三种分离人外周血单核细胞方法的比较

目的:用3种方法从人外周血分离单核细胞,比较细胞纯度、得率、实验成本及所需时间,选择最适宜的分离方法.方法:用密度梯度离心法获得外周血的单个核细胞,分别用贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法进一步分离单核细胞.经CD14抗体标记,用流式细胞术检测细胞纯度,计算细胞得率、实验成本及所需时间.结果:用贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法分离单核细胞,细胞纯度分别为18.8％、80％和73.4％;细胞得率为5％、11％和7.5％;每获得2×107个单核细胞,实验成本约500元、1 500元和2 100元,实验耗时约6h、6h和10h.结论:免疫磁珠法是最适宜的分离人外周血单核细胞的方法,具有细胞纯度与得率较高,实验成本较低,耗时较短的优点.     

三种获取人外周血单核细胞方法的比较

【目的】 通过贴壁分离法、免疫磁珠分离法和流式细胞术分离法从人外周血获取单核细胞,比较细胞纯度、细胞得率以及实验成本和耗时,发现通过免疫磁珠法获得的单核细胞纯度高、得率高,实验成本较低、耗时短,为获取人外周血来源的单核细胞提供实验依据。 【方法】 单核细胞由骨髓中的多能造血干细胞、髓样干细胞分化而来,在骨髓中发育,并进入血液,停留2~3 d后迁移到周围组织中。单核细胞数量少,且独立的细胞株难以获得。那么在实验中如何获得足够数量,状态良好的单核细胞呢？单核细胞占外周血细胞的3%~8%,可从血液中分离获得。贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法是分选单核细胞的经典方法,如何根据现有的实验条件,结合细胞纯度、细胞得率、实验成本、耗时四项指标选择最适合的一种实验方法呢？ 【结果】 我们发现,通过贴壁分离法,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度18.8%,细胞得率5%,成本为500元,耗时6 h。通过免疫磁珠法,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度80%,细胞得率11%,成本为1 500元,耗时6 h。而用流式细胞术分离细胞,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度为73.4%,细胞得率7.5%,成本为2 100元,耗时10 h。综合分析细胞纯度、细胞得率以及实验成本和耗时,免疫磁珠法具有细胞纯度高、得率高,实验成本较低、耗时短的优点。 【结论】 因此,我们采用免疫磁珠法分离外周血单核细胞。     

维持性血液透析病人外周血单核细胞凋亡与线粒体异常的关系

目的探讨维持性血液透析（ＨＤ）病人外周血单核细胞凋亡与线粒体异常的关系。方法２０例ＨＤ病人体外培养的外周血单核细胞以流式细胞术通过荧光素标记的ＡｎｎｅｘｉｎＶ检测早期凋亡细胞的膜表面磷酯酰丝氨酸残基（ＰＳ）,线粒体跨膜潜能（ΔΨｍ）通过线粒体探针ＤｉＯＣ６（３）分析。线粒体渗透转移（ＰＴ）肿胀通过分光光度计记录。结果ＨＤ病人体外培养的外周血单核细胞在２４、７２小时自发凋亡（４１．４±１２．２）％,（２２．０±３．０）％,明显超过正常对照组（２０．６±８．８）％,（９．８±２．１）％;新鲜分离的单核细胞在病人组和正常对照组细胞凋亡无差异,然而在病人组ΔΨｍ降低达（４３±９）％。ＨＤ病人新鲜分离单核细胞ＰＴ肿胀高达（８０±６）％明显超过正常对照组（５±３）％。结论线粒体肿胀和ΔΨｍ降低是导致ＨＤ病人外周血单核细胞凋亡的原因,这是ＨＤ病人单核细胞防御功能下降的另一主要因素     

急性单核细胞白血病免疫表型研究

目的 探讨急性单核细胞白血病（Ｍ５）的免疫表型特征及其诊断价值。方法 采用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术及间接免疫荧光技术对６０例ＦＡＢ分型拟诊为Ｍ５的患者进行免疫表型分析。结果 ４例诊断为急性巨核细胞白血病,５例为急性淋巴细胞白血病;５１例最后诊断为Ｍ５的患者中,免疫分型显示８％裸型,４９％表达ＣＤ３４,髓系标志以ＣＤ１３表达最高,其次为ＣＤ３３和ＣＤ１４,分别有２４％和１８％的患者表达Ｔ系     

急性单核细胞白血病免疫表型研究

目的　探讨急性单核细胞白血病（Ｍ５）的免疫表型特征及其诊断价值。方法　采用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术及间接免疫荧光技术对６０ 例ＦＡＢ分型拟诊为Ｍ５ 的患者进行免疫表型分析。结果　４ 例诊断为急性巨核细胞白血病,５ 例为急性淋巴细胞白血病;５１ 例最后诊断为Ｍ５ 的患者中,免疫分型显示８％ 裸型,４９％ 表达ＣＤ３４ ,髓系标志以ＣＤ１３ 表达最高,其次为ＣＤ３３ 和ＣＤ１４,分别有２４ ％ 和１８％ 的患者表达Ｔ 系和Ｂ系相关抗原。结论　免疫分型对于急性单核细胞白血病的诊断具有重要价值     

小鼠原代骨髓单核细胞分离与培养方法的改进

目的 探索更好的原代小鼠骨髓单核细胞的分离与培养方法。方法 将小鼠股骨取出置入预冷的PBS中修剪、冲出骨髓组织至预冷的DMEM培养基中,吹打混匀制成单细胞悬液后过滤。应用差速贴壁方法培养6～8 h后留取未贴壁的细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养7 d,获得小鼠骨髓单核巨噬细胞。光镜下观察细胞形态;流式细胞术检测骨髓单核巨噬细胞表面抗原CD11b、F4/80的表达,评估细胞纯度;应用转化生长因子(TGF)-β₁和M-CSF培养将其诱导分化为肌成纤维细胞,免疫印迹检测其标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 冰上预冷缩短热缺血时间方法分离的骨髓单核细胞损伤小,细胞形态均一,纯度高(可达95%以上),较对照组有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);加入TGF-β₁共培养后可见细胞呈细长纺锤形,与对照组相比,α-SMA的表达明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 本方法分离提取的原代小鼠骨髓单核细胞纯度高,状态良好,表型稳定,满足做进一步实验研究的要求。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞表面Toll样受体2(toll-likereceptor-2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor-4,TLR4)表达的变化。方法:流式细胞术分别检测75例SLE患者(SLE组)和44名正常人(对照组)外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的阳性率和平均荧光强度(meam fluorescence intensity,MFI)。统计分析TLR2和TLR4阳性率和MFI与相关临床与实验室指标的相关性。结果:TLR2在SLE组外周血CD14+单核细胞表面的阳性率和MFI均低于对照组;而TLR4在SLE组外周血CD14+单核细胞表面的阳性率高于对照组,但MFI表达低于对照组(P<0.01)。TLR2阳性率与SLE活动指数呈负相关(P<0.01)。结论:TLR2和TLR4在SLE患者外周血CD14+单核细胞表面表达有显著变化,提示可能与SLE的发生及病情存在一定的关联。     

人单核细胞表达蛋白酶激活受体

目的：使用高纯化的人外周血单核细胞研究蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）在单核细胞上的表达。方法：采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞,采用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析单核细胞PARs表达情况。结果：流式细胞分析示人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3、PAR-4蛋白质,但不表达PAR-2蛋白质;RT-PCR示单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但不表达PAR-2和PAR-4 mRNA。结论：单核细胞表达PARs,为进一步研究PARs在单核细胞上的功能提供依据。     

TOLL样受体2及4在脊柱关节炎患者外周血CD14^＋单核细胞表面的表达及意义

目的观察脊柱关节炎（SpA）患者外周血CD14＋单核细胞Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其与临床指标的关系,探讨其在SpA的发病中的作用。方法选择2008年7月~2009年1月蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科确诊SpA患者71例,并选择30名健康体检者作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血CD14＋单核细胞表面TLR2、TLR4阳性细胞的表达的百分率及平均荧光强度（MFI）。根据BASDAI评分将SpA患者组分为活动组54例（BASDAI评分〉4分）和非活动组17例（BASDAI评分≤4分）,分别比较活动组、非活动组和正常对照组三组间TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI的差异,并分析TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI与相关临床和实验室指标的相关性。结果 TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达百分率在活动组、非活动组及正常对照组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR2＋外周血CD14＋单核细胞表面MFI在各组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率在活动组和非活动组[（42.5±11.1）%、（32.9±9.4）%]与正常组相比[（22.3±7.5）%],差异有高度统计学意义（P〈0.01）,活动组和非活动组之间相比差异有高度统计学意义（P〈0.01）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的MFI在各组间比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgA呈正相关（P〈0.05）,TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgG呈正相关（P〈0.05）。结论 TLR4在SpA患者外周血CD14＋单核细胞表面表达有显著性变化,提示TLR4可能与SpA发生及病情存在一定的关联,TLR4和TLR2的表达可作为疾病活动度的参考指标。     

外周血单核细胞水平与老年术后认知功能障碍的相关性研究

目的 探讨外周血单核细胞水平与老年术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction, POCD)的相关性。方法 采用前瞻性观察性临床研究方法,选取2021年10月~2022年3月于徐州医科大学附属医院全麻下行择期全髋关节置换术的96例老年患者,术后7天根据简易精神状态量表(mini-mental state examination, MMSE)评分将患者分为POCD组(n=26)和非POCD组(n=70)。记录术前和术后1天单核细胞及其他相关指标。根据受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析单核细胞对老年全髋关节置换术患者发生POCD的预测价值。使用单因素和多因素Logistic回归分析评价危险因素。结果 术前单核细胞水平预测老年全髋关节置换术患者发生POCD的最佳截断值为0.55×10⁹/L,ROC曲线下面积为0.729。单因素Logistic回归分析结果显示,受教育水平低、美国麻醉医师协会(American Society of Anesthesiologists, ASA)分级高、手术前后单核细胞水平高均为POCD的危险因素;多因素Logistic回归分析结果显示,术前单核细胞水平与POCD的发生独立相关。结论 术前外周血单核细胞水平与POCD的发生相关,术前单核细胞水平升高是POCD的独立危险因素,有助于预测POCD的潜在风险。     

蛋白酶激活受体在人单核细胞上的表达

目的蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）表达于几乎所有的造血细胞上,PARs在单核细胞上的表达结果不一致,我们用高纯化的人外周血单核细胞研究PARs在单核细胞的表达。方法采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）、流式细胞仪分析单核细胞PARs的表达情况。结果人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3和PAR-4但不表达PAR-2蛋白质,单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但是不表达PAR-2和PAR-4 mRNA。结论单核细胞表达PARs,这为进一步研究PARs在单核细胞的功能奠定了基础。     

传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞免疫表型研究

目的研究传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞的免疫表型.方法用流式细胞术对21例传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞的免疫表型进行分析,并以30名健康体检幼儿作为对照.结果传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞在流式细胞仪FS和SS散点图上形成淋巴细胞群向上拖尾的特殊形状,其免疫表型的表达分别是CD3 /CD8 占(78 2±5.4)%,CD3 /CD4 占(13.1±3 4)%,CD3-/CD16 56 占(4.0±1.2)%和CD8 /CD28 占(33.5±6.1)%,与对照组比较差别均有显著性意义(均P＜0.01).结论流式细胞术的淋巴细胞群向上拖尾的特征,以及CD3 /CD8 高表达,可作为传染性单核细胞增多症的诊断指标之一.     

小儿传染性单核细胞增多症患者外周血CD45RO＋、CD45RA＋T淋巴细胞亚群表达的研究

目的探讨传染性单核细胞增多症（IM）患儿CD4＋T辅助淋巴细胞CD4＋CD45RO＋和CD4＋CD45RA＋T淋巴细胞亚群的变化.方法用流式细胞术检测了30例活动期IM、急性期及恢复期患者CD4＋T辅助细胞CD45RO、CD45RA的表达率,并与对照组进行了比较.结果 IM患者急性期与对照组相比CD4＋CD45RO＋明显增高（P〈0.05）,CD4＋CD45RA＋明显对低于对照组（P〈0.05）;恢复期CD4＋CD45RO＋与急性期比较明显降低（P〈0.05）,但仍高于正常对照组（P〈0.05）;CD4＋CD45RA＋与急性期相比明显升高（P〈0.05）,但仍低于对照组（P〈0.05）.结论 CD4＋CD45RO＋和CD4＋CD45RA＋T淋巴细胞在IM患者的细胞免疫中起重要作用,CD45RA＋T辅助细胞减少是导致机体免疫功能失去平衡的重要原因.     

IM患者外周血淋巴细胞亚群的变化及其意义

目的观察传染性单核细胞增多症（IM）患者外周血淋巴细胞亚群的变化,探讨机体免疫功能和IM发病的关系。方法采用多参数流式细胞术（FCM）检测40例IM患者（IM组）和30例正常对照组（对照组）外周血的T淋巴细胞（CD3＋）及其亚群（CD3＋CD4＋,CD3＋CD8＋）、CD19＋和CD16＋56＋（NK）细胞,并进行比较。结果与对照组相比,CD3＋CD4＋T细胞、CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋T细胞比值、CD19＋和CD16＋56＋细胞显著降低（P〈0.01）,CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞水平则显著升高（P〈0.01）。结论 IM患者外周血淋巴细胞亚群异常,可能存在细胞与体液免疫功能紊乱,淋巴细胞亚群可做为IM患者免疫状态及评估预后的重要指标。     

成人外周血单核细胞比例偏高结果分析

血液分析仪的使用大大提高了临床血液学的工作效率,缩短了检验的时间。在日常工作中发现这类仪器在鉴别细胞形态和结构方面还不够完善,遇见结果异常或有疑问时必须涂片瑞氏染色显微镜细胞形态复检后再出报告,避免漏诊和误诊。现将我