促红细胞生成素对人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)向血管内皮细胞诱导分化的影响。方法从正常人骨髓中分离获取MSCs,体外培养扩增、纯化后,分4组对其进行诱导分化:(1)EPO组;(2)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+血管内皮细胞生长因子(VEGF)组;(3)EPO+bFGF+VEGF组;(4)DMEM培养液对照组。诱导前后行流式细胞仪检测细胞表面标记CD29、CD31、CD34、CD44,免疫细胞化学鉴定vWF抗体。结果 EPO组、bFGF+VEGF组及EPO+bFGF+VEGF组诱导MSCs后的细胞CD31、CD34表达率升高,CD29、CD44表达率降低,vWF抗体阳性。结论 EPO可以诱导MSCs向血管内皮细胞分化,但联合bFGF、VEGF并不能进一步促进MSCs向血管内皮细胞转化。     

红细胞生成素对模拟急性肾损伤微环境下培养骨髓间充质干细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察经红细胞生成素（EPO）干预后,体外模拟急性肾损伤（AKI）微环境下培养骨髓间充质干细胞（MSC）的分裂增殖情况,并探讨产生这种变化的可能机制。 方法 抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出小鼠MSC（mMSC）,以流式细胞仪鉴定。夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30 min再开放30 min的方法制作AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作缺血再灌注（IR）肾脏匀浆上清。取扩增第3代的mMSC分组培养：A组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;B组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清,体外模拟AKI微环境干预mMSC;C组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清+不同浓度EPO（1、5、10、50 U/ml）。培养1、3、5、7 d。CCK-8法检测各组培养mMSC的增殖,TUNEL法检测mMSC凋亡,Western印迹法检测mMSC表面EPO受体（EPOR）及增殖凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 CCK-8法检测显示,经IR肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSC的增殖效应显著减弱（P ＜ 0.01）,而TUNEL检测表明其胞核染色阳性细胞的百分比显著高于A组（P ＜ 0.01）;给予EPO干预后,mMSC的增殖能力增强,胞核染色阳性细胞百分比降低,具有浓度依赖效应。Western印迹结果显示,第3代mMSC表面存在EPOR表达,培养5 d后EPOR相对表达量为0.092±0.015。EPO以剂量和时间依赖性降低AKI微环境下凋亡相关蛋白caspase-3的表达,同时上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。用10 U/ml EPO干预5 d后,相对于B组,磷酸化蛋白酪氨酸激酶2及磷酸化信号转导和转录因子的表达均显著上调（均P < 0.01）。 结论 EPO能促进体外AKI微环境干预下培养mMSC的增殖,减轻其凋亡,该效应经EPOR介导,并与增殖凋亡相关信号通路蛋白有关。     

大黄素诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:探讨大黄素对人骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的影响.方法:体外分离、培养及扩增入骨髓MSCs,用流式细胞仪检测人骨髓MSCs表面抗原的表达,用倒置光学显微镜、透射电镜、四甲基偶氮唑盐比色、碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测定等研究人骨髓MSCs增殖和分化规律.采用不同方法诱导第3代人骨髓MSCs向成骨细胞分化.结果:入骨髓MSCs贴壁生长,呈成纤维细胞外观.流式细胞仪检测显示CD29、CD44表达为阳性,CD34、CD45、HLA-DR表达为阴性.大黄素对入骨髓MSCs增殖的影响:对照组和DXM(地塞米松)组与大黄素 DXM组比较均具有显著差异(P＜0.05).大黄素对人骨髓MSCs分化的影响:对照组和DXM组与大黄素 DXM组比较均具有显著差异(P＜0.01).结论:大黄素能促进入骨髓MSCs向成骨细胞方向分化.     

糖基化终末产物对骨髓间质干细胞增殖的影响

 目的 研究糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)对骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)增殖的影响及相关分子机制。方法 体外培养SD(Sprague-Dawley)大鼠骨髓MSCs, 流式细胞仪鉴定细胞表面的阳性指标(CD29 和CD90)和阴性指标(CD34 和CD45)。MTT 法检测不同剂量(0、25、50、100和200 μg/ml)终末期糖基化牛血清白蛋白(advanced glycation end productsbovine serum albumin, AGE-BSA)刺激骨髓MSCs不同时间(6 h、12 h、24 h)后MSCs的增殖变化。同时以200 μg/ml 的BSA 作为阴性对照, 以未经处理的骨髓MSCs 作为空白对照。用200 μg/ml 的AGE-BSA刺激骨髓MSCs 12 h和24 h后, 利用基因芯片检测相关基因表达变化。结果 AGE-BSA 可抑制骨髓MSCs 的增殖, 并呈剂量与时间相关性。与对照组相比, AGE-BSA 浓度为100 μg/ml 处理24 h 或浓度为200 μg/ml 处理12 h或24 h后, 骨髓MSCs 增殖活性明显下降, 差异具有统计学意义。基因芯片检测发现骨髓MSCs 在AGE-BSA作用12 h和24 h后均有17 个基因表达发生变化, 且两个时间点的差异基因相同, 其中表达上调基因12 个, 表达下调基因5 个。表达上调基因中包括4 个炎性因子(CCL3、CCL2、CCL4 和IL-1β)。结论 AGEs 可抑制骨髓MSCs的增殖, 此可能与糖尿病性骨质疏松症的发生密切相关。     

骨髓间充质干细胞的贴壁培养及内毒素对其增殖活性的影响

目的贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并观察不同浓度内毒素对其增殖活性的影响。方法采用全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,免疫细胞化学方法检测细胞CD44、CD29、CD34的表达,流式细胞术检测细胞周期。加不同浓度的内毒素(0、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)作用24h,用四唑盐比色法(MTT)检测BMSCs的增殖。结果分离培养的细胞三代以后呈均一的成纤维细胞样形态,高表达CD44,但不表达CD34、CD45。80%以上的第三代BMSCs处于G1期。不同浓度的LPS作用24h后各组的平均吸光度值(A)比较有统计学意义(F=3.598,P=0.007);0.01μg/mlLPS组A值与其余各组相比,具有统计学意义(P0.05)。结论全骨髓贴壁培养法可以方便、快捷地获得BMSCs,其在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性;0.01μg/mlLPS可明显促进BMSCs的增殖。     

VEGF基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法:体外分离、培养、鉴定MSCs,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染MSCs,转染后用免疫荧光和ELISA检测MSCs表达VEGF蛋白的情况,MTT检测MSCs对VEGF质粒转染的敏感性。结果:骨髓中分离得到MSCs,流式细胞检测显示MSCs不表达CD34和CD45,但表达CD90。透射电镜观察可见细胞浆中含大量粗面内质网和分泌颗粒。VEGF基因转染MSCs后第5天抗VEGF免疫荧光染色约90%的MSCs呈阳性,ELISA检测结果显示PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组细胞培养上清液中VEGF含量明显高于对照组,并于转染后第5天达到峰值。MTT检测结果显示VEGF质粒转染对MSCs增殖无影响。结论:MSC可作为VEGF基因转染的靶细胞用于基因治疗。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠残肾组织归巢因子表达的影响

目的 观察红细胞生成素(EPO)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾组织归巢因子表达的影响.方法 采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型.实验动物随机分为3组:假手术组、CRF模型组和EPO治疗组.从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO 50 IU/kg,每周3次,共6周.8周后检测各组大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白、血红蛋白(Hb)；采用实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组化方法检测残肾组织EPO及其受体(EPOR)、归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)的表达.结果 与模型组比较,EPO治疗可上调残肾组织归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05)；同时,EPO治疗还可上调残肾组织EPO及EPOR的mRNA和蛋白的表达(均P＜ 0.05).此外,EPO治疗还能下调大鼠Scr、BUN和尿蛋白水平(均P＜0.05),上调Hb水平(P＜0.05).结论 EPO能改善慢性肾衰竭大鼠的肾功能,这种作用可能与其激活残肾组织归巢因子而参与损伤肾脏的修复有关.     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

Objective To observe the influence of hIL-10-MSCs on apoptosis of rats subject to discordant liver xenotransplantation. Methods The model of guinea pig to rat discordant liver xenotransplantation was set up. The orthotopic liver transplantation model was established by using modified two-cuff technique. Following groups were designed: control group, MSCs group and hIL-10MSCs group. Before and after operation, the recipients in control group were injected with normal sodium (2 ml) and decaesadril (0.5 ml) ;Those in MSCs group were injected with MSCs (4.0× 106/ml)and decaesadril (0.5 ml); Those in hIL-10-MSCs group were injected with hIL-10-MSCs (4.0 × 106/ ml)and decaesadril (0.5 ml). Twelve h after operation, the livers of recipient were observed by HE staining and electron microscope, and apoptosis of the livers was detected by using TUNEL. The expression levels of hIL-10, caspase-3, Fas and FasL were assayed by Western blot or immunohistochemistry. Results As compared with control group and MSCs group, the pathological changes was alleviated, the expression of IL-10 was significantly increased, the expression of FasL was significantly reduced in hIL-10-MSCs group. The positive area size of Fas and Caspase-3 in hIL-10MSCs group was 11.5 % and 25.1 %, respectively, significantly smaller than those in control group (35.3 % and 70.8 % respectively, P＜0.05. Apoptosis index in hIL-10-MSCs group was 32.5 %,which was significantly lower than in control group (74.1%) and MSCs group (50. 3 % ). ConclusionhIL-10-MSCs can notably decrease apoptosis of the transplanted liver probably by inhibiting theexpression of Fas/FasL.     

体外转染GFP-Bcl-2基因对低氧条件下间充质干细胞细胞周期的影响

目的探讨低氧条件下诱导骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）向目标细胞分化为相关疾病提供了潜在的临床治疗途径。方法将表达GFP-Bcl-2的慢病毒载体转染大鼠骨髓MSCs使其过量表达（GFP-Bcl-2-MSCs）。在低氧环境下诱导其分化并检测细胞凋亡和增殖。采用流式细胞术检测MSCs和GFP-Bcl-2-MSCs在低氧条件下MSCs细胞细胞周期分布。采用Western blot检测不同组细胞cyclinD1、cyclinE及PCNA表达变化。结果在体外低氧诱导条件下,Bcl-2基因对MSCs有明显的抗凋亡功能。与空载体对照组相比：实验组（GFP-Bcl-2-MSCs）细胞凋亡率下降27%,细胞增殖率升高了58%。但细胞周期分布及cyclinD1、cyclinE、及PCNA的表达无明显差异。结论研究证实了抗凋亡基因修饰的MSCs（GFP-Bcl-2-MSCs）在低氧环境下可抑制细胞凋亡,但细胞周期的相关机制需要进一步研究。     

促红细胞生成素预处理增强大鼠骨髓间充质干细胞定向归巢能力的初步研究

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖及迁移能力的影响.方法 将第5代BMSC分为5组,分别为对照组(不加EPO)及10、100、500、1000 IU/mL EPO组,培养24 h和48 h后检测各组BMSC的增殖率、迁移能力以及趋化因子受体(CXCR)4的表达情况.将第5代BMSC...     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

目的 探讨转染人白细胞介素10(Hil-10)基因的骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠异种移植肝脏细胞凋亡的影响.方法 以携带Hil-10基因的慢病毒Hil-10/LOX-cwGFP转染豚鼠的MSC.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,利用两套管法行原位肝移植.空白对照组的受者分别于术前24 h和术后24 h经股静脉注射生理盐水2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次;MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2mg/ml)各1次;Hil-10-MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的Hil-10-MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次.术后12 h切取移植肝脏,观察移植肝组织学变化,测定肝组织中Hil-10、凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)、Fas和FasL的表达,观察肝细胞的凋亡情况.结果 与空白对照组、MSC组相比,Hil-10-MSC组的病理改变最轻,IL-110表达明显增加,FasL明显减少.Hil-10-MSC组的Fas和Caspase-3的阳性区域面积分别为11.5%和25.1%,明显低于空白对照组的35.3%和70.8%(P＜0.05).Hil-10-MSC组的凋亡指数为32.5%,明显低于空白对照组的74.1%和MSC组的50.3%(P＜0.05).结论 Hil-10-MSC可明显减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡,其机制可能与其抑制Fas/FasL的表达有关.     

C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞的体外优化培养和酒精及其代谢物毒性效应的探讨

目的建立C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)的体外分离和培养体系,探讨酒精及其代谢物对MSCs的毒性。方法从C57/BL6小鼠的股骨骨髓中分离MSCs,通过优化细胞的培养方法进行有效培养、传代,最终获得纯度较高的MSCs,并对第4代细胞进行CD90和CD34免疫组织化学染色鉴定。对第2代细胞以4×105个/ml密度接种于96孔板,每孔200μl,第2天以用乙醇及乙醛进行染毒,剂量设计为乙醇5.7、17.0、50.0、100.0、150.0mmol/L,乙醛4.5、0.9、0.18、0.036、0.0072、0.00144、0.000288mmol/L,对照组为MSCs以不加乙醇及乙醛的10%胎牛血清的α-MEM培养液培养。3d后MTT检测细胞增殖活性。结果MSCs在前6代表现出较好的稳定性和旺盛的自我增殖能力,免疫组织化学染色显示第4代MSCsCD90呈阳性、CD34呈阴性。MTT检测乙醇在17.0、100.0及150.0mmol/L时出现细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);乙醛>0.18mmol/L时随着浓度增加细胞增殖力减弱,在4.5mmol/L时出现了细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论优化培养体系能有效分离和培养MSCs,乙醇和乙醛均能抑制其增殖,表现出毒性作用,乙醛的毒性作用较乙醇强,其造成的损伤更不容忽视。     

帕米膦酸二钠对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

目的观察帕米膦酸二钠对人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)生物学特性的影响,以探索双磷酸盐导致骨组织损伤的机制。方法人骨髓MSC培养体系中加入不同浓度的帕米膦酸二钠,培养72 h后,MTT法测定490 nm光密度值,观察细胞增殖情况;培养1周后,流式细胞技术检测细胞表面分子表达。体外诱导MSC成骨分化,体系中加入1μg/mL帕米膦酸二钠,1周后PCR法测定细胞Runx-2表达水平,2周后组织化学法测定细胞内碱性磷酸酶活性,以细胞总蛋白量为参照,观察MSC成骨分化的差异。结果 MTT结果显示,在0.1~10μg/mL浓度范围内,帕米膦酸二钠抑制人骨髓MSC增殖,作用呈浓度依赖性,最低作用浓度为1μg/mL,72 h OD490显著低于对照组(P<0.01)。流式细胞检测显示,帕米膦酸二钠处理后,细胞仍均一表达CD44和CD73,不表达CD31和CD45。PCR及细胞化学结果显示,帕米膦酸二钠无促进MSC成骨分化作用,也未提高成骨诱导体系促分化效果。结论帕米膦酸二钠可抑制MSC增殖,不促进其体外成骨能力,可能是长期使用双磷酸盐导致骨损伤的机制之一。     

富血小板血浆对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨活性的作用

目的　观察富血小板血浆 (platelet- rich plasma,PRP)在体外培养骨髓间充质干细胞 (marrowmesenchymal stem cells,MSCs)的增殖及成骨作用 ,探讨 PRP促进骨修复的细胞和分子机制。　方法　体外培养人MSCs,分为实验组 (n=9)与对照组 (n=9) ,实验组进行 PRP干预 (10μl/ ml培养液 )。于不同时间点收集两组细胞 ,以流式细胞仪检测 S期比例 ,MTT法检测细胞增殖活性 ,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AL P)测定和四环素荧光法检测细胞成骨活性 ,逆转录 PCR检测成骨启动基因 cbfa1的表达。　结果　 PRP作用于 MSCs,可刺激细胞增殖 ,流式细胞仪检测 PRP加入后 2 4 h S期比例由对照组 7.2± 0 .5至 14 .5± 0 .4具有统计学意义 (P<0 .0 1) ,MTT法显示 PRP作用后细胞增殖加速 ,第 4天达到平台期。而 AL P活性在作用后 3、6和 9d达到 7.79± 1.98、9.5 1± 2 .31和 14 .0 3± 3.0 2 ,与对照组 2 .0 6± 0 .77、2 .84± 0 .82和 2 .5 8± 0 .84组间比较差异有统计学意义 (P<0 .0 5 )。矿化结节形成增多 ,逆转录 PCR显示 cbfa1的表达在 PRP加入 2、4和 8h逐渐加强。　结论　 PRP对骨修复的促进作用与其促进 MSCs增殖、加强成骨启动基因的表达、增强成骨活性的作用有关。     

hIL-10基因修饰骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及机制研究

目的 研究hIL-10基因修饰的MSCs(骨髓间充质干细胞)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及机制.方法 RT-PCR克隆hIL-10基因并将构建慢病毒hIL-10/pLOX-cwGFPs,然后将慢病毒转导hIL-10入豚鼠MSCs;ELISA测定hIL-10-MSCs培养上清hIL-10含量;CCK-8法检测hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞对体外混合淋巴细胞培养的影响;ELISA测定其培养上清对外周血单个核细胞分泌IFN-γ的影响.结果 成功构建慢病毒hIL-10/pLOX-cwGFP,hIL-10-MSCs培养上清的IL-10水平明显高于未转染(P<0.05);hIL-10-MSCs能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05);加入IL-2能逆转MSCs的抑制作用(P<0.05);hIL-10-MSCs培养上清组能抑制PHA刺激的PBMC分泌IFN-γ(P<0.05).结论 hIL-10-MSCs对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用,能抑制PHA刺激的PBMC分泌IFN-γ.     

兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

目的建立一种兔骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC）体外分离培养、扩增及鉴定的方法。方法骨髓穿刺法抽取新西兰白兔髂骨骨髓5ml，应用密度梯度离心法分离纯化MSC并进行体外扩增，倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况，计数细胞数目，绘制细胞乍长曲线。HE染色光镜观察细胞形态，采用CD44及CD34抗体进行间接免疫荧光标记鉴定培养的干细胞。结果成功建立了兔MSC体外分离及培养扩增的方法。生长动力学分析发现，传代细胞随传代次数的增加其增殖能力逐渐下降，第3～5代细胞增殖能力强，生长旺盛。所分离培养的细胞均表达CD44，不表达CD34。结论在体外采用密度梯度离心及贴壁培养法可获得高纯度的兔骨髓间充质干细胞，第3～5代细胞增殖能力强，可用于进一步的研究工作。     

肝细胞生长因子及骨髓间充质干细胞联合移植治疗慢性缺血性心脏病的实验研究

目的研究经肝细胞生长因子(HGF)及骨髓间充质干细胞(MSCs)联合移植治疗慢性缺血性心脏病的疗效。方法采集香猪髂骨骨髓,用密度梯度法和贴壁分离法相结合的方法分离、培养MSCs,通过细胞表面标记(CD34、CD44、CD71、Ⅷ因子和desmin)成份鉴定;HGF基因的重组腺病毒(AdHGF)+MSCs共培养并检验HGF对MSCs生物学特征的影响。经左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血香猪模型,将40只小型香猪采用随机对照分为5组(n=8),于缺血心肌处分别注射5×106/ml MSCs+4×109pfu 200μl AdHGF(MSCs+AdHGF组)、4×109pfu 200μl AdHGF(AdHGF组)、5×106/ml MSCs 200μl(MSCs组),4×109pfu 200μl AdNull(AdNull组)和生理盐水1 ml(对照组)。治疗4周后行心脏超声心动图,数字减影动脉造影(DSA),单光子发射计算机体层摄影(SPECT)心肌灌注检查及心肌凋亡细胞等检测。结果流式细胞仪检测MSCs表面标记CD44、CD71阳性,CD34、Ⅷ因子、desmin阴性;增殖细胞抗原(PCNA)蛋白表达显示HGF具有较强刺激MSCs增殖分化作用;彩色超声心动图检查提示:经治疗后MSCs+AdHGF组左心室舒张期末容积(LVEDV)、左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);DSA检测缺血区新生血管数MSCs+AdHGF组较AdHGF组、MSCs组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);SPECT显示MSCs+AdHGF组左室心肌增厚、灌注明显改善,运动增强,差异有统计学意义(P<0.05);心肌HE染色血管密度,MSCs+AdHGF组明显高于AdHGF组和MSCs组[(39.4±1.2)个/HPF vs.(36.5±1.4)个/HPF、(34.5±1.7)个/HPF,P<0.05];心肌TUNEL染色法检测,MSCs+AdHGF组、AdHGF组细胞凋亡率明显低于MSCs组(P<0.05)。结论 MSCs+AdHGF联合具有促进慢性缺血心肌新血管生成、抑制细胞凋亡、改善心功能等作用;MSCs+AdHGF联合治疗缺血性心脏病作用较单纯HGF或MSCs移植更明显。