实验性自身免疫性重症肌无力动物模型研究

研究表明,实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）与重症肌无力（MG）在症状、病理、免疫及组织学方面相似。EAMG 动物模型主要通过主动或被动免疫实验动物,制备与重症肌无力患者的临床表现、免疫组织学、电生理学等相似的动物模型,为临床诊断及治疗提供依据。但目前 EAMG 模型仍不完善,仍需进一步探索。     

鼻腔给予乙酰胆碱受体治疗实验性自身免疫性重症肌无力

实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)是由乙酰胆碱受体(AChR)加弗氏完全佐剂(CFA)免疫动物后制成的人类重症肌无力(MG)动物模型。业已证明EAMG和MG都是针对神经肌肉接头后膜烟碱型AChR的自身免疫性疾病,AChR抗体的产生受AChR特异性CD4~+T辅助细胞调节。 MG临床上至今尚无特异性治疗方法。     

中医药治疗实验性自身免疫性重症肌无力作用机制研究进展

重症肌无力(MG)是一种以乙酰胆碱受体(AChR)抗体引起的神经肌肉连接(NMJ)功能障碍为特征的全身肌肉无力的自身免疫性疾病.多年来,实验性自身免疫性(EAMG)动物模型对MG的致病机制和评价新疗法、新方案的疗效提供了极好的帮助.中医药治疗MG疗效明显以其独特的优势逐渐成为国内学者研究的热点,本研究总结、归纳近10年...     

AG490对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用

目的探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的治疗作用。方法用人工合成的大鼠乙酰胆碱受体α亚基的97-116肽段免疫Lewis大鼠,建立EAMG模型,将12只大鼠随机、平均分为AG490治疗组及对照组,双盲法隔日评估大鼠临床症状并评分。流式细胞术检测淋巴结单个核细胞中细胞因子IL-6及IL-21的分泌;CCK-8及羟基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)检测淋巴结单个核细胞的增殖;ELISA检测大鼠血清中抗R97-116抗体水平。结果自免疫后第13天开始,AG490治疗组临床症状较对照组明显缓解,并且第27、29、31、33、37、39、41天时,两组肌力评分的差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,AG490治疗组中的细胞因子IL-6、IL-21的分泌减少(P<0.01);AG490治疗组中抗R97-116抗体Ig G、Ig G2b的分泌减少(P<0.01);与对照组相比,AG490治疗组的淋巴细胞的增殖受到抑制。结论 AG490通过抑制细胞因子IL-6及IL-21的分泌,降低大鼠血清中抗R97-116抗体Ig G、Ig G2b水平,缓解EAM G大鼠病情。     

“强力方”治疗实验性自身免疫性重症肌无力的机理研究

“强力方”是根据中医学“虚则补之，损则益之”的理论，经过本院长期临床实践总结的验方，其针对重症肌无力脾气虚损、脾虚及肾虚病机而设。“脾主肌肉”，“脾主四肢”，《古今医统大全》更概括为“脾主运动”，故组方以黄芪之势宏力专，并党参相辅，以培补脾气，强肌健力。同时反映了“补脾!三宜”的学术思想，即宜甘温滋养；宜升举调畅；宜健脾运中以及“脾肾交济”的内涵。先期临床工作已证实了“强力方”对重症肌无力具有良好疗效，并与泼尼松组(50例)进行了临床疗效对比。     

实验性自身免疫性重症肌无力小鼠免疫功能状态的研究

目的：探讨实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）模型小鼠免疫应答特点。方法：根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,检测其免疫功能状态的改变,包括血清中乙酰胆碱受体抗体（AchRab）的水平,脾脏CD4^＋T细胞数量,用淋巴细胞增殖试验检测脾细胞经刀豆蛋白A（ConA）活化的非特异增殖能力,检测脾脏T细胞因子白细胞介素4（IL-4）,干扰素γ（IFN-γ）分泌水平。并与弗氏佐剂（CFA）对照组及正常对照组进行比较。结果：与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠AchRab显著增高,脾脏CD4^＋T细胞数升高;外周脾细胞对ConA刺激的非特异性增殖能力显著升高;脾脏T细胞细胞因子IL-4,IFN-γ显著升高,（均P〈0.01）,IFN-γ升高的程度高于IL-4（P〈0.01）。结论：EAMG发生是一个自身免疫应答参与的过程,体液免疫、细胞免疫应答参与了EAMG的发生。     

小剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用

目的 探究阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫调节机制。方法 用人工合成的大鼠乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制造重症肌无力(MG)模型,随机分为阿托伐他汀治疗组和对照组,采用Lennon评分标准评价大鼠病情, 采用双盲法隔天评估大鼠肌力并记录体质量;免疫组化检测大鼠胸腺抑制性转录调节因子Foxp3的表达,以此反映调节性T细胞(Treg)的数量;CCK-8检测淋巴结单个核细胞增殖;ELISA检测细胞培养上清液IL-4及血清抗R97-116抗体的水平。结果 阿托伐他汀治疗组大鼠临床症状较对照组明显缓解,胸腺Foxp3的表达及细胞培养上清液IL-4的水平均高于对照组,血清抗R97-116抗体水平低于对照组。结论 阿托伐他汀通过上调Treg和Th2型细胞因子IL-4的水平,从而降低血清中抗R97-116抗体水平,缓解EAMG病情。     

抗树突状细胞单克隆抗体对小鼠实验性自身免疫重症肌无力的作用

用部分纯化的乙酰胆碱受体(AchR)加完全福氏佐剂注射给C57BL/6小鼠可发生实验性自身免疫重症肌无力(EAMG),出现肌力递减,AchR刺激脾淋巴细胞有增殖反应及机体产生抗AchR抗体。预先用抗树突状细胞单抗封闭,可阻止这一过程发生。     

双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力的影响

目的　在实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型采用双类似物进行鼻黏膜免疫耐受 ,观察其临床及免疫功能变化 ,评价疗效并探讨其作用机制。方法　建立Lewis大鼠EAMG动物模型 ,选取经预实验证实有效的最低剂量为治疗量 ,检测致敏同时 (A组 )和缓解期第 1天 (B组 )给予以类似物鼻黏膜免疫耐受治疗后 ,大鼠体重、临床症状、致敏第 35天血清抗AChR抗体IgG含量及其淋巴细胞在不同刺激原作用下的增殖情况。结果　①治疗后EAMG大鼠体重增加 ,临床症状缓解。②治疗后血清抗AChR抗体IgG含量 (吸光度 ,A值 ) :A组 (0 .98± 0 .2 4 )和B组 (0 .95± 0 .2 6 )均少于各自对照组 (分别为 1.18± 0 .10和1.19± 0 .12 ) ,但A、B组间差异无显著意义。③针对AChR等特异性抗原的淋巴细胞增殖指数 :A组 (1.71± 0 .78)和B组 (1.97± 0 .5 6 )与对照组 (3.2 4± 1.31和 3.19± 1.5 0 )相比均减低 ,增殖反应明显受抑制。结论　双类似物鼻黏膜耐受能明显缓解EAMG的肌无力症状 ,并伴有特异性T、B细胞免疫功能抑制。     

T-bet和GATA-3在实验性自身免疫性重症肌无力中的表达

目的通过研究表达在T细胞上的T-box家族成员之一(T-bet)和能与[T/A(GATA)A/G]序列结合的锌指结构家族的转录因子之一(GATA-3)这两种转录因子在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)中的表达,探讨其在EAMG发病机制中的作用。方法密度梯度离心法分离EAMG组和对照组大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测二组大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中T-bet和GATA-3的表达。结果对照组和EAMG组PBMCs中,T-bet的表达量分别为0.65±0.15和0.86±0.13,两组比较差异具有显著性(P<0.01);GATA-3的表达量分别为0.46±0.12和0.67±0.11,差异也具有显著性(P<0.01);血清中IFN-γ的含量,对照组(108.22±19.01)pg/ml明显低于EAMG组(230.86±41.44)pg/ml(P<0.01);对照组IL-4含量(87.33±3.50)pg/ml明显低于EAMG组(96.21±4.77)pg/ml(P<0.01);T-bet表达与IFN-γ及GATA-3表达与IL-4在对照组和EAMG组分别呈显著正相关(r=0.89,r=0.89,P<0.01;r=0.92,r=0.88,P<0.01)。结论T-bet和GATA-3在EAMG大鼠PBMCs中表达均显著增高,这可能是EAMG大鼠细胞和体液免疫反应增强的重要原因之一。     

重症肌无力是自身免疫性病?

机体某组肌肉进行性衰退并易发生疲劳的一种病变——重症肌无力,现在被认为是一种自身免疫疾病。这表明,肌无力患者产生大量直接抗他们组织的抗体,特别是对抗受它们控制的神经和肌肉的接合部位。直到最近,关于这些抗体是否为疾病的原因或后果仍有争论。现在,Jon Lindstrom及索克研究所的其它研究人员已经对这一问题有所阐明,他们已经制成一个有关的单克隆抗体的“贮藏库”,使他们能鉴定这种病人血清中抗体的型状(《国立科学院会议录第79卷第193页)。控制骨骼肌收缩的神经通过释放一种微量化学物质乙酰胆硷(ACh)而起作用。此物     

自身免疫性疾患——重症肌无力

重症肌无力是神经系统与肌肉之间传递功能障碍的一种慢性病。该病在发病时主要影响肌肉的收缩与运动,表现出严重的肌肉软弱与无力;任何年龄都可发病,女性患者发病年龄较早,患病率高于男性,少数有家族史。在重症肌无力患者体内可检测出抗横纹肌抗体、抗终板蛋白抗体、抗核抗体和抗胸腺抗体     

青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫调节作用

目的探究青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力（experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）大鼠TNF-α、IgG2a、IgG2b的影响。方法用人工合成的大鼠来源的乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor,AChR）α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制造重症肌无力（myasthenia gravis,MG）模型,随机分为青蒿琥酯大剂量组（100mg/kg）、小剂量组（10mg/kg）和模型对照组,流式细胞仪检测不同组大鼠淋巴结单个核细胞（mononuclear cell,MNC）中TNF-α＋细胞的百分比;酶联免疫吸附法（ELISA）检测EAMG大鼠血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平。结果与对照组相比,青蒿琥酯小剂量组明显下调了TNF-α＋的百分比（P=0.046）,而大剂量组中TNF-α下调不显著,两治疗组血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平下降,且小剂量组血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平下降更显著。结论青蒿琥酯主要是通过下调TNF-α＋细胞的数量和降低血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体水平来改善EAMG大鼠的病情。     

脂多糖诱导Treg失衡对实验性自身免疫性重症肌无力的免疫调节作用

目的 探究实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)合并急性感染时免疫细胞的改变及其功能特征。方法 利用大鼠乙酰胆碱受体(AChR) α亚基的97-116 (R97-116)肽段免疫6～8周龄雌性Lewis大鼠,发病高峰期腹腔注射脂多糖(LPS)诱导急性感染模型为LPS组,腹腔注射PBS作为对照(PBS组)。记录临床评分及体质量。流式细胞术检测外周循环和淋巴器官中Th1、Th17、Treg细胞的比例以及脾脏滤泡辅助T细胞(Tfh)、树突状细胞(DC)、生发中心B细胞(GCB)的比例和功能。对脾脏分别进行PNA及CD4、Foxp3免疫荧光检测。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清抗R97-116 IgG抗体及亚型水平。结果 与PBS组相比,LPS组大鼠临床症状较重、体质量减轻,脾脏Treg细胞(CD4⁺CD25⁺)比例(P=0.016)及Foxp3的表达均明显减少。另外,LPS组大鼠脾脏PNA的表达增多且呈簇状,且GCB细胞表达MHC-Ⅱ及分泌IL-6的比例明显增加(P=0.002、P=0.017)。LPS组大鼠DC亚群表达CD80的平均荧光...     

实验性重症肌无力动物模型的建立

从牛骨骼肌中提取乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ），经用１２５Ｉ标记α银环蛇神经毒素（α Ｂｇｔ）鉴定受体活性良好。用ＡｃｈＲ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力（ＥＡＭＧ）模型。与对照组比较，小鼠在临床表现、肌电图衰减效应、血清中抗ＡｃｈＲ抗体和脾细胞对ＡｃｈＲ增殖反应检测中，均出现明显的阳性标志。ＥＡＭＧ动物模型的建立为进一步探索重症肌无力（ＭＧ）免疫发病机制和药物防治研究奠定基础     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺caspase 9和caspase 3的表达

目的 探讨凋亡相关基因caspase 9和caspase 3在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺中的表达及其意义.方法 采用TUNEL法检测胸腺凋亡细胞;用免疫组化法检测正常对照组大鼠和EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3蛋白表达.结果 正常对照组和EAMG组大鼠胸腺中细胞凋亡指数(IA)分别为(38.70±8.82)%,(27.73±5.76)%;EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3的表达明显下降,较正常对照组比较差异有统计学意义,且胸腺中caspase 9和caspase 3的表达与细胞IA在正常对照组和EAMG组分别呈显著正相关.结论 胸腺细胞凋亡障碍可能是EAMG的发病机制之一;caspase 9和caspase 3蛋白表达在介导EAMG大鼠胸腺细胞凋亡障碍的过程中可能具有重要作用.