实时定量逆转录聚合酶链反应检测大肠癌患者术前外周血CK20 mRNA和CEA mRNA的临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CK20 mRNA和CEA mRNA的表达及其临床意义。方法采用实时定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术,对68例大肠癌患者及30例健康志愿者（对照组）术前外周血CK20 mRNA和CEA mRNA水平进行检测。结果在对照组中CK20 mRNA和CEA mRNA均无表达,而在大肠癌组中CK20 mRNA阳性表达率为45．6％,CEA mRNA阳性表达率为39．7％,二者联合检测阳性率为55．9％,较单项检测阳性率高（P〉0．05）,二者的表达与性别、肿瘤部位和肿瘤分化程度无明显相关,与肿瘤临床分期、淋巴结转移和肝脏转移明显相关。结论CK20 mRNA和CEA mRNA可作为大肠癌细胞血行播散的标志,联合检测有助于提高肿瘤微转移的检出率及判断预后。     

早中期结直肠癌患者外周血鸟苷酸环化酶mRNA和细胞角蛋白20mRNA检测及预后分析

目的探讨外周血鸟苷酸环化酶（GC．C）mRNA和细胞角蛋白20（CK20）mRNA水平与早中期结直肠癌患者肿瘤转移及预后的关系。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术,检测74例早中期结直肠癌患者术前外周血GC．CmRNA以及CK20mRNA的表达．并结合临床和病理各项指标以及术后随访资料,对患者肿瘤转移危险因素和预后进行统计学分析和评价。结果74例结直肠癌患者外周血GC．CmRNA阳性率为33．8％（25／74）,CK20mRNA阳性率为31．1％（23／74）;1、2、3年无瘤生存率分别为94．6％、82．4％和78．4％。单因素预后分析发现,外周血GC．cmRNA、CK20mRNA、肿瘤分化类型、有无肠系膜根部淋巴结转移、有无脉管瘤栓和术后是否接受化疗6因素与本组患者3年无瘤生存有关（均P〈0．05）;有无肠系膜根部淋巴结转移和有无脉管瘤栓是预后的独立影响因素（P〈0．05）。按肿瘤分期分层分析,外周血CK20mRNA和有无脉管瘤栓是Ⅲ期结直肠癌患者3年无瘤生存率的独立影响因素（P〈O．05）。结论检测外周血CK20mRNA、GC—CmRNA对于早期发现早中期结直肠癌转移可能具有重要的临床意义。     

膀胱尿路上皮癌患者外周血中MMP-7 mRNA的表达及意义

目的探讨膀胱尿路上皮癌患者外周血中MMP7mRNA的表达及其临床意义。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测36例膀胱尿路上皮癌患者外周血中MMP-7mRNA表达含量,以30例健康人作为对照。结果36例膀胱尿路上皮癌患者中,28例（77．8％）外周血MMP7mRNA表达阳性,阳性表达率与肿瘤大小、数目及初复发无明显相关性,但不同病理分期及分级间的阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．05）,肿瘤浸润和病理高级别者的阳性表达率明显高于肿瘤表浅和低级别者（P〈0．05）。30例对照组无阳性表达。结论检测膀胱尿路上皮癌患者外周血中MMP-7mRNA表达有助于识别高危患者、预测肿瘤浸润与转移和预后评估。     

胃癌患者术后化疗前后检测外周血细胞角蛋白20mRNA的临床意义

目的探讨将外周血细胞角蛋白20（CK20mRNA）动态变化作为临床评估胃癌化疗敏感性分子学指标的可行性。方法对31例胃癌术后行辅助化疗（FOLFOX4）患者．运用荧光定量RT—PCR检测化疗前后各时点外周血中CK20mRNA的表达．选取15位健康志愿者为阴性对照组。结果化疗前1周时检测,有25例（80．6％）胃癌患者表达CK20mRNA,6例（19．4％）始终不表达;其中16例（51．6％）升高,9例降低（29．0％）;CK20mRNA表达量为2．22±2．12。化疗开始时检测,CK20mRNA表达量已升高至2．96±2．27,两个时间点检测结果比较,t=2．10．P〈0．05,差异有统计学意义。化疗1周期后检测,有24例（77.4％）胃癌患者表达CK20mRNA．7例（22．6％）升高．17例（54．8％）降低,7例（22．6％）不表达;表达量为2．05±1．86,与化疗开始时的检测结果比较t=2．50,P〈0．05,差异有统计学意义。化疗前后CK20mRNA表达率比较,差异有统计学意义（χ^2=6．06,P〈0．05）。结论化疗可使外周血中CK20mRNA表达水平明显降低．动态定量检测化疗前后外周血中CK20mRNA可能成为评估胃癌术后化疗敏感性的重要指标。     

外周血甲胎蛋白mRNA和黑色素瘤抗原-1 mRNA联合表达与肝细胞癌术后复发转移的关系

目的 探讨外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA联合表达在早期发现肝细胞癌患者术后复发或转移的意义。方法 应用巢式逆转录聚合酶链反应技术分别在术前、术后1周和2个月检测142例行根治性切除的肝细胞癌患者外周血中AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达，随访时间从术后至22个月，中位随访时间为15．5个月。结果 外周血中MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期呈正相关：肿瘤病期越晚，外周血中肝癌细胞的检出率越高（χ^2=17．873，P〈0．01）。AFPmRNA和Mage-1mRNA阳性率均与癌结节数目、门静脉癌栓、肝内、外转移等临床参数显著相关（χ^2=11．510，χ^2=15、149，χ^2=11．653，χ^2=6．805，均P〈0.01），而与肝癌分化程度、肿瘤直径等无相关性（χ^2=1．513，χ^2=1．343，均P〉0．05）。术后55例患者出现复发或转移，其中38例患者外周血MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA持续阳性，14例由术前阴性转为阳性。而62例由术前阳性转为术后阴性者，随访中未见复发或转移。术后外周血AFPmRNA和／或MAGE-1mRNA阳性组中，有88．1％（52／59）的患者出现复发或转移，而阴性组中复发或转移者仅占3．6％（3／83），两组比较，差异有统计学意义（χ^22=103．817，P=0．000）。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达可能早期发现肝细胞癌术后复发或转移，可以作为评估预后的指标。     

实时定量荧光逆转录聚合酶链反应检测胃癌患者血CK20 mRNA及其意义

目的　研究胃癌患者外周血、肿瘤区域引流血中CK2 0mRNA的表达情况,探讨其临床意义。方法　用实时定量荧光逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法,对6 0例健康献血员外周血和5 5例胃癌手术患者的手术前外周血、术中肿瘤区域血及术后外周血进行检测。结果　健康人外周血中CK2 0mRNA均为低表达,胃癌患者术前外周血中CK2 0mRNA的表达率为4 5 % ,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者术前外周血中表达率高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P <0 .0 5 ) ;术中肿瘤区域引流血中CK2 0mRNA的表达率为6 4 % ,高于术前的4 5 % (P <0 .0 5 )。术前外周血中高表达的患者术后随访3～4 0个月中出现复发转移和死亡例数明显高于术前低表达的患者(P <0 . 0 5 )。结论　实时定量荧光RT PCR检测CK2 0mRNA可以评估胃癌血道微转移,有利于判断预后。     

外周血谷氨酰转肽酶mRNA-H亚型与AFP检测对评估原发性肝细胞肝癌病人术后预后价值的比较

目的深入探讨原发性肝细胞肝癌（HCC）病人外周血谷氨酰转肽酶（GGT）mRNA—H亚型表达与肝癌术后预后指标的关系，并与AFP比较，寻找评估肝癌预后更可靠的新指标。方法对78例HCC病人外周血应用逆转录聚合酶链反应方法检测GGTmRNA—H亚型；并运用放射免疫测定法检测AFP水平。对49例无门脉和（或）肝外转移的HCC病人进行随访研究。结果有肝内转移、门静脉癌栓及远处转移组其外周血GGT mRNA—H亚型阳性率显著高于对照组（P〈0．05）；在随访期内外周血GGTmRNA—H阳性组门脉及肝外转移的发生率比例明显高于阴性组（P〈0．05），而AFP阳性及阴性组的转移发生率相似。结论HCC病人外周血细胞GGTmRNAH亚型表达阳性者，术后出现转移的可能性高、预后差；GGTmRNAH亚型与AFP相比，有望成为评估肝癌预后更可靠的新指标。     

荧光定量PCR法扩增MAGE-1、MAGE-3及AFP基因联合检测肝癌病人外周血微小转移

目的探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA联合检测肝癌病人外周血中微小转移的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测86例原发性肝癌病人肝癌组织和外周血中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果86例原发性肝癌病人肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34．9％（30／86）、60．5％（52／86）和69．8％（60／86）；所有病人肝癌组织至少表达其中一种mRNA。外周血中阳性率分别为14．0％（12／86）、20．1％（18／86）和33．7％（29／86）。52．3％（45／86）的病人外周血至少检测到一种mRNA，较单一AFP mRNA检测阳性率明显提高（P〈0．05）。25例肝炎肝硬化病人及28例健康志愿者中未见阳性。阳性率与肿瘤TNM分期、门脉瘤栓、远处转移有关（P〈0．05）。与肿瘤大小、数目、分化程度、血清AFP水平无关（P〉0．05）。结论MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA联合检测肝癌血行微小转移较单一AFP mRNA检测灵敏度高。     

肝癌病人外周血及骨髓AFP mRNA的检测及意义

目的 通过检测AFP mRNA在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC)病人外周血和骨髓中的表达，探讨AFP mRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法 建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系（Nested-RT-PCR)，检测71例HCC、36例肝硬化、9例肝血管瘤、11例肝转移瘤、30例正常对照外周血AFP mRNA和19例HCC、15例血液病骨髓AFP mRNA。结果 71例HCC外周血中38例AFP mRNA表达阳性（53．5％），肝硬化、肝血管瘤、肝转移瘤和正常对照均为阴性。HCC外周血AFP mRNA检出率与血清AFP值无明显相关（P＞0．05），而与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移、肝外转移等临床参数有明显相关（P＜0．05）。19例HCC骨髓中9例AFP mRNA表达阳性（47．4％），15例血液病为阴性。骨髓AFP mRNA检出率与血清AFP值、肝内转移无明显相关（P＞0．05），与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移明显相关（P＜0．05）。外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性（P＜0．05）。结论 血循环AFP mRNA可作为CC微转移的早期检测指标。HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达与复发转移显著相关，且HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性，联合检测有助于提高结论的可靠性。     

检测细胞角蛋白19和20对结直肠癌微转移的诊断意义

目的探讨检测细胞角蛋白19（CK19）和CK20的表达对结直肠癌微转移的诊断意义。方法采用RT-PCR方法检测44例结直肠癌患者（结直肠癌组）及18例非恶性病变腹部手术患者（良性病变组）门静脉血和外周血CK19和CK20的表达。结果良性病变组患者门静脉血和外周血均无CK19或CK20阳性表达。结直肠癌组患者外周血和门静脉血中CK19和（或）CK20均阳性表达者34例（77．3％）。与良性病变组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结直肠癌组外周血CK19和CK20的阳性表达率分别为36．4％和52．3％．门静脉血则分别为59．1％和72．7％,高于外周血的阳性表达率（P〈0．05）：Ⅲ期结直肠癌患者CK19和（或）CK20的阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P〈0．05）。外周血CK19和（或）CK20阳性表达者术后转移或复发率61．5％,明显高于仅在门静脉血中CK19和（或）CK20阳性者的25．0％（P〈0．05）。结论外周血和门静脉血中CK19和CK20的RT—PCR检测是判断结直肠癌患者有无血行微转移的敏感和特异性诊断方法之一。     

膀胱癌患者外周血细胞角蛋白20mRNA检测及意义

目的　探讨膀胱癌患者外周血中特异性细胞角蛋白 2 0 (CK 2 0 )mRNA在诊断中的意义。　方法　膀胱癌患者 91例 ,半巢式逆转录聚合酶链反应检测其外周血有核细胞成分中CK 2 0mRNA含量 ,2 5例健康人作为对照。　结果　 91例患者中 37例 (41 % )外周血CK 2 0mRNA阳性表达 ,其中证实有转移的 2 0例中 1 7例 (85 % )阳性 ;对照组 2 5例均为阴性。外周血细胞CK 2 0mRNA的阳性率在有远处转移的病例中显著升高 (P <0 .0 1 )。　结论　检测膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA对早期发现膀胱癌细胞的血行播散有重要参考价值     

VEGF和CK20mRNA联合检测在大肠癌病人中的意义

目的探讨大肠癌病人外周血细胞角蛋白(CK20 mRNA)和肿瘤组织VEGF蛋白作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志的临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组织化学方法检测63例大肠癌术中抽取的外周血CK20 mRNA和手术切除肿瘤组织中VEGF蛋白的表达,并对所测结果进行分析和比较。结果高、中分化和低、未分化大肠癌病人的CK20 mRNA和VEGF的阳性率分别为30.0%、50.0%和84.6%、92.3%,均有非常显著性差异(P<0.01)。DukesA、B期和C、D期大肠癌病人CK20 mRNA和VEGF的阳性率分别为32.4%、56.8%和53.8%、61.6%,无显著性差异(P>0.05)。CK20 mRNA与VEGF作为单项指标测定的阳性率分别为41.3%和58.3%,联合检测时阳性率升至69.8%,有非常显著性差异(P<0.01)。结论大肠癌病人外周血CK20 mRNA和肿瘤组织VEGF可作为衡量术后复发转移的有效指标;两者联合检测时,敏感性显著提高。     

大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达及其意义

目的　探讨大肠癌患者外周血CK2 0mRNA的表达及其意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌患者术前、术后外周血及 2 0例大肠癌患者新鲜癌组织标本中CK2 0mRNA的表达 ,另以 2 0例健康成年自愿者作对照。结果　 4 2例大肠癌患者外周血CK2 0mRNA呈阳性表达者术前为 19例(45 .2 4 % ) ,术后为 14例 (33.33% ) ;2 0例大肠癌患者新鲜癌组织中CK2 0mRNA表达均为阳性。而正常对照组2 0例外周血CK2 0mRNA表达均为阴性。且大肠癌外周血CK2 0mRNA阳性表达与组织学类型无关 (P >0 .0 5 ) ,但与有无淋巴结转移、肝转移及Dukes分期有关 (P<0 .0 5 )。结论　检测外周血中CK2 0mRNA表达将有助于大肠癌的早期诊断、预后的判断及治疗方案的制定。     

大肠癌术中门静脉血CK20 mRNA检测临床意义的探讨

目的检测大肠癌患者门静脉和外周血中细胞角蛋白(CK20)mRNA,探讨它作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志的临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测63例大肠癌患者术中抽取的门静脉和外周血中CK20 mRNA和癌胚抗原(CEA)表达的阳性率,并对所测结果进行分析和比较。结果Ducks A,B期和Ducks C,D期患者门静脉血CK20 mRNA阳性表达均明显高于外周血,差异有统计学意义。随着病情进展,门静脉和外周血中CK20 mRNA表达均显著提高(65% vs 96%;33% vs 54%),但仅门静脉结果差异有统计学意义(P<0.005,χ2=8.65)。比较不同时期不同部位CK20 mRNA与CEA表达差异时,除Ducks A,B期患者门静脉血中CK20 mRNA阳性率较CEA阳性率为高且具有统计学意义外,Ducks C,D期门静脉组和各期外周血组中CK20 mRNA阳性率和CEA阳性率差异无统计学意义。结论大肠癌患者门静脉中CK20 mRNA含量高于外周血,门静脉和外周血中CK20 mRNA的阳性表达可随病情进展而增加,因此可作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志,应用于手术后预后判断。     

巢式RT-PCR方法检测胃癌病人周围静脉血癌细胞及其意义

探讨胃癌患者外周血癌细胞的检测及其意义。方法：以CK19作指标,用巢式RT-PCR方法检测42例胃癌患者术前外周血中癌细胞。结果：健康人外周血中不能检测出CK19mRNA表达,用巢式RT-PCR方法检测外周血中胃癌细胞的敏感性可达1/106;42例胃癌病人外周血中检测出CK19mRNA阳性表达13例,阳性率30.9%,阳性结果与肿瘤大小、浸润深度和肿瘤分期密切相关。结论：巢式RT-PCR方法检测胃癌外周血癌细胞具有高度的特异性和敏感性,检测外周血癌细胞有助于判断肿瘤的进展程度。     

检测膀胱癌患者外周血中CK-20mRNA的临床意义

目的 :探讨膀胱肿瘤患者外周血中CK 2 0mRNA表达的临床意义。方法 :采用RT PCR技术检测 32例膀胱癌患者手术前、10例手术后及 10例健康者外周血标本中CK 2 0mRNA的表达。结果 :在手术前外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 15 .6 % (5 / 32 ) ;在手术后外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 2 0 .0 % (2 / 10 ) ,其中 1例术前外周血CK 2 0mRNA表达阴性 ,手术后变为阳性 ;健康者外周血均无CK 2 0mRNA表达。膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率与肿瘤大小、数目无显著关系 (P >0 .0 5 ) ,但随着肿瘤分级、分期的增加 ,CK 2 0的检出率似有增加的趋势。结论 :以RT PCR技术检测膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA的表达 ,可早期诊断和监测膀胱肿瘤细胞血行微转移。     

联合检测大肠癌患者外周血CK20 mRNA和CEA mRNA的临床意义

目的　探讨同时检测两种肿瘤标志物与大肠癌预后的关系。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法联合检测 10 2例行根治性手术的大肠癌患者外周血中细胞角蛋白 (CK)2 0mRNA和癌胚抗原 (CEA)mRNA ,并随访 3年。结果　大肠癌组CK2 0mRNA、CEAmRNA的阳性表达率分别为 60 .78% (62 /10 2 )和 64 .71% (66/10 2 ) ,均显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ;CK2 0mRNA和CEAmRNA均阳性表达组患者的 3年复发率和死亡率分别为 5 5 .0 0 %和 5 0 .0 0 % ,显著高于CK2 0mRNA和CEAmRNA均阴性表达组及单一阳性表达组 (P <0 .0 1)。结论　CK2 0mRNA和CEAmRNA均阳性表达是大肠癌患者外周血存在癌细胞的重要证据 ,提示预后不良。