富亮氨酸胶质瘤失活基因在胶质瘤中的表达

目的 探讨胶质瘤组织富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)mRNA的表达及与细胞增殖活性之间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对30例脑胶质瘤组织、2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本进行半定量检测,同时采用S-P免疫组化法检测Ki-67标记指数.结果 脑胶质瘤组的LGI1 mRNA表达水平低于正常脑组织和脑膜瘤(P＜0.05).脑胶质瘤中,WHO Ⅳ级的胶质瘤LGll mRNA表达低于WHOⅡ级和Ⅲ级胶质瘤(P＜0.05),与Ki-67标记指数呈负相关关系(r=-0.621,P＜0.01).结论 LGI1基因的表达与Ki-67标记指数呈负相关,提示LGI1与胶质瘤的发生关系密切.     

Aurora-A基因在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的通过检测人脑胶质瘤患者肿瘤组织中Aurora-A基因的表达水平,探讨Aurora-A基因与胶质瘤的关系。方法采用荧光实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测了42例人脑胶质瘤组织和20例正常脑组织中Auro-ra-AmRNA表达水平,分析其表达水平与胶质瘤的关系。结果Aurora-AmRNA在胶质瘤组、Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组、Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组及对照组中的表达量分别为1.414±0.157%、0.380±0.067%、2.050±0.144%、0.040±0.004%。统计显示Aurora-AmRNA表达水平在胶质瘤组明显高于对照组(P0.05),且在Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组及Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组中均明显高于对照组(P0.05),同时Aurora-AmRNA表达水平在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组中显著高于Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组(P0.05)。结论Aurora-A基因在人脑胶质瘤组织中有高表达,说明Aurora-A基因在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用;Aurora-A基因在Ⅲ-Ⅳ级恶性程度高的胶质瘤组织中有更高表达,说明Aurora-A基因可能与胶质瘤的恶性程度存在密切关系。     

质粒介导外源性微小RNA干扰PTTG1表达抑制恶性人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 观察垂体瘤转化基因1(PTTG1)在恶性人脑胶质瘤U251细胞增殖和侵袭中的作用.方法 设计并合成2对靶向PTTG1 mRNA的寡核苷酸片段,将其连接pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体构建表达微小RNA真核载体MIR-1、MIR-2;将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定;脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,同时设转染阴性对照序列的阴性对照组(转染Neg组)和空白组;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析PTTG1 mRNA抑制效牢:Western印迹测定PTTG1蛋白的表达量改变:MTT法检测U251细胞增殖的改变:Matrigel侵袭实验检测U251细胞侵袭力的改变.结果 转染后,转染MIR-2组PTTG1 mRNA较空白组和转染Neg组下降为87.6%,PTTG1蛋白表达明显少于其他组:转染MIR-2组U251细胞不同时间点生长抑制率为10.7%～34.7%;Matrigel侵袭实验结果 示MIR-2组穿过人工基底膜U251细胞数减少.相对百分率为12.3%±1.0%,明显低于空白组(24.7%±1.4%)和转染Neg组(24.0%±2.0%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论人脑胶质瘤U251细胞的PTTG1表达可被质粒导入的外源性微小RNA有效抑制,进而抑制细胞增殖,逆转恶性胶质瘤U251细胞侵袭、浸润.     

RNA干扰XBP1基因表达对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 设计并合成干扰XBP1表达的小干扰RNA(siXBP1),转染人脑胶质瘤U251细胞,MTT 法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果 siXBP1可有效抑制U251细胞增殖,促进细胞凋亡,Western blot显示,siXBP1上调了U251细胞中促凋亡信号分子Bax及Caspase-3的表达,抑制了U251细胞中抗凋亡信号分子Bcl-2的表达。结论 下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达有望为脑胶质瘤的治疗提供理想的分子靶点。     

人脑胶质瘤hMIBP1基因的克隆及序列分析

目的从人脑胶质瘤中克隆与肿瘤分化相关基因human c-myc内含子结合蛋白1 (hMIBPI),并测定其全序列。方法收集病理确诊的恶性胶质瘤样品,提取总RNA后用RT-PCR法分段克隆,所得片段经测序和组装后,获得全序列。结果提取的人脑总RNA质量好、纯度高,适合RT-PCR分析;克隆的基因命名为hMIBP1,长度为7 341bp,含一编码2 446个氨基酸的完整读码框,GenBank数据库登录号为DQ231041。结论从人胶质瘤标本中获得hMIBP1基因,为hMIBP1基因功能研究奠定基础。     

人脑胶质瘤中CCND1基因的转录与表达

目的检测和分析人脑胶质瘤中CCND1基因的转录与表达,及其对肿瘤发生、发展的生物学意义.方法采用免疫组化、原位杂交法检测52例人脑胶质瘤及8例正常人脑组织中Cyclin D1 mRNA蛋白以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平.结果脑胶质瘤中CD1蛋白及mRNA呈过度表达,其标记指数和阳性率随肿瘤的恶性程度增高而增加.两者的标记指数之间、以及与PCNA标记指数之间均为显著正性相关.结论人脑胶质瘤中CCND1过度转录和表达,随胶质瘤临床病理分级增加而增高,同时与肿瘤细胞增殖状态密切相关,提示CCND1基因的异常转录和表达在胶质瘤的发生与发展中起着重要的促进作用.     

GDNF在人脑胶质瘤中的表达

目的　探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的表达与人脑胶质细胞瘤恶性程度的关系。方法　应用流式细胞仪检测GDNF在 5 9例脑胶质瘤中的表达水平 ,并与 2 0例正常脑组织对照。结果　GDNF在人脑胶质瘤和正常脑组织中均有表达 ,胶质瘤中的表达水平显著高于正常脑组织 ,且随着胶质瘤恶性程度的增加表达水平也增加。结论　GDNF可能作为一种重要的因素参与胶质瘤的发生、发展及分化 ,其可以作为胶质瘤的检测指标 ,提示胶质瘤的病理分级。     

Quaking基因在胶质瘤组织中的表达及临床意义

目的 探究Quaking(QKI)基因在胶质瘤中的表达特征和预后相关性。方法 联合使用中国脑胶质瘤基因组图谱和癌症基因组图谱计划探究QKI表达水平与胶质瘤患者WHO等级、年龄、IDH突变状态和染色体1p19q缺失的关系。然后比较QKI高、低表达组胶质瘤患者的总生存期之间的差异。使用功能富集分析探索QKI在生物学上的功能。应用TIMER分析QKI表达与胶质瘤免疫浸润细胞的关系。结果 QKI在WHOⅣ级胶质瘤患者中的表达水平显著降低(P <0.001); QKI在IDH突变型、染色体1p19q杂合缺失型和年龄≤41岁胶质瘤中的表达水平较高(P <0.001); QKI高表达组的生存时间高于低表达组(P <0.001),多因素COX回归模型分析结果显示,QKI高表达(P=0.038)是胶质瘤患者生存相关的独立影响因子;生物信息学分析结果显示,QKI相关表达基因功能主要富集在RNA剪接、细胞颗粒以及蛋白酶激活等生物学过程,与胶质瘤、Erb B和GnRH信号通路关系密切。在胶质瘤免疫微环境中,QKI与多种免疫浸润细胞关系密切(P <0.05)。结论 QKI被鉴定为与胶质瘤...     

人脑胶质瘤CXCL12基因的甲基化分析研究

目的 检测胶质瘤CXCL12基因启动子区的甲基化状态及其mRNA表达水平,以及受体CXCR4、DNA甲基转移酶等基因的mRNA表达情况,分析甲基化在CXCL12/CXCR4生物轴参与胶质瘤恶性进展中的调控机制.方法 半定量RT-PCR和实时定量PCR检测CXCL12、CXCR4、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B基闪在76例胶质瘤及10例正常脑组织中的表达情况;甲基化PCR检测CXCL12基因启动子区的甲基化状态.结果 (1)CXCR4 mRNA随胶质瘤恶性程度的增高而表达增加;(2)CXCL12基因在胶质瘤中的甲基化率为34.2%,甲基化率随胶质瘤恶性程度的增高而降低;(3)CXCL12基因的甲基化主要发生在低度恶性胶质瘤中,其甲基化状态与mRNA表达密切相关;(4)DNMT1、DNMT3A和DNMT3B在CXCL12基因甲基化胶质瘤中的表达明显高于未发生甲基化的胶质瘤.结论 CXCR4基因有望成为胶质瘤恶性程度的生物学标志;CXCL12基因启动子区的甲基化主要发生在低度恶性胶质瘤中,其CXCL12基因甲基化下调mRNA的表达;DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的过表达可能参与CXCL12基因甲基化的调控.     

GRIN1在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨谷氨酸受体亚基1（GRIN1）在脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法 计算机检索CGGA数据库和GEPIA数据库,下载脑胶质瘤基因表达谱数据和对应的临床数据,采用生信分析方法分析胶质瘤组织GRIN1表达变化及其与胶质瘤病人预后的关系。收集2017年1月至2020年12月手术切除脑胶质瘤标本67例,采用免疫组化染色方法检测GRIN1的表达,病人随访时间截止2021年8月1或病人死亡,记录病人生存情况。结果 生信分析结果显示,胶质瘤组织GRIN1表达水平明显降低（P<0.001）,而且,随胶质瘤病理级别增高而明显降低（P<0.001）;GRIN1高表达组胶质瘤病人中位生存期较低表达组明显缩短（P<0.0001）。67例胶质瘤分析结果显示,级胶质瘤GRIN1低表达率明显增高（P<0.05）,随胶质瘤病理级别增高而明显增高（P<0.05）;多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,GRIN1低表达是脑胶质瘤生存预后不良的独立危险因素（P<0.05）,生存曲线分析显示,GRIN1低表达组胶质瘤病人中位生存期较高表达组明显缩短（P<0.05）。结论 胶质瘤GRIN1呈低表达,随病理分级增高而明显降低,与胶质瘤病人预后不良的密切相关。     

靶向PTTG1基因的微小RNA转染后诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 构建表达靶向抑制垂体瘤转化基因1 (PTTG1)基因表达的RNA干扰载体microRNA,导入人脑胶质瘤细胞株U251中,研究靶向抑制PTTG1基因对U251细胞的凋亡诱导作用.方法 以PTG1为靶基因,根据pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体要求,设计针对PTIG1的microRNA序列,脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,采用荧光定量多聚酶链反应(PCR)以及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;膜联蛋白Ⅴ与碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双色标记的流式细胞仪法检测microRNA诱导的细胞凋亡,碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期阻滞.结果 实时荧光定量PCR以及Western blot检测显示,PTTG1基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;转染后,流式细胞仪检测分析显示,PTTG1基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 靶向PTTG1基因的重组microRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介导的RNAi显著靶向抑制了PTTG1基因在人脑胶质瘤细胞中的表达,并明显地诱导了脑胶质瘤细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.     

NDRG1基因在胶质瘤中的表达及意义

目的 分析NDRG1基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况. 方法 收集北华大学附属医院和第四军医大学西京医院神经外科自2006年2月至2007年6月手术治疗的83例胶质瘤患者的瘤组织(Ⅰ级19例、Ⅱ级22例、Ⅲ级25例、Ⅳ级17例)及12例正常脑组织,应用实时荧光定量PCR和蛋白印迹(Western blot)检测脑组织中NDRG1 mRNA和NDRG1蛋白的表达水平.结果胶质瘤组织中NDRG1 mRNA表达量和NDRG1蛋白表达量均明显低于正常脑组织,且PCR结果显示除Ⅱ、Ⅲ级比较无明显变化外,分级从Ⅰ级到Ⅳ级逐渐上升的过程中,NDRG1的表达逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 NDRG1在胶质瘤组织中呈低表达,而且其表达高低与胶质瘤的分级有关,提示其对胶质瘤的发生或发展有重要作用.     

组织蛋白酶B在人胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨组织蛋白酶B(CB)在人胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测57例人胶质瘤组织和24例正常脑组织中CB的蛋白表达。结果正常脑组织及人胶质瘤组织中CB蛋白的阳性表达率分别为92.98%(53/57)和16.67%(6/24),两者相比,差异有统计学意义(P<0.05);CB蛋白在正常脑组织及人胶质瘤组织中的相对表达量分别为(6.31±0.42)和(13.56±0.34),两者相比,差异亦有统计学意义(P<0.05);随着肿瘤级别升高CB蛋白的相对表达量亦升高(P<0.05)。结论CB蛋白表达与人胶质瘤的发生发展有关。     

胶质瘤CMTM 1、CMTM 6的表达及其临床意义

目的 探讨趋化素样因子超家族（CMTM）1、CMTM6表达水平与胶质瘤病人预后的关系。方法 收集2016年1月~2019年6月手术切除的胶质瘤组织96例和颅脑损伤内减压术中切除的非肿瘤脑组织40例（对照组）,采用免疫组织化学染色检测CMTM1、CMTM6的表达水平。随访24个月,记录胶质瘤病人生存情况。结果 胶质瘤组CMTM1和CMTM6高表达率[分别为64.58%（62/96）、67.71%（65/96）]明显高于对照组[分别为25%（10/40）、20.00%（8/40）;P<0.01]。胶质瘤组织CMTM1与CMTM6表达水平呈正相关（r=0.837,P<0.001）。本文96例随访2年,死亡37例,生存59例。多因素Cox比例回归风险模型分析显示,CMTM1过表达、CMTM6高表达是胶质瘤预后不良的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,CMTM1、CMTM6高表达组2年累积生存率（分别为50.15%、52.05%）明显低于表达组（分别为79.85%、84.95%;P<0.05）。结论 胶质瘤组织CMTM 1、CMTM 6呈高表达,与病人的不良生存预后有关。     

lncRNA SNHG16在人脑胶质瘤组织中的表达及其与病人预后的关系

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG16在人脑胶质瘤组织中的表达及其与病人预后的关系。方法 实时荧光定量PCR检测104例2013年9月至2015年1月本院病理科冻存的胶质瘤组织和2018年4月至2019年1月颅脑损伤内减压术中切除的40例正常脑组织lncRNA SNHG16的相对表达量。以SNHG16表达量的中位数为截断值,将胶质瘤病人分为高表达组和低表达组。随访截止时间为2019年6月,记录总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）。结果 胶质瘤组织SNHG16相对表达量明显高于正常脑组织（P<0.001）;高级别胶质瘤组织SNHG16相对表达量明显高于低级别胶质瘤组织（P<0.001）。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,SNHG16高表达是胶质瘤病人OS和PFS缩短的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示高表达组OS（中位数25个月,四分位数18~34个月）和PFS（中位数15个月,四分位数9~18个月）较低表达组（OS中位数35个月,四分位数20~42个月;PFS中位数19个月,四分位数12~20个月）明显缩短（P<0.05）。结论 人脑胶质瘤SNHG16呈高表达,与病人不良生存预后和肿瘤进展有关。     

RSF-1在胶质瘤组织中的表达及其与病人预后的关系

目的 探讨染色质重塑因子1（RSF-1）在人脑胶质瘤中的表达及其与病人预后的关系。方法 采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法检测2010年1月~2013年4月手术切除的121例胶质瘤组织和2017年6月~2018年9月颅脑损伤内减压术中切取的50例正常脑组织RSF-1的表达水平。胶质瘤病人随访时间截止至2019年4月。多因素Cox比例回归风险模型分析影响胶质瘤病人生存预后的因素。结果 免疫组化染色结果显示胶质瘤组织RSF-1高表达率（66.12%,80/121）明显高于正常脑组织（0%;P<0.001）。免疫印迹法检测结果显示,胶质瘤组织RSF-1蛋白表达水平明显高于正常脑组织（P<0.05）,而且,随胶质瘤级别增高,RSF-1蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,术前KPS评分<80分、WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级、术后未化疗和RSF-1高表达是胶质瘤病人总生存期和无进展生存期缩短的独立影响因素（P<0.05）。RSF-1高表达病人总体生存期[中位数（M）:13个月;四分位间距（IQR）:11~26个月]较低表达者（M:26个月;IQR:20~36个月）明显缩短（P<0.05）。 RSF-1高表达病人无进展生存期（M:11个月;IQR:7~23个月）较低表达者（M:21个月;IQR:16~28个月）明显缩短（P<0.05）。结论 RSF-1高表达可能预示着胶质瘤病人的不良生存预后     

人脑胶质瘤尿激酶型纤溶酶原激活因子基因表达及意义

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子（ｕＰＡ）基因在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法 采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分子杂交和免疫组方法检测４３例人脑胶质瘤和５例正常脑组织ｕＰＡ ｍＲＮＡ的蛋白表达,并与临床床生物学参数进行综合分析。结果 上述组织或细胞均可表达２．５Ｋｂ的ｕＰＡ ｍＲＮＡ转录物,高级另胶质瘤较低级别和正常脑组织ｕＰＡ ｍＲＮＡ表达水平明显增高（Ｐ〈０．０１）,低级别胶质瘤与正常脑组织的     

LGI1:一个与癫痫症和神经胶质瘤分级相关的基因

在2002年,人们首次证明了定位在10p24染色体中的富亮氨酸胶质瘤失活基因1(leucine-rich glioma inactivated gene 1,LGII)的基因突变会造成少见的特发性癫痫合症,即常染色体显性颞癫症(autosomal dominant lateral temporal epilepsy, ADLTE)[1-3].     

靶向沉默Wip1基因表达对胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的作用

目的 探讨靶向沉默Wip1基因表达对脑胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的影响。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U251,用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒感染U251细胞沉默Wip1基因表达,然后对U251胶质瘤细胞进行放疗干预。根据对U251细胞处理方法分为4组:Wip1基因沉默后放疗组（IR+Wip1组）、单纯Wip1基因沉默组（Wip1组）、单纯放疗组（IR组）和NC组（空载体病毒感染U251细胞）。CCK-8法检测细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞Chk1、Chk2 mRNA表达,免疫印迹检测细胞Chk1、Chk2蛋白表达。结果 U251细胞慢病毒感染后3~4 d,采用荧光显微镜观察,根据绿色荧光蛋白阳性表达判定感染效率,结果显示感染效率均90％以上。放疗后24、48、72、96、120 h,IR组和Wip1组增殖率均显著低于NC组（P<0.05）,而IR+Wip1组细胞增殖率明显低于IR组和Wip1组（P<0.05）。放疗后24 h,IR+Wip1组Chk1 mRNA表达明显低于Wip1组（P<0.05）,明显高于IR组和NC组（P<0.05）;IR+Wip1组Chk2 mRNA表达明显低于其他3组（P<0.05）。IR+Wip1组Chk1蛋白表达明显低于IR组和NC组（P<0.05）,Chk2蛋白表达低于其他3组（P<0.05）。结论 靶向沉默 Wip1 基因表达可抑制胶质瘤细胞的增殖,并可能通过抑制 Chk1 、 Chk2 的蛋白表达增加胶质瘤细胞对放疗的敏感性。