免疫PCR

将抗原抗体反应与ＰＣＲ技术结合在一起建立了一种新的检测微量抗原的技术，这种技术称之为免疫ＰＣＲ，其具有非常高的敏感性，比ＥＬＩＳＡ敏感１０５倍，在理论上可以检测到一个分子的抗原，因此，免疫ＰＣＲ具有非常广泛的应用前景。     

免疫PCR

将抗原抗体反应与ＰＣＲ技术结合在一起建立了一种新的检测微量抗原的技术，这种技术称之为免疫ＰＣＲ，其具有非常高的敏感性，比ＥＬＩＳＡ敏感１０＾５倍，在理论上可以检测到一个分子的抗原，因此，免疫ＰＣＲ具有非常广泛的应用前景。     

一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

毛细管PCR技术在传染病快速诊断上的初步应用

常规ＰＣＲ反应需要２～６小时，而在毛细管ＰＣＲ反应中，由于采用毛细管作为反应容器，因此能在１５分钟完成３０个循环。对国产毛细管ＰＣＲ仪进行优化的结果表明：循环参数为９４℃０秒（即＜１秒），５０℃～５５℃０秒，７２℃２０秒，ＰＣＲ反应达到最佳。敏感性实验表明：常规ＰＣＲ可检测１．０ｆｇＨＢＶＤＮＡ，毛细管ＰＣＲ可检测０．１ｆｇＨＢＶＤＮＡ。用１１种引物从多种标本中成功地扩增了９种病原微生物相应基因片段。建立了ＫＩ－玻璃粉法快速制备ＰＣＲ模板的方法，几乎适合所有类型的临床标本。将毛细管ＰＣＲ用于检测血清中ＨＢＶＤＮＡ，结合快速热处理法制备ＰＣＲ模板，可在１．５小时内对２０例标本报告结果。毛细管ＰＣＲ技术的建立，为传染病的基因诊断向快速化发展开辟了新的途径。     

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别PCR技术

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别ＰＣＲ技术方刚，于泽平，刘复坤（南京军区总医院肿瘤室，南京２１０００２）差别ＰＣＲ技术，快速、敏感无同位素污染，该技术的检测原理是在一定的ＰＣＲ反应条件下，ＰＣＲ产物的量与ＰＣＲ模板的拷贝数是正相关，反映了模板拷贝...     

应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＯＲ（ＲＴ－ＰＵＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达的细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＫＮＡ，分离、ｍＫＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬ－ＰＣＲ法以及酶联免疫定量ＰＣＲ５种方法。该法由于非常敏感，易产生假阳性结果，一般实验中常设置阴性对照，本文拟就有关问题作一综述。     

用PCR检测难分类急性白血病基因重排

用ＰＣＲ检测难分类急性白血病基因重排王鲁群张明珙①宋素芹①马晓星迟翠芳（济南军区总医院，济南２５００３１）采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２例形态学和免疫学均难以分类急性白血病（ＵＡＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，旨...     

肾移植术后淋巴细胞相关基因表达的差异分析

肾功能衰竭后 ,肾移植是必要的治疗手段 ,然而急性排斥反应严重影响移植器官的功能和长期存活。目前 ,移植排斥反应的发生机制尚不十分明确 ,亦未发现可早期特异诊断免疫排斥反应的指标 ,因而临床尚无早期检测排斥反应的有效方法。移植排斥反应的发生 ,其早期重要的事件是淋巴细胞与异体抗原识别后的活化增殖。本实验利用差异显示ＰＣＲ (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲ ,ＤＤＲＴ ＰＣＲ)技术 ,对一例肾移植术后患者外周血淋巴细胞基因表达变化进行连续监测 ,为建立早期、无创、特…     

冰冻组织特定区域的RNA快速提取及其RT-PCR分析

目的 为减少ＲＮＡ提取过程中不同细胞和组织间的交叉污染，提高逆转录ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲ，ＲＴ－ＰＣＲ）结果的特异性的可靠性。方法 建立冰冻组织特定区域的ＲＮＡ快速提取及ＲＴ－ＰＣＲ检测技术。首先，制备５μｍ和２０μｍ的连续冰冻切片，前者用于常规组织学染色和针对靶基因产物的免疫组织化学染色。依观察结果，在２０μｍ的切片上，分离某一特定区域做快速ＲＮＡ提取和ＲＴ－Ｐ     

检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR

目的;建立一种免疫捕捉法ＰＣＲ技术,研究血清免疫复合物中不同Ｉｇ类型抗体结合ＨＢＶ的情况,并初步探讨其意义。方法：以羊抗人μ,γ,α链的ＩｇＧ为捕捉抗体,再利用ＰＣＲ扩增捕捉物中的ＨＢＶＤＮＡ。结果;成功地建立了检测ＨＢＶＤＮＡ／ＩｇＭ,ＩｇＧ和ＩｇＡ－ＴＣＩＣ的免疫捕捉法ＰＣＲ技术。     

定量PCR及其在丙型肝炎中的应用

定量ＰＣＲ是一种高度敏感、特异的检测技术，它可从基因水平上反应病原的活动性。本文介绍了定量ＰＣＲ的基本原理、方法及其在丙型肝炎诊断、治疗等方面的应用新进展。     

红细胞CR_1分子定量技术学习班在上海举办

由中国免疫学会红细胞免疫专业学组和上海免疫学会免疫技术组共同组织，并由长海医院承办的红细胞ＣＲ１分子定量技术学习班１９９９年６月４日至６月６日在上海市长海医院举办，学习班系统介绍了有关红细胞ＣＲ１数量与功能研究进展及国外有关抗红细胞ＣＲ１和抗致病原双价单抗嵌合体提高红细胞免疫功能，促进致病原清除的治疗研究进展及红细胞ＣＲ１分子定量技术进展，并演示了从国外引进的抗红细胞ＣＲ１单抗免疫酶联技术结合红细胞ＣＲ１活性测定技术。郭峰教授还介绍了近期在美国参观访问有关内容的体会。学员对新技术进行了亲自操作，…     

抗原肽－MHC－TCR三元体一特异性免疫应答的分子基础

抗原肽－ＭＨＣ－ＴＣＲ三元体一特异性免疫应答的分子基础周光炎（上海市免疫学研究所上海第三医科大学上海２０００２５）Ｔ淋巴细胞在特异性免疫应答中起关键作用。Ｔ细胞通常识别由抗原递呈细胞ＡＰＣ提交，并与ＭＨＣ分子相结合的抗原片段层，因而在Ｔ细胞和ＭＣ之间...     

聚合酶链反应技术中关键环节的探讨

聚合酶链反应技术中关键环节的探讨钟镐镐，衡万杰，方伟岗自１９９０年我们的实验室开展了ＰＣＲ技术，并遇到了许多实际问题，如：完全相同的试剂，在不同的实验室对同一目的基因作扩增时，却出现不同的结果。还有，相同的ＰＣＲ反应体系和反应条件对同一细胞系细胞内存...     

PCR技术与实体瘤微转移的研究

肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤的重要特征，也是肿瘤病人死亡的主要原因。许多恶性肿瘤患者常规病理学检查未显示有肿瘤转移，但术后仍有部分患者死于肿瘤的复发与转移。这提示，临床常规方法尚不能检出已转移的少量肿瘤细胞。近年来发展起来的免疫学和分子生物学技术，已能在肿瘤患者的血液、骨髓和淋巴结中检出少量肿瘤细胞，如在临床常规检查转移阴性的患者称之为微转移。本文主要简介应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ等技术在常见肿瘤检出     

半巢式聚合酶链反应一次加样法检测乙型肝炎病毒DNA

为了提高聚合酶链反应(ＰＣＲ)的敏感性和特异性,曾设计了巢式ＰＣＲ、半巢式ＰＣＲ,实验需进行2次加样,我们可将这种巢式ＰＣＲ称为巢式ＰＣＲ2次加样法。这种巢式ＰＣＲ提高了ＰＣＲ的敏感性,但由于需进行两次加样,第1次ＰＣＲ扩增产物有可能对2次ＰＣＲ造成交叉污染,增加了出现假阳性的机会。为了克服这一缺陷,ＨｉｇｕｃｈｉＲ设计了一种称为“ｄｒｏｐｉｎ,ｄｒｏｐｏｕｔｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄＰＣＲ”方法用于ＨＩＶ检测,通过设计内部、外部的不同长度引物和不同反应浓度,改变循环温度,3个ＰＣＲ引物同时加入反应管进行2次ＰＣＲ反应,…     

应用间接法原位PCR检测石蜡切片中HPV DNA

应用间接法原位ＰＣＲ检测石蜡切片中ＨＰＶＤＮＡ王剑波王伯马福成陈万录杨莉胡沛臻聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是一种对特定的ＤＮＡ片段在体外经酶促反应进行快速扩增的技术。它是一种极其敏感的技术。间接法原位ＰＣＲ是先将待检基因在原位进行ＰＣＲ扩增，然后再用原...     

聚合酶链反应技术在病理研究中的应用

本文综述了ＰＣＲ应用于病理的有关问题，主要包括石蜡切片ＰＣＲ技术，固定剂的选择，原位ＰＣＲ和定点ＰＣＲ等。     

戊型肝炎病毒ORF2 C端抗原片段的表达及其免疫 …

目的 表达戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）ＯＲＦ２ Ｃ端１２８个氨基酸残基的抗原片段ＯＲＦ２．３,并进行其免疫学特性的研究。方法 用ｐＢＶ２２０载体进行抗原的非融合表达,包涵体经变性凝胶过滤层析及离子交换层析纯化后透析复性,以Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ、动物免疫与抗原籍捕获ＲＴ－ｍＰＣＲ等方法研究其免疫学特性。结果 获得了ＯＲＦ２．３的高效表达,表达量占菌体总蛋白     

聚合酶链反应检测HBV DNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究

聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞，丁雁本文用套式ＰＣＲ检测３１８例患者血清乙肝病毒ＤＮＡ，同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半，以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法１．血清标本来源门诊及住院病人，...