重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

背景与目的：研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法：用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒（rAAV）载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostain。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果：C57BL/6小鼠肌肉注射10^11TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1％,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7％。结论：重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。     

毕赤酵母表达重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用

背景与目的：肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成,内皮抑素能抑制肿瘤的血管生成。本研究旨在观察毕巴斯德酵母（pichia.pastoris.GS115)分泌表达的重组人内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转换的抑制作用。方法：挑取一株高效分泌表达rhES的毕赤巴斯德酵母菌株,利用甲醇进行大量诱导表达;用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白;将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,分别给予rhES和PBS皮下注射,每日1次,连续14天;观察两组小鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤体积大小,并观察两组小鼠肿瘤肺部转移情况。结果：经甲醇诱导的毕赤巴斯德酵母菌株高效分泌表达了rhES;动物实验研究发现rhES能显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长,rhES治疗组肿瘤大小与对照组比较具有显著性差异（P＜0．001）,抑瘤率达到66．4％,并且有效抑制了肿瘤的肺部转移。结论：利用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,可显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长和转移。     

重组腺病毒介导小鼠内皮抑素对荷骨肉瘤MG-63细胞裸鼠肺转移的抑制

目的: 构建携小鼠内皮抑素(endostatin， ES)基因的重组腺病毒载体，观察其对荷骨肉瘤裸鼠肺转移的抑制，探讨内皮抑素表达水平与骨肉瘤肺转移的关系。方法:构建pDC315mEndo表达质粒，同源重组产生重组腺病毒AdmEndo。裸鼠右前肢皮下注射骨肉瘤MG63细胞建立移植瘤裸鼠模型；随机分为4组：小鼠内皮抑素腺病毒（AdmEndo）组，携带EGFP基因腺病毒（AdEGFP）组， PBS组，未接种肿瘤细胞裸鼠空白对照组。各组裸鼠每周分别注射相应药物200 μl，连续5次，观察各组动物移植瘤体积、瘤组织病理，ELISA法检测各组裸鼠血ES水平；7周后处死动物，观察有无肺转移及肺转移灶病理。结果：AdEGFP组肿瘤体积为（1.53±0.05） cm3,PBS组为（1.56±0.07） cm3, AdmEndo组为（0.91±0 .03） cm3，AdmEndo治疗的抑瘤率达40.7％。AdmEndo组裸鼠血内皮抑素表达水平明显高于AdEGFP组和PBS组（P<0.05）。AdmEndo组裸鼠肺部未发现肿瘤转移灶，其他两组肺部见大量散在转移灶，肺转移率分别为80%和90%。未发生肺转移裸鼠的ES水平显著高于发生肺转移的裸鼠（P<0.05）。结论：腺病毒介导的小鼠内皮抑素显著抑制了荷骨肉瘤裸鼠肺转移，内皮抑素表达水平与肺转移有着直接的关系。     

重组RA538、反义c-myc腺病毒对不同细胞系转染效率与作用及其机制的研究 *

目的：研究放射免疫治疗（ＲＴＴ）对肿瘤转移的预防和治疗作用,寻找一种抑制肿瘤转移的方法。方法：采用＾１３１Ｉ－Ｃ５０治疗ＬＡ７９５肺腺癌小鼠模型。观察治疗前后小鼠的体重减轻量、瘤重、生存期、肺转移数。比较一、小鼠接种后不同时期给药分次小剂量ＲＴＴ与化疗、手术及对照组之间疗效差别。三、接种后不同时间截肢后综合治疗对荷瘤小鼠作用。结果：一、种后后第７人药,各治疗组与对照组比较,体重减轻少、瘤重轻、肺转     

SA脂质体介导血管抑素和／或内皮抑素基因治疗Lewis肺癌小鼠的实验研究

 目的 观察SA脂质体介导血管抑素和／或内皮抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。方法 建立C57BL／6j小鼠肺癌模型，30只荷瘤鼠随机分空白对照组，SA脂质体对照组，血管抑素基因（pAng）治疗组，内皮抑素基因（pEnd）治疗组，血管抑素和内皮抑素基因联合治疗组，每组6只。以SA脂质体介导，将血管抑素和／或内皮抑素基因直接注入移植瘤内，每周2次，共6周，每周测瘤体大小2次，6周末处死所有小鼠，观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、生存期等。结果 各治疗组均能抑制肿瘤增长及肺内转移，与对照组比较有统计学意义（P＜0.01），小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变，生存期明显长于对照组。结论 SA脂质体介导血管抑素和／或内皮抑素基因治疗可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移，生存期明显长于对照组。     

大剂量重组人血管内皮抑素对肺癌转移瘤的实验研究*

目的　探讨大剂量重组人血管内皮抑素（恩度）单药对肺癌的作用。方法　建立肺癌裸鼠转移瘤模型,检测腹腔给药和皮下注射两种途径恩度（５０ｍｇ／ｋｇ）在实验ＳＤ大鼠中的血药浓度,同时分别设生理盐水对照组和恩度１０、２０、５０、１００、２００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）组,观察小鼠的生存情况,计算生存期以及肺部转移灶数量。结果　恩度腹腔给药和皮下注射两种途径药代动力学相似,半衰期约为２４ｈ。１００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）恩度组小鼠的中位生存期达６１天,较对照组延长１０天。小鼠肺部转移病灶数量与恩度剂量有一定相关性,１００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）恩度组转移灶数量最少,与对照组比较有统计学上显著差异（Ｐ＜０.０５）。结论　在肺癌转移瘤模型中,大剂量恩度能够有效地抑制肺癌的生长,生存期延长,生存质量较好。     

小剂放射免疫治疗的可行性及安全性的实验研究

目的：研究多次小剂量放射免疫治疗（ＲＩＴ）对肿瘤小体积转移灶的预防和治疗作用及使用安全性。方法：采用高转移率的ＬＡ７９５肺腺癌小鼠模型。比较在第８天或第１５天施行肿瘤原发灶切除后分别给予分次小剂量ＲＩＴ、化疗、单次大剂量ＲＩＴ的抑瘤效果。观察正常小鼠放射免疫治疗后体重、外周血白细胞和血小板的改变及主要器官组织病理改变。结果：不同手术时间的综合治疗均显示,分次小剂量ＲＩＴ组小鼠生存期延长,肺转移灶数     

重组人血管抑素的克隆、表达及活性测定

目的：研究血管抑素（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）的临床应用价值,将其开发为多肽类药物。方法：ＲＴ－ＰＣＲ从胎儿肝脏钓取人血管抑素全编码区ｃＤＮＡ,使用Ｐｉｃｈｉａ分泌型酵母表达系统表达重组人血管抑素,重组蛋白经肝素亲和层析纯化后,以鸡胚尿囊膜法血管生成实验及小鼠创伤愈合实验检测活性。结果：重组人血管抑素在酵母系统中得到较高量表达（５ｍｇ／Ｌ）,经肝素亲和层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为４３ｋＤ。活性实验表明,重组蛋白能够抑制新生管形成、抑制伤口愈合。结论：重组人血管抑素在酵母系统中实现高效表达,并具有很好的生物学活性。     

TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究

目的:观察TNP470和重组人内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES）联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法: 用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素（rhES）的毕赤酵母菌株分泌表达rhES，将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成3组，每组各10只，分别给予PBS，rhES及TNP470+rhES皮下注射，每日1次，连续14 d；观察各组小鼠肿瘤生长情况，游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠，原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度（microvessel density, MVD）。结果: 经甲醇诱导，毕赤酵母重组菌分泌表达rhES，并应用肝素亲和层析将其纯化；动物试验显示与PBS对照组比较，rhES治疗组及rhES＋TNP470治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长（P<0.01），TNP470+rhES组与rhES组比较亦有显著性差异（P<0.01）。原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著（P<0.01）。结论: TNP470联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳，具有良好的协同治疗作用     

重组人肿瘤坏死因子抗肿瘤作用的初步研究

目的： 了解ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 体内体外抗肿瘤活性。方法： 体外采用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 细胞的 Ｉ Ｃ５０ , 体内采用动物移植性肿瘤检测其抗肿瘤活性。结果： Ｍ Ｔ Ｔ法测定结果表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对一定浓度的人胃癌细胞株 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 有较强的抑制增殖作用, 其 Ｉ Ｃ５０ 为４ ．４６１ ×１０ － ２μｇ／ ｍｌ（ 相关系数γ＝ ０ ．９５４６） 。体内研究表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠 Ｓ１８０ 实体瘤和小鼠 Ｅｈｒｌｉｃｈ 氏实体瘤有较强的抑制作用,其抑制率分别为２９ ．３ ％ （ｉｖ） 和４０ ．０７ ％ （ｉｖ） 。ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠黑色素瘤 Ｂ１６ 的肺转移有很强的抑制作用, 其抑制率为６０ ．４１ ％ （ｉｖ） 。结论： 人重组肿瘤坏死因子ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 在体内体外均有一定的抗肿瘤作用。     

ANTITUMOR EFFECTS OF HUMAN IL-15 GENE MODIFIED LUNG CANCER CELL LINE

ＡＮＴＩＴＵＭＯＲＥＦＦＥＣＴＳＯＦＨＵＭＡＮＩＬ－１５ＧＥＮＥＭＯＤＩＦＩＥＤＬＵＮＧＣＡＮＣＥＲＣＥＬＬＬＩＮＥＳｈｅｎＹｏｎｇｑｕａｎ１沈永泉ＣｕｉＬｉａｎｘｉａｎ２崔莲仙ＨｅＷｅｉ１何维ＸｕｅＬｉ１薛莉ＢａＤｅｎｉａｎ１巴德年１Ｉｎｓｔ...     

烟曲霉醇联合环磷酰胺对小鼠LA795肺腺癌转移的抑制作用

背景与目的:血管生成抑制剂联合化疗药物治疗肿瘤成为目前研究热点之一。本研究旨在观察烟曲霉醇(fumagillol,TNP-470)联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对肺腺癌小鼠异体移植转移的协同抑制作用,并初步探讨TNP-470抑制肿瘤转移的相关机制。方法:将40只接种高转移性LA795肺腺癌细胞的T739裸小鼠随机分成5组:对照组、溶剂组、TNP-470组(30mg/kg)、CTX组(40mg/kg)、联合组(TNP-47030mg/kg CTX40mg/kg)。实验3周后,处死全部小鼠。剥离皮下肿瘤称瘤重并计算抑瘤率;取出双肺观察表面肿瘤转移情况,计算肿瘤肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及计算出肺表面结节转移抑制率。免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中微血管密度(microvesseldensity,MVD)、P-选择素表达并定量分析。结果:联合组抑瘤率(81.5%)明显高于其他各组(P<0.01),Q值等于1.21,说明两药合用具有协同作用。与对照组(12.13±4.02)相比,联合组(1.75±1.71)、TNP-470组(4.75±3.34)、CTX组(8.50±2.67)肺表面转移结节数明显下降;同时TNP-470组和联合用药组皮下肿瘤内MVD、P-选择素表达与对照组相比均下降,差异有显著性(P<0.01),而CTX组对此则无明显影响。结论:TNP-470与CTX对LA795肺腺癌的肺结节转移具有协同抑制作用;TNP-470抑制LA795肺腺癌转移与其抑制肿瘤内P-选择素表达有关。     

苏拉明联合顺铂对肺腺癌小鼠移植瘤生长和转移的影响

背景与目的:新近研究发现新生血管生成在肿瘤生长、转移以及转移灶的生长过程中起重要作用。本研究观察苏拉明联合顺铂对肺腺癌细胞LA795的T739小鼠异体移植瘤生长和转移的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立肺腺癌细胞LA795的T739小鼠异体移植瘤模型,将32只接种LA795细胞T739小鼠随机分成4组,每组8只。对照组:每只小鼠每天生理盐水0.2ml腹腔注射;顺铂组:顺铂2mg·(kg·d)-1于接种后第4、11、18天各一次;苏拉明组:苏拉明10mg·(kg·d)-1;顺铂 苏拉明组:顺铂2mg·(kg·d)-1于接种后第4、11、18天各腹腔注射一次 苏拉明10mg·(kg·d)-1。用药16日,用药中观察肿瘤生长情况,于接种后第24天处死各组小鼠,取出双肺并剥离皮下肿瘤,计算出肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数并算出肺表面结节转移抑制率。收集移植瘤标本行光镜观察,采用免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(microvesseldensity,MVD),血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)的表达和原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果:顺铂组、苏拉明组、顺铂加苏拉明组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤重明显低于对照组,其抑瘤率分别为23.0%、34.4%、56.3%,而联合用药组抗瘤作用进一步增强。光镜观察顺铂组、苏拉明组、顺铂加苏拉明组肿瘤细胞出现坏死,苏拉明组和顺铂加苏拉明组肿瘤间质中血管数减少。各用药组NF-#B的表达都比对照组减少,凋亡指数比对照组明显提高,差异有显著性(P<0.01);苏拉明组及联合组与对照组和顺铂组相比肺表面转移结节数明显下降,同时肺转移发生率、皮下肿瘤MVD、VEGF的表达也明显下降,相反顺铂组对此则无明显改变。结论:苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长和转移,与顺铂联用有协同作用,其作用机制可能与抑制其微血管形成、促进细胞凋亡有关。     

Intramuscular delivery of antiangiogenic genes suppresses secondary metastases after removal of primary tumors

The success of surgery to remove primary tumors can be compromised by the subsequent outgrowth of metastases. It is recognized that primary tumors secrete antiangiogenic factors that suppress the outgrowth of their daughter metastases. In accord we show here that surgical removal of primary EL-4 lymphomas led to a marked decrease in the levels of circulating angiostatin and endostatin, and promoted the growth of distant nodular tumors. Expression vectors encoding angiostatin and endostatin, formulated with poly-N-vinyl pyrrolidone (PVP), were injected into the tibialis and gastrocnemia muscles, leading to expression of angiostatin and endostatin in muscle fibers. High levels of biologically active exogenous proteins were secreted into the circulation. Intramuscular gene therapy with angiostatin and endostatin plasmids significantly inhibited tumor vascularity and induced tumor cell apoptosis, and thereby suppressed the growth of secondary subcutaneous and disseminated metastatic tumors in the lung and liver. Simultaneous intramuscular delivery of both angiostatin and endostatin plasmids significantly prolonged the survival of mice after removal of primary tumors. These results suggest that intramuscular gene transfer of angiostatin and endostatin might serve as a prophylactic cancer-prevention strategy to combat the recurrence of cancer after surgical resection of primary tumors.     

苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的转移

 目的研究苏拉明联合槲皮素对小鼠肺腺癌转移的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:对照组、顺铂(DDP)组、槲皮素组、苏拉明组、苏拉明+槲皮素组。实验3周后,处死全部小鼠,取出双肺和剥离皮下肿瘤,计算肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率,测量各组小鼠肺湿重。免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达并定量分析。结果苏拉明组、槲皮素组与对照组相比肺表面转移结节数明显下降,同时苏拉明组中肺转移发生率、皮下肿瘤内MVD、VEGF的表达与对照组相比也明显下降,相反顺铂组对此则无明显影响。联合用药组则显著抑制肺表面转移结节数且具有协同作用。结论苏拉明和槲皮素对LA795肺腺癌的肺结节转移具有协同抑制作用,苏拉明抑制LA795肺腺癌转移与其抑制其肿瘤内VEGF表达相关。     

槲皮素联合苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察槲皮素联合苏拉明对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将40只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:A对照组、B顺铂组(DDP)、C槲皮素组、D苏拉明组、E槲皮素 苏拉明组。用药16d,观察药效、不良反应及肿瘤生长情况,于接种后24d处死各组小鼠,收集移植瘤标本行光镜观察,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖核抗原(PCNA)的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果:①B、C、D、E各用药组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于A组(P<0.05),其抑瘤率分别为23.03%、39.77%、34.40%、54.70%,联合用药组抑瘤作用明显者增强(P<0.01)。②光镜观察:B、C、E组肿瘤细胞出现坏死,D、E组肿瘤间质中血管数减少。③免疫组化:D、E组MVD值明显低于A、B、C组,各用药组都能减少VEGF、PCNA表达,与对照组相比均具有差异显著性;各用药组的凋亡指数都比对照组明显提高(P<0.01)。④不良反应:B组有不良反应。结论:槲皮素联合苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长,其作用机制可能是抑制其微血管形成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤生长的影响及其机制

背景与目的:有研究表明,苏拉明对恶性肿瘤有明显抑制作用,但有关其对肺腺癌体内抗瘤作用的报道很少。本实验观察苏拉明对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤生长和转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将32只接种LA795肺腺癌细胞T739的小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、苏拉明组、联合组(苏拉明加顺铂组),每组8只。用药16d,观察肿瘤生长情况,于接种后24d处死各组小鼠,取出双肺并剥离皮下肿瘤,计算出肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数并算出肺表面结节转移抑制率;收集移植瘤标本,称重和测量体积,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、P-选择素和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果:顺铂组、苏拉明组、联合组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤重明显低于对照组,其抑瘤率分别为34.9%、23.8%、57.3%;苏拉明组及联合组与对照组和顺铂组相比肺转移发生率、肺表面转移结节数明显下降(P<0.05),而顺铂组与对照组比较差异则无统计学意义。EGFR和P-选择素的表达对照组高于顺铂组、苏拉明组、联合组,对照组、顺铂组、苏拉明组、联合组EGFR表达的灰度值分别为157.7±6.1、130.7±5.9、110.3±5.8、89.2±5.4,P-选择素表达的灰度值分别为134.5±5.7、117.9±5.1、96.2±5.4、78.3±4.5,各用药组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对照组、顺铂组、苏拉明组、联合组增殖指数(S phase fraction,SPF)分别为(89.7±3.8)%、(68.8±4.0)%、(65.2±4.2)%、(51.3±4.2)%,各用药组SPF都比对照组低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长和转移,其作用机制可能为通过调控肿瘤细胞中的EGFR和P-选择素表达,从而抑制肿瘤细胞增殖和减少肿瘤细胞的粘附而防止转移。