脱细胞骨软骨支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外的复合

目的测定脱细胞和脱钙处理的脱细胞骨软骨支架的细胞相容性及该支架与软骨细胞体外复合培养的生物学特性和黏附关系,以探讨脱细胞骨软骨支架作为软骨组织工程支架的可行性。方法采用自制脱细胞骨软骨支架与软骨细胞体外复合培养,用细胞增殖度法测定脱细胞骨软骨支架的细胞相容性,并行电镜观察其相互黏附关系。结果脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验中,软骨细胞可贴附于材料上生长增殖,并分泌细胞外基质。结论细胞增殖实验显示脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验显示脱细胞骨软骨支架可与软骨细胞良好复合,适于软骨细胞贴附生长。     

关节软骨的细胞凋亡

目的 观察正常及关节炎时关节软骨是否发生细胞凋亡及其可能的意义。方法 采用光镜、电镜观察软骨细胞形态,以琼脂糖凝胶电泳检测软骨细胞特异ＤＮＡ的梯形带,以激光共聚焦显微镜观察细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ动脉变化。结果 骨性关节炎及风湿性关节炎患者的关节软骨细胞经体外培养３ｄ后,光镜及电镜下均可见处于正常分化期的软骨细胞,而未经培养直接分离的部分软骨细胞可见细胞凋亡早期形态学改变。此外,体外培养的牛正常软骨     

牙胚细胞与PLGA支架体内复合培养的实验研究

目的 摸索胎鼠牙胚细胞体外培养所需的条件及细胞-支架复合物在裸鼠体内培养的条件.方法 取17日龄的胎鼠第一磨牙牙胚组织消化成细胞悬液,然后种植于PLGA支架上,再将细胞支架复合物埋植于裸鼠皮下,术后40d后取出细胞支架复合物,观察细胞与支架的吸附及生长,繁殖情况.结果 细胞呈单层生长;细胞为多角形,紧密镶嵌成铺路石状;牙胚细胞染成蓝色,支架组织染成红色,牙胚细胞较散在分布,细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌.结论 牙胚细胞支架复合物在裸鼠体内能够成活,细胞与支架紧密贴附,生长正常并有基质分泌,表明PLGA是牙组织工程良好的支架材料.     

关节软骨损伤组织工程修复的实验研究

目的：（1）研究不同体外培养时间软骨的生物学特性，探讨运用于软骨组织工程中软骨种子细胞的最适宜培养时间和条件。（2）应用组织工程技术探讨运用自体关节软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（3）应用组织工程技术探讨应用同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（4）研究修复关节软骨缺损的软骨细胞来源。方法：（1）取新西兰兔关节软骨细胞体外培养，观察软骨细胞的形态学变化，生长曲线，酸性粘多糖及胶原分泌情况。（2）建立关节软骨缺损模型，应用自体关节软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（3）应用同种异体软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（4）应用3H－TdR放射自显影方法，确定修复关节软骨缺损的细胞来源。结果：（1）体外培养第四代软骨细胞的增殖能力达到高峰，而第二代软骨细胞分泌基质能力最强。（2）自体或同种异体软骨细胞复合Pluronic修复关节软骨缺损，12周后缺损表面较平滑，与正常软骨界面愈合较好，MASSON三色染色显示胶原分布已较均匀， 骨细胞呈柱状排列，II型胶原在细胞周围阳性表达，而空白对照和材料对照组未见明显修复。（3）3H－TdR放射自显影方法证实修复软骨组织的细胞来源于体外移植细胞，软骨细胞植入体内早期仍进行有丝分裂，而在中后期软骨细胞以分泌基质为主，植入的细胞与周围软骨细胞间存在物质交换。结论：（1）软骨细胞在体外培养2－3周左右是作为软骨组织工程种子细胞的最佳时机。（2）自体或同种异体组织工程化软骨是修复关节软骨缺损的较好方法。（3）组织工程化软骨修复关节软骨缺损的细胞来源于体外移植的软骨细胞。     

聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯支架复合同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯(PHBV)三维多孔材料作为软骨组织工程支架的可行性及有效性.方法:采用"压片-热处理-粒子析出技术"制备PHBV多孔支架.体外分离培养软骨细胞后接种到PHBV支架体外培养4周,期间扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况,然后与单纯PHBV支架同时植入兔膝关节软骨缺损区继续培养4、8、12周后取材,分别行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化观察.进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果.结果:电镜观察示软骨细胞在支架上黏附、增殖良好并能分泌细胞外基质,组织学观察示PHBV支架浅层有新生软骨组织形成,于4周后开始形成透明软骨样结构且表面基本平整与宿主整合良好,组织学切片上可见类软骨形成并分泌甲苯胺蓝异染的软骨基质和软骨特异性Ⅱ型胶原. 结论:PHBV可以作为软骨组织工程支架材料,能够用于再生修复软骨的缺损.     

细胞-支架复合体构建及其异体移植修复关节软骨缺损的形态学观察

目的 探讨应用组织工程技术进行异体移植修复关节软骨缺损的有效性和可行性。方法 采用动态倒置显微镜与扫描显微镜观察及大体，组织学和免疫组织化学观察方法，以优化获取的单层传代培养幼兔关节软骨细胞及结构与性能优化的CPPf(Calcium polyphosphate fibers,CPPf)/PLLA(poly-L-lactic acid,PLLA)自制支架复合材料，进行细胞－支架复合体体外构建与培养及其异体移植修复关节软骨缺损的病理形态学实验研究。结果 将适宜密度培养细胞种植于支架材料中，细胞密集，分布均匀，经一定时间体外培养，基种植细胞与支架材料粘附，生长繁殖并分泌细胞外基质，支架材料保持培养前的外形与内部微结构。其细胞－支架复合体异体移植修复关节软骨缺损的病理形态学特征为：（1）修复后的关节面光滑，与周围组织整合良好；（2）软骨细胞呈柱状排列；（3）Ⅱ型胶原及硫化糖胺多糖在空间上分布均匀；（4）软骨下板得以重建;(5)修复组织与其下方骨质紧密结合；（6）支架材料逐渐降解吸收。结论 应用细胞－支架复合体异体移植进行关节骨缺损修复，具有种植细胞来源广泛，可根据缺损大小和形状设计支架外形，使缺损完全生物学再上修复的优点，这一组织工程技术为关节软骨缺损完全再生修复提供了一条新的有效途径。     

同种异体软骨细胞复合PLGA支架修复关节软骨缺损的免疫学观察

目的应用同种异体软骨细胞移植修复兔膝关节软骨缺损,评估术后免疫学表现及其修复效果。方法供体为1月龄新西兰兔1只,取其膝关节全层软骨片,0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶消化,分离培养软骨细胞。受体为4月龄新西兰兔30只,暴露股骨髁前面关节面,用钻在股骨内髁制作直径4mm、深2mm（达髓腔）的关节软骨缺损模型。软骨细胞移植组植入体外培养12d的PLGA软骨细胞复合体,PLGA移植组只植入PLGA,假手术组只做皮肤切开手术。术后不固定患肢,兔笼中活动。术前、术后3、5、7、12周分离受体外周血淋巴细胞,检测其与异体软骨细胞和PLGA混合后的刺激指数（stimulation index,SI）;术后5、7、12周取修复区软骨及软骨下骨观察局部组织学反应。结果软骨细胞移植组术后检测到淋巴细胞增殖,移植物局部见到淋巴细胞浸润。结论同种异体软骨细胞复合PLGA移植存在免疫反应。     

聚己内酯与左旋聚乳酸共聚物支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外复合的实验研究

目的:测定聚己内酯与左旋聚乳酸共聚物(poly-caprolactone-b-poly L-lactide,简称PCL-b-PLLA)支架的细胞相容性,探讨PCL-b-PLLA作为软骨组织工程支架的可行性. 方法:用MTT比色法测定PCL-b-PLLA支架不同浓度浸提液与L929小鼠成纤维细胞的相容性,观察测定吸光度(A值), 对支架与软骨细胞复合体行电镜观察. 结果:实验组与对照组的A值相比差异无显著性意义(P>0.05), PCL-b-PLLA支架对细胞增殖无明显促进或抑制作用, 不同浓度支架浸提液的细胞毒性评级均为0级, 电镜显示软骨细胞完全平铺于支架的表面,细胞表面有大量微小突起和基质分泌. 结论:体外复合实验显示PCL-b-PLLA支架具有良好的生物相容性,适于软骨细胞贴附生长, 可作为软骨组织工程支架.     

脂肪干细胞复合PLGA体外诱导成软骨的实验研究

目的 探讨脂肪干细胞接种于PLGA支架复合培养体外诱导成软骨的能力.方法 收集脂肪干细胞,调整细胞悬液密度为4.0×1010>/L,接种在PLGA支架材料上进行复合,在特定培养基条件下,对脂肪干细胞/PLGA进行成软骨诱导,于诱导3周后应用扫描电镜观察,藩红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测成软骨表型;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因表达情况.结果 脂肪干细胞接种子PLGA材料后,复合体表面逐渐光滑润泽,质地逐步增韧,体外诱导后细胞/PLGA支架复合体基本保持原状;3周时取材行扫描电镜观察,可见细胞在材料表面附着生长,基质分泌明显,连串成片;石蜡切片藩红O/固绿染色可见诱导组细胞胞外基质分泌旺盛,和支架材料连接成片,呈强阳性红染;胞外基质Ⅱ型胶原免疫组织化学着色阳性;RT-PCR检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因均阳性表达.结论 脂肪干细胞能够和PLGA复合培养,在特定诱导培养基条件下可以向软骨方向分化,形成类软骨样组织.     

人胎关节软骨细胞体外培养的生物学特性

目的：研究软骨组织工程中传软软骨细胞与原代的差异，方法：用5个月人胎关节软骨分离培养细胞，观察细胞存活率，贴壁率，生长曲线和组织形态学的改变。结果：（1）软骨块在4℃下，3天内细胞存活率可达93．4％－97．6％。（2）原代细胞为圆形或三角形；第4代有一半转变成梭形，到第6代全部变为长梭形。（3）传代细胞贴壁时间（2－3h)短于原代（4－7h)。玻璃瓶内贴壁率传代细胞为78．7％－85．5％，原代8．8％。（4）生长曲线表明，从原代到第4代都有高增殖力；到第8代时增殖降低；到第12代几乎丧失细胞增殖。结论：软骨块4度冷藏，3天内对细胞存活率无明显影响。第4代细胞壁壁快，增殖 ，适于作为组织工程用细胞，第8代以后不适合。     

钻孔修复兔关节软骨缺损的实验研究

为了观察软骨缺损的修复过程，比较不同数目钻孔术对软骨缺损的修复效果，用中国白兔２４只，在股骨关节面造成６ｍｍ×８ｍｍ全层软骨缺损，分别施行１０孔和５孔钻孔术，术后４、８周取材，做组织学及电镜观察，并进行评估。结果表明：１０孔、５孔和对照组的优势修复组织分别为类透明软骨、幼稚软骨加纤维软骨和纤维组织。修复组织厚度１０孔和５无显差异。修复组织覆盖缺损的面积，１０孔〉５孔〉对照组。初步结论：软骨下骨钻     

兔关节软骨缺损修复的实验研究

目的观察自制猪耳廓的脱细胞软骨基质(Extracellular Cartilage Matrix ECM)复合自体软骨细胞对兔膝关节软骨5mm的缺损的修复作用。方法新西兰大白兔60只,随机分为3组,均制备股骨下端滑车处直径为5mm、深4mm的软骨缺损。实验组(A组)：用自制ECM复合自体培养的软骨细胞修复兔关节软骨缺损,实验组(B组)：单纯自制ECM修复兔关节软骨缺损,于4、8、12、24周后分别与空白对照组(C组)相比较,通过大体形态学观察、组织学检查、胶原含量的测定,观察EcM修复软骨缺损的能力。结果第12、24周时,A组修复效果最好,修复组织填充于软骨缺损处,与正常组织连接紧密,分界较为平滑;B组修复效果次之;C组最差,各阶段缺损少量的新生软骨,修复组织多为纤维组织。结论自制的ECM与自体软骨细胞复合具有较强的软骨生成能力,可作为异体软骨移植的一种替代物。     

孔直径不同的软骨下骨钻孔术对兔软骨缺损修复的影响

为了观察钻孔修复关节软骨缺损的过程，比较不同孔直径钻孔术对软骨缺损的修复效果，用中国白兔２４只，在股骨关节面造成６ｍｍ×８ｍｍ全层软骨缺损，分别施行孔直径１ｍｍ和１．５ｍｍ的钻孔术，术后４、８周取材，做组织学光、电镜观察并进行评估。结果表明：①两组的优势修复组织均为类透明软骨、幼稚软骨和纤维软骨，对照组为纤维组织。②修复组织厚度，１ｍｍ孔比１．５ｍｍ孔较厚，０．１〉Ｐ〉０．０５。③修复组织覆盖缺损     

3D—FFE—SPIR与3D—FFE—WATS序列在膝关节软骨成像中的对比研究

目的：探讨膝关节MR软骨成像优化序列。方法：采用3D—FFE—SPIR、3D—FFE—WATS序列对16名健康志愿者行矢状位扫描,计算并比较两种序列下关节软骨、骨髓、滑液、肌肉信噪比（SNR）以及软骨与周围组织间的对比噪声比（CNR）。另外,对52个于检查后1周内做了关节镜（或者手术）检查与治疗的膝关节为观察对象,以关节镜诊断结果为金标准,计算并比较两序列诊断膝关节软骨病变的敏感性、特异性及准确性。结果：两种序列（3D—FFE—SPIR、3D-FFE—WATS）下膝关节软骨SNR值分别为152．07±24．91、131．08±29．21,其数据差异无统计学意义（P〉0．05）;两序列下骨髓SNR分别为17．27±2．78、19．9±1．95,其数据差异无统计学意义（P〉0．05）;两序列下滑液SNR分别为73．03±12．25、76．59±12．48,其数据差异无统计学意义（P〉0．05）;两序列下肌肉SNR分别为90．86±18．62、93．1±18．92,其数据差异无统计学意义（P〉0．05）。两序列下软骨／骨髓CNR分别为135．39±22．26,121．88±27．40,其数据差异无统计学意义（P〉0．05）;不同序列下软骨／滑液CNR分别为79．64±14．32、75．22±18．33,数据差异无统计学意义（P〉0．05）;两序列软骨／肌肉CNR分别为61．81±9．81、38．91±11．68,数据差异有统计学意义（P〈0．05）。3D—FFE—sPIR序列诊断关节软骨病变的敏感性、特异性、准确性分别89．4％、91．7％、93．6％;3D—FFE—WATS序列诊断关节软骨病变敏感性、特异性、准确性分别为90．2％、98．8％、95．2％。结论：3D-FFE—SPIR及3D—FFE—WATS序列是显示膝关节软骨和诊断关节软骨病变的优秀序列,3D—FFE-WATS序列扫描时间比3D-FFE—SPIR序列短、对磁场变化不敏感,因此是膝关节软骨成像的优化序列。     

膜引导组织再生术在修复面神经缺损中应用的实验研究

目的观察膜引导组织再生术在修复面神经缺损中的作用。方法将膜引导组织再生术用于家兔面神经缺损模型,以自体神经移植为对照,通过电生理学和组织病理学方法,观察膜引导组织再生术修复面神经的效果。结果膜引导组织再生术除在早期修复速度方面略有差距外,可获得与自体神经移植相同的效果。结论膜引导组织再生术可以修复面神经缺损并获得良好的效果。     

人体肋软骨的电镜观察

对２０例１５￣２２岁的人体肋软骨,在耳廓再造移植前后进行了电镜观察,并测量了肋软骨的长宽、厚度。间隔时间为３０、６０、１２０、１８０ｄ。结果表明：肋软骨为纤维软骨,移植后有正常软骨的生命活力,但软骨的长、宽、厚度无增长趋势。     

软骨下骨钻孔术对兔软骨缺损修复的远期效果观察

目的　观察软骨缺损的修复过程 ,比较不同数目钻孔术对软骨缺损修复的远期效果。方法　用中国白兔 4 0只 ,在股骨髁关节面造成 6mm× 8mm全层软骨缺损 ,分别施行 10孔及 5孔钻孔术 ,孔径1mm ,于术后 12周及 13个月取材 ,做组织学及电镜观察 ,并进行评估。结果　 (1) 12周时 10孔、5孔和对照组的修复组织中类透明软骨分别占 70 %、5 0 %、0 % ;13个月时 10孔、5孔和对照组的修复组织中类透明软骨分别占 90 %、10 0 %、0 %。 (2 )修复组织厚度 :12周时 10孔及 5孔组均明显高出毗邻软骨 ,且 10孔明显高于 5孔 ;13个月时 10孔与 5孔无显著性差异 ,且已接近毗邻软骨厚度。 (3)修复组织覆盖缺损的面积 :12周时 10孔 >5孔 >对照组 ;13个月时 10孔与 5孔无显著性差异 ,但二者均明显大于对照组。结论　软骨下骨钻孔对关节软骨缺损修复的远期效果良好 ,能长期适应关节的生理运动和功能负重 ,10孔与 5孔的远期修复效果无显著性差异。     

关节康复散药理,毒理学研究

在小鼠背部Ｌ１－Ｓ１，贴敷２．７３ｇ／ｋｇ关节康复散，发现本品可明显对抗急性渗出性炎症（Ｐ＞０．０５）和慢性增殖性炎症（Ｐ＞０．０５），明显加快微血流速度（Ｐ＞０．００１），改善微循环障碍（Ｐ＞０．００１）并能提高痛阈（Ｐ＞０．０Ｄｌ），镇痛作用明显（Ｐ＞０．０１），并可持续４ｈ。本品对完整及破损皮肤均无刺激性。用２０ｇ／ｋｇ关节康复散分别经家兔完整及破损皮肤外敷时，未观察到局部吸收毒性和全身中毒的改变。     

小脑组织移植的实验研究

应用不同胎龄的大鼠小脑组织(E_(15)和E_(18))植入受体鼠小脑,成活1～2个月后处死动物。光镜下观察移植物成活情况。移植物总成活率为35％。E_(15)成活率(60％)高于E_(18)(10％)。所有成活的移植物可根据细胞结构的特点易与受体脑组织区别,镜下可见到良好分化及成熟的神经细胞。