细粒棘球蚴粗抗原的免疫纯化方法及其在免疫诊断中的应用

采用免疫过筛法将细粒棘球蚴囊液粗抗原（ＥｇＣＦ）和头节抗原（ＥｇＰ）与正常人混合血清中杂抗体结合而除去产生非特异反应的粗抗原部分,得到部分纯化的抗原ＥｇＣＦ２,ＥｇＰ２,纯化前后的抗原在酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）中对４５例细粒棘球蚴病（ＣＥ）的诊断阳性率分别为：ＥｇＣＦ９３．３％,ＥｇＰ９５．６％,ＥｇＣＦ２９１．１％,ＥｇＰ２９３．３％,它们的敏感性无显差异。     

棘球蚴B抗原序列的不均一性

棘球蚴B抗原是一种耐热的160kDa脂蛋白,为棘球蚴囊液的主要抗原。有约90％细粒棘球蚴病人和约40％泡状棘球蚴病人有其抗体,说明这两种棘球蚴均有B抗原。经免疫荧光检测它主要存在于原头节的表皮细胞,也存在于囊液中,表明它是一种分泌性抗原。 最近已从英国羊获得的细粒棘球蚴中分     

SPA-ELISA评价三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值

本文采用SPA-ELISA法评价了三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值,用三种抗原检测了41例包虫病患者血清中特异IgG抗体的水平,它们的阳性率分别为:牛源细粒棘球蚴液粗抗原86.0％,半饱和硫酸铵法纯化抗原91.4％,氯化镁—磷钨酸法纯化抗原92.3％,两种纯化抗原与粗抗原的阳性检出率相比,经统计学处理具有显著差异,认为西北地区牦牛体内寄生的细粒棘球蚴囊液抗原不乏抗原活性;氯化镁—磷钨酸法和半饱和硫酸铵法是两种简便易行,纯化效果理想的抗原纯化方法,宜于在基层推广应用。     

抗细粒棘球蚴单克隆抗体在检测包虫病中的应用

本研究利用ＢＡＳ的生物放大作用［１］，应用生物素－抗生物素抗原斑点试验（ＡＢＣ－ＡＳＴ）［２，３］，将抗细粒棘球蚴单克隆抗体用于检测包虫病患者血清抗原。材料与方法１试剂和药品１．１抗细粒棘球蚴单克隆抗体细胞株诱生腹水由本室采用细胞融合方法，获得稳定分...     

细粒棘球蚴细胞系细胞代谢抗原检测

体外培养细粒棘球蚴细胞并培育成传代细胞系,将有可能不受限制地提供寄生虫抗原,并用于诊断、免疫预防研究［１,２］。本实验对人源细粒棘球蚴细胞系（１３Ｇ－５）进行特异表达功能检测。１　材料与方法１．１　材料　检测样品为人源细粒棘球蚴１３Ｇ－５细胞系第１６代细胞的细胞代谢产物。检测用细粒棘球蚴病人血清、羊抗细粒棘球蚴囊液ＩｇＧ、ＨＲＰ—兔抗羊包囊液ＩｇＧ等均由卫生部包虫病基地李雄副研究员提供并协助检测。１．１　方法　双体抗夹心ＥＬＩＳＡ法。采用两种不同的第一抗体进行包被,具体为：１．２．１　细粒棘球蚴…     

用斑点免疫结合试验比较三种棘球蚴液抗原在诊断泡球蚴病上的价值

本文用人、羊、牛肝棘球蚴液抗原对４３例泡球蚴病,８１例非泡球蚴病患者和７５例健康人进行了斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）。结果显示：人、羊、牛棘球蚴液抗原检测的阳性率各为１００％、１００％和８６．０％,前二者与后者差异显著（Ｐ均＜０．０５）;假阳性率分别为０．６％、０．６％和０％,三者无显著差别。泡球蚴患者抗体滴度在１∶４００～１∶６４００范围者,前两者均占９７．７％,显著高于后者的５６．１％（Ｐ均＜０．０１）。抗体几何平均滴度前两者分别是后者的５．１８倍和４．６２倍,差异均有高度显著性（Ｐ均＜０．０１）。说明在诊断泡球蚴病时宜用前两种抗原。     

青海省治多县棘球蚴病流行病学调查报告

【提要】 2006年7月在青海省治多县对1岁以上人群进行调查，间接红细胞凝集试验（IHA）检测棘球蚴抗体阳性率为4.5%（42/933）、ELISA的阳性率为8.2%（76/931），B超检查（结合血清学检测和临床表现判断）患病率为3.4%（33/979），其中细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患病率分别为3.2%（31/979）和0.2%（2/979）。用剖检法检测高原鼠兔棘球蚴感染率为15.1%（14/93），其中1例病变脏器经分子生物学鉴定确认为石渠棘球蚴病。用ELISA检测粪便棘球绦虫抗原阳性率，犬粪为6.2%（12/193），狼粪为35.7%（5/14）。认为治多县为多种棘球蚴病混合流行区。     

云南腾冲市棘球蚴病线索调查

目的了解腾冲市棘球蚴病的感染现状,为制订棘球蚴病防治策略提供依据。方法以2011～2017年报告病例为线索,选取报告病例所在自然村及毗邻的2～4个村,对1岁以上常住居民进行腹部B超检查,开展人群棘球蚴患病情况调查。对报告病例所在小学的全体学生进行腹部B超检查,同时采集静脉血,ELISA试剂盒检测血清抗棘球蚴Ig G抗体水平。采用内脏剖检法调查牲畜和啮齿动物棘球蚴感染情况。采集报告病例所在自然村的所有家犬犬粪,检测犬粪棘球蚴抗原。结果进行B超检查3 153人,未发现棘球蚴病患者;检测血清376份,血清抗棘球蚴Ig G抗体阳性率为0.27%(1/376);中间宿主检查牛11头、羊113只、猪2 217头,鼠48只,未发现棘球蚴感染;检测终宿主犬粪251份,犬粪棘球蚴抗原阳性率为0.4%(1/251)。结论腾冲市部分乡镇存在棘球蚴病流行,应加强传染源犬的监测和管理。     

分泌抗细粒棘球蚴单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用棘球蚴囊壁生发展制备抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与骨髓瘤ＳＰ２／Ｏ进行细胞融合，经多次筛选克隆后建立了分泌抗细粒棘球蚴单克隆抗体细胞株Ｃ５Ｆ２Ｃ１１Ａ１１，Ｃ１２Ｃ１１Ｆ６Ｇ３，Ｃ１２Ｈ１２Ｆ８Ｄ５三株。应用ＥＬＩＳＡ及免疫组化法检测该三株具有特异性，培养上清分泌抗体滴度分别为１：２５６０，１：５１２０，１：５１２０。     

细粒棘球蚴感染对小鼠炎症性肠病的保护机制研究

目的 观察细粒棘球蚴感染对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病(IBD)症状的保护作用及可能机制。方法 建立继发性细粒棘球蚴感染小鼠模型,再给予DSS诱导IBD症状,解剖后ELISA法检测小鼠血清中囊液抗原水平,并观察腹腔内的包囊;根据每日体重监测、解剖后结肠长度测量及结肠组织病理学评分指标评估细粒棘球蚴感染对炎症性肠病的保护作用;采用流式细胞术CBA法检测模型鼠血清中Thl/Th2/Thl7水平,评价细胞因子对炎症性肠病的保护作用。结果 小鼠感染细粒棘球蚴后血清HCF抗体阳性率与成囊率均为100%。细粒棘球蚴感染减轻了DSS引起的小鼠体重下降程度;结肠变短程度减小,HE染色检查小鼠结肠组织炎性症状显著改善。CBA检测显示细粒棘球蚴感染小鼠血清IL-4、IL-10、IL-17A、IL-6、IFNγ含量均较正常小鼠显著增加,表现为Th2为主的免疫反应;细粒棘球蚴感染合并IBD模型组小鼠Th2/Th1型细胞因子比率同IBD组相比显著升高。结论 细粒棘球蚴感染IBD模型小鼠血清IL-4、IL-10水平升高,Th2高水平状态削弱了DSS引发的Th1反应,表明细粒棘球蚴感染可改善IBD小鼠...     

人、沙鼠、小鼠泡球蚴抗原诊断泡球蚴病的比较研究

用同一组47例泡球蚴患者和115例对照血清比较研究了人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的诊断价值。人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的阳性率各为97.8％、100％和97.8％,三者无显著差异(P>0.05)。三者的假阳性率也无显著差异(P>0.05)。用沙鼠泡球蚴抗原检测时,95.74％病例的消光值在0.70以上,非常显著地高于人(48.94％)和小鼠(57.45％)抗原,P均<0.01。在1:1600以上抗体滴度组中,沙鼠泡球蚴抗原检出74.47％病例,非常显著地高于人(6.38％)和小鼠(29.79％)泡球蚴抗原(P均<0.01)。以滴度几何均数计,沙鼠泡球蚴抗原检测最高为1:1209,是小鼠泡球蚴检测的2.89倍和人泡球蚴抗原检测的3.32倍。说明在诊断人体泡球蚴病时宜用沙鼠泡球蚴抗原。以SDS-PAGE分离的人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的蛋白质带数各为23、36和15。讨论了蛋白质带数与泡球蚴病诊断的关系。     

斑点ELISA诊断包虫病方法的改进研究

本文介绍了一种改进的斑点酶标法诊断包虫病的初步结果。对60例经手术证实的包虫病患者的阳性率为93.33％.56例正常人的假阳性率为1.79％,与猪囊虫病患者血清有一定的交叉反应。比较了改进的斑点ELISA、IHA、ELISA的阳性率和假阳性率以及与猪囊虫病患者的交叉反应程度。观察了棘球蚴原液粗抗原与Burstein法提取的纯化抗原的敏感性和特异性及用量与交叉反应的关系。比较了三种底物该法对包虫病的流调和病人的快速诊断有一定的价值。     

Albendazole in the treatment of hydatidosis

Ten cases of cystic echinococcosis and ten cases of alveococcosis were treated with albendazole in dosage of 20 mg/kg/d x 30 days for 10-32 courses. All cases were followed up 10 months to 5 years (average 26 months). 7 of 10 cases of cystic echinococcosis and 7 of 10 cases of alveococcosis showed reduction in size of lesions in the liver and lung shown by B ultrasonography and chest X-ray films. 3 cases of cystic echinococcosis of liver operated during the treatment course showed that all the daughter cysts were collapsed and mostly were necrotic and liquefied. Apparently albendazole is effective for the treatment of inoperable cases of hydatidosis.     

检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究

目的探讨检测患者血清特异IgG4诊断包虫病的效果.方法采用两种抗原(棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过ELISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异IgG4.结果粗抗原和抗原B检测棘球蚴患者血清特异IgG4的阳性率分别为94.4%和89.8%;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应.结论检测棘球蚴患者血清特异IgG4敏感性高,特异性强,具有较好的诊断价值.     

同步检测血清和唾液中的棘球蚴抗原及其特异性抗体

应用ＭｃＡｂ－Ｓａｎｄｗｉｃｈ－ＥＬＩＳＡ（夹心法）及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ（点免疫法）同步检测了包虫病病人的不同抗原、抗体样品,结果表明ＭｃＡｂ夹心法对患血清、唾液抗原阳性检出率分别为８０．４３％和６０．８７％;点免疫法对血清、唾液抗体检出率为８６．９６％和７８．２６％,均明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）,对抗原,抗体的同步检测结果进行显性及相关性分析,得出血清抗原检测可取代以往的血清抗体检测,唾     

western blot 法诊断囊虫病的应用研究

目的：探讨四种猪囊尾蚴（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕｓｃｅｌｕｌｏｓａｅ）特异性抗原ｃＣ１、ｃＣ２、ｃＰ１、ｃＨ１（分子量分别为２８ｋＤａ、１８ｋＤａ、１４ｋＤａ、３４ｋＤａ）混合应用诊断人囊虫病的价值。方法：以猪囊尾蚴ｃＤＮＡ表达文库中筛选出的β－半乳糖苷酶－猪囊虫特异性抗原ｃＤＮＡ编码的融合蛋白（ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＦＰ）为抗原，作简化的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ｉｍｐｒｏｖｅｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ＩＷＢ）分析，检测１０７例囊虫病、４０例华支睾吸虫病、２４例包虫病和３４例健康人血清对融合蛋白的反应。同时应用粗制抗原（ｃｒｕｄｅａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＣＡ）进行ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ对比检测。结果：在简化Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测中，ＦＰ被１０７例囊虫病患者血清中９４例（８７．９％）血清所识别，与华支睾吸虫病、包虫病患者及健康人血清无交叉反应，特异性为１００％。以粗制抗原作ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ检测囊虫病人血清中的ＩｇＧ抗体阳性率分别为８４．１％和７４．８％，与华支睾吸虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为２．５％、１２．５％；与包虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为８．３％、１６．７％；与健康人血清也存在交叉反应, 假阳性率分别为8. 8%、11. 8% 。结论: β－半乳糖苷酶2猪囊尾蚴FP 诊断囊虫病具有较高敏感性和高度的特异性。     

旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究

目的 探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。 方法 应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA（Ts21-LISA）与肌幼虫ES抗原ELISA（ES-LISA）对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫（T1、T2、T3、T4和T7）感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平。将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠（20 μg/只,免疫3次,每次间隔10 d）,末次免疫后10 d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5 d和42 d 后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率。 结果 Ts21-LISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%（18/19）、15.8%（3/19）、9.1%（1/11）和7.7%（1/13）,与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义（χ²=0,P＞0.05;χ²=0.358,P＞0.05）。Ts21重组蛋白与ES抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义（χ²=0.104,P＞0.05）,与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原（χ²=17.069,P＜0.05）。小鼠感染300条旋毛虫后4 周,应用Ts21-LISA检测的血清抗体阳性率为100%（10/10）;小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%（10/10）。Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5 d和42 d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%。 结论 Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应。     

酶标记抗原对流免疫电泳试验诊断棘球蚴病的研究

用戊二醛一步法以辣根过氧化物酶标记纯化人棘球蚴液抗原,对80例棘球蚴病,97例其它寄生虫病和其它疾病以及74例健康人进行了酶标记抗原对流免疫电泳试验(E-CIEP),其敏感性为85.0％,特异性为100％。E-CIEP敏感性显著高于CIEP 而低于PPA-ELISA,但其特异性显著高于PPA-ELISA。用国产辣根过氧化物酶与进口酶标记的抗原,试验敏感性相同。凝胶片先烘干后染色并不影响抗体活性。     

不同抗囊尾蚴抗体检测试剂盒用于囊尾蚴病血清学诊断效果评价

目的　评价不同厂家生产的4种抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒的诊断效果,为囊尾蚴病流行病学调查和临床检测提供参考。方法　采用A品牌3种抗囊尾蚴抗体（IgG、IgG4和IgM抗体）ELISA检测试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA检测试剂盒,同时检测40份脑囊尾蚴病患者、100份健康人、30份斯氏并殖吸虫病患者、17份细粒棘球蚴病患者和19份皮下或脑裂头蚴病患者血清,比较不同试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度、特异度和假阳性率。结果　A品牌抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体ELISA试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度分别为95.00%（38/40）、87.50%（35/40）、7.50%（3/40）和75.00%（30/40）,特异度分别为98.00%（98/100）、100.00%（100/100）、100.00%（100/100）和100.00%（100/100）;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度高于B品牌（[χ2] = 6.28,P < 0.05）,两者特异度差异无统计学意义（[χ2] = 2.01,P > 0.05）。4种试剂盒检测并殖吸虫病、细粒棘球蚴病、裂头蚴病患者血清总假阳性率分别为37.88%（25/66）、22.73%（15/66）、62.12%（41/66）和15.15%（10/66）（[χ2] = 37.61,P < 0.05）;其中A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率最高（[χ2] = 7.56,P' < 0.008）,A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率高于B品牌（[χ2] = 8.75,P' < 0.008）。4种试剂盒检测并殖吸虫病患者血清假阳性率分别为40.00%（12/30）、16.67%（5/30）、76.67%（23/30）和13.33%（4/30）（[χ2] = 32.88,P < 0.05）,检测裂头蚴病患者血清假阳性率分别为21.05%（4/19）、26.32%（5/19）、73.68%（14/19）和15.79%（3/19）（[χ2] = 19.97,P < 0.05）,均以A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测假阳性率最高（P' 均 < 0.008）。4种试剂盒检测细粒棘球蚴病患者血清假阳性率分别为52.94% （9/17）、29.41%（5/17）、23.53%（4/17）和17.65%（3/17）,差异无统计学意义（[χ2] = 8.24,P > 0.05）。A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率分别为76.67%（23/30）、23.53%（4/17）和73.68%（14/19）（[χ2] = 14.537,P < 0.05）,其中检测棘球蚴病患者血清假阳性率最低（[χ2] = 14.537,P' < 0.014）;其他3种试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率差异均无统计学意义（P 均> 0.05）。 结论　不同囊尾蚴病免疫学诊断试剂各有优劣;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒敏感度较高,但需进一步解决与其他寄生虫病的交叉反应和稳定性问题。     

Immune Responses to Antigens of in vitro Reared Echinococcus granulosus Adult Worms in Balb/c Mice

Background: Cystic echinococcosis (CE), also known as echinococcosis/hydatidosis, is one of the most important parasitic diseases in the world. It enhances both humoral and cellular (Th1 and Th2) responses in infected host. Different antigens of the worm may favor the Th1 or Th2 immune responses in CE patients. Objective: To evaluate the humoral and cellular immune responses of Balb/c mice against the crude and excretory/secretory (E/S) antigens of in vitro reared Echinococcus granulosus adult worms. Methods: A total of 20 Balb/c mice divided into 5 groups of 4 mice each. Three groups of mice (n=4) were immunized with crude, E/S and an immunodominant antigen of in vitro reared Echinococcus granulosus adult worms on day 1 and 28. The fourth and the fifth groups were negative control groups and received PBS plus adjuvant, or nothing, respectively. Two weeks after the second injection, the mice were killed and their blood was collected for determining antibody responses, and their spleens were employed for proliferation assay. Total IgG was measured by indirect ELISA. Spleen cells of immunized mice were cultivated and exposed to different antigens of adult worms including E/S and crude antigens. Levels of IFN-γ, IL-12, IL-4 and IL-10 were measured in the recovered cell culture supernatants by capture ELISA. Results: Total IgG assay showed the highest level of antibody produced in mice immunized with crude antigens. Proliferation assay showed a statistically significant production of cytokines in the mice immunized with crude antigens (p<0.05). The highest levels of IFN-γ, IL-12 and IL-4 were produced in mice immunized with crude antigen of the in vitro reared Echinococcus granulosus adult worms followed by E/S antigens. Immunodomonant antigen induced the lowest levels of cytokines (IL-12, IFN-γ, IL-4 and IL-10) in immunized mice. Conclusion: Significant levels of Th1 related cytokines (IFN-γ and IL-12) were produced in Balb/c mice immunized with crude antigen of the in vitro reared Echinococcus granulosus adult worms.