,P＜0.05）;D组为0.307±0.012,与A组相近（t=73.24,P＞0.05）;E组为0.253±0.011,与A组无差异.不同浓度脂联素各组间比较差异亦具有统计学意义（F=37.15,P＜0.05）.A组MCP-1蛋白表达量为10.25±0.03,B组为58.47±0.02,显著高于A组（t=35.21,P＜0.01）;C组为35.86±0.05,较B组显著下降（t=48.26.21,P＜0.05）;D组为25.63±0.06,较B组显著下降（t=32.34,P＜0.01）;E组为21.53±0.03,较B组显著下降（t=42.26,P＜0.05）,但高于A组（t=64.28,P＜0.01）.不同浓度脂联素各组间比较差异亦具有统计学意义（F=53.15,P＜0.05）.结论 脂联素可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞MCP-1 mRNA及蛋白的高表达.     

MicroRNA-503 regulates high-glucose induced apoptosis of renal tubular epithelial cells by targeting Bcl-2

正Objective To investigate the expression vibration of microRNA-503(miR-503)and its effect on target gene Bcl-2,caspase enzyme activity and apoptosis of human renal tubular epithelial cells(HK-2)induced by high glucose,and to clarify the pathogenesis of renal tubular injury induced by high glucose.Methods HK-2 cells were cultured in normal glucose group(NG),mannitol hypertonic control group(MA),and high glucose group     

血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞Klotho基因表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)后Klotho、p53、p21mRNA及蛋白的表达和细胞凋亡情况,探讨高血压肾损害肾小管上皮细胞凋亡的相关机制。方法:AngⅡ按浓度梯度0(对照组)、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L分组培养NRK-52E24h,确定适宜干预浓度后,按时间梯度0h、6h、12h、18h、24h分组培养确定最佳干预时间。分别用RT-PCR和Western印迹法检测Klotho、p53、p21mRNA及蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3的活性;AnnexinV-FITC双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:随着AngⅡ干预NRK-52E浓度增高(10-10mol/L～10-6mol/L)及作用时间延长(6h～24h),Caspase-3活性逐渐增高,凋亡率逐渐增加(P<0.01)。与对照组比较,AngⅡ组Klotho表达明显下调,p53和p21表达上调,Caspase-3活性增高,凋亡率增加(P<0.01)。结论:AngⅡ可通过抑制Klotho表达,增加p53和p21的表达,活化Caspase-3,从而诱导肾小管上皮细胞发生凋亡,这可能是其在高血压肾损害肾小管细胞凋亡中的作用机制之一。     

羟基红花黄色素A对香烟提取物诱导A549细胞炎症因子表达作用的研究

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导的A549肺泡上皮细胞炎症介质表达升高的作用。方法:用CSE刺激A549肺泡上皮细胞建立损伤模型,细胞分七组:单纯HSYA组、Sham组、CSE组、CSE+HSYA低剂量组(1μmol/L)、CSE+HSYA中剂量组(4μmol/L)、CSE+HSYA高剂量组(16μmol/L)和CSE+阳性对照药红霉素(5μg/mL)组。以RT-qPCR技术检测白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞培养液中IL-6、IL-1β及TNF-α的蛋白水平表达;蛋白质印迹法(western blot)检测细胞p38MAPK磷酸化的水平。结果:与Sham组相比,CSE组IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平均明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组相比,CSE组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后CSE所诱发的炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组比较,CSE组的p38 MAPK的磷酸化水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后细胞p38 MAPK的磷酸化水平升高受到抑制,红霉素组也可见明显的抑制。结论:HSYA可抑制CSE诱导A549细胞的炎症因子的表达升高。     

去甲斑蝥素不依赖钙调蛋白磷酸酶信号通路抑制高糖刺激肾小管上皮细胞细胞外基质的表达

目的:在证实去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)能减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化和抑制高糖刺激的肾小管上皮细胞细胞外基质表达的基础上,观察NCTD对高糖刺激的肾小管上皮细胞钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CaN)通路的影响,探讨NCTD抗DN肾小管间质纤维化与其抑制CaN的关系。方法:常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染CaN siRNA,细胞分五组:(1)正常糖组(D-glucose5.5mmol/L);(2)高糖组(HG,D-glucose30mmol/L);(3)高糖+CaN siRNA组;(4)高糖+CaN siRNA+NCTD(5mg/L)组;(5)高糖+NCTD(5mg/L)组。采用Western-blot、免疫荧光和实时定量PCR,观察NCDT对HK-2细胞CaN/NFAT通路的影响,明确CaN siRNA的干扰效果。采用Western blot,检测NCTD对转染CaN siRNA后的HK-2细胞纤维连接蛋白(FN),胶原蛋白IV(Collagen IV,Col IV)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果:高糖可促进HK-2细胞CaNmRNA及蛋白的表达,NCTD可在基因及蛋白水平抑制CaN的表达(P0.05)。免疫荧光发现CaN下游活化T细胞核因子(NFATc)在正常对照组中存在于胞质,高糖刺激后细胞核内开始表达,高糖刺激30min后发生明显的核转位,NCTD能在一定程度上抑制核转位的发生,并能减少高糖刺激后核内NFATc蛋白的表达。转染CaN siRNA后,高糖刺激后HK-2细胞中CaN mRNA以及蛋白表达均降低,而FN,Col IV以及TGF-β1蛋白水平表达都明显增强(P0.05)。NCTD可抑制转染CaN siRNA后高糖刺激的HK-2细胞FN,Col IV和TGF-β1的表达。结论:NCTD能下调肾小管上皮细胞CaN表达,阻断CaN/NFATc信号通路;但NCTD抑制高糖刺激后肾小管上皮细胞细胞外基质的表达,与其阻断CaN/NFATc信号通路无关。     

Smad锚着蛋白在高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞外基质沉积中的作用

目的:阐明Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖诱导的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)细胞外基质(ECM)沉积中的作用及分子机制,探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略.方法:用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,通过Western Blot及实时定量PCR( Real-time PCR)检测纤维连接蛋白(FN)和I型胶原(Col I),进而检测转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化,通过细胞免疫荧光、Western Blot、Real-time PCR检测SARA的表达变化;分别转染全长SARA质粒[SARA(WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSRD)],检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及Col I表达的变化.结果:Western Blot及Real-time PCR结果显示,30mmol/L D-葡萄糖刺激后,HK-2细胞Col I蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高.高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调;Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调;高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化,但Smad3的活化时间更长.而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低,细胞免疫荧光结果亦证实高糖刺激后SARA表达下降.与高糖组相比,转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和 Col I表达下调;转染SARA (dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColI表达无明显影响.结论:高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下调;过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,抑制TGF-β31信号传导,从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌.     

Analysis of cellular senescence induced by lipopolysaccharide in pulmonary alveolar epithelial cells

In this work, it was examined the possibility of lipopolysaccharide (LPS) causing cellular senescence in lung alveolar epithelial cells. Then, it was clarified how this cellular senescence phenomenon is associated with oxidative stress effect induced by LPS and whether antioxidants could inhibit reduced cellular viability by oxidant stress effect of LPS. In cell viability using cell counting kit-8, exposure to LPS decreased cellular viability and induced growth arrest in a concentration-dependent manner. The pre-apoptotic concentration of LPS was determined by caspase activation using a Caspase-Glo 3/7 luminescence assay kit. This concentration of LPS caused morphologic characteristics shown in senescent cells and elevated senescence-associated β-galactosidase activity. In addition, lysosomal content associated with senescence was increased by LPS at the pre-apoptotic concentration. However, this concentration of LPS did not shorten the telomere length. Exposure to LPS resulted in the formation of hydrogen peroxide in a concentration-dependent manner. The ability of LPS to reduce cellular viability was inhibited by the presence of glutathione. This study revealed that LPS could induce cellular senescence in lung alveloar epithelial cells, and these phenomena were closely associated with hydrogen peroxide production by LPS. Taken together, it is suggested that LPS-induced cellular senescence may play an important role in limiting the tissue repair response after sepsis.     

The role and mechanism of macrophage activation induced by exosomes from high glucosetreated renal tubular epithelial cells

正Objective To investigate the role and mechanism of macrophage activation induced by exosomes from high glucose-treated renal tubular epithelial cells. Methods(1) The supernatant of renal tubular epithelial cells which were cultured in normal glucose control group(5. 5 mmol/L D-glucose) or high glucose group (30. 0