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免疫PCR 总被引:2,自引:0,他引:2
郑永晨 《国外医学:免疫学分册》1996,19(1):42-44
将抗原抗体反应与PCR技术结合在一起建立了一种新的检测微量抗原的技术,这种技术称之为免疫PCR,其具有非常高的敏感性,比ELISA敏感10^5倍,在理论上可以检测到一个分子的抗原,因此,免疫PCR具有非常广泛的应用前景。 相似文献
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一种快速简便的缺失突变方法 总被引:2,自引:1,他引:2
为了构建能表达稳定的、不易降解的TM-TNF突变体(TM-TNFm)的基因,本文用改良的S-PCR和OE-PCR两种定位突变技术,成功地构建了缺失36个碱基的pBSK-TM-TNF突变重组体。与OE-PCR技术(用两对引物进行两次PCR反应)相比较,S-PCR技术(用一对引物做一次PCR反应)具有快速、经济、简便等优点,但其突变率较OE-PCR低。 相似文献
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毛细管PCR技术在传染病快速诊断上的初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
常规PCR反应需要2~6小时,而在毛细管PCR反应中,由于采用毛细管作为反应容器,因此能在15分钟完成30个循环。对国产毛细管PCR仪进行优化的结果表明:循环参数为94℃0秒(即<1秒),50℃~55℃0秒,72℃20秒,PCR反应达到最佳。敏感性实验表明:常规PCR可检测1.0fgHBVDNA,毛细管PCR可检测0.1fgHBVDNA。用11种引物从多种标本中成功地扩增了9种病原微生物相应基因片段。建立了KI-玻璃粉法快速制备PCR模板的方法,几乎适合所有类型的临床标本。将毛细管PCR用于检测血清中HBVDNA,结合快速热处理法制备PCR模板,可在1.5小时内对20例标本报告结果。毛细管PCR技术的建立,为传染病的基因诊断向快速化发展开辟了新的途径。 相似文献
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一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别PCR技术方刚,于泽平,刘复坤(南京军区总医院肿瘤室,南京210002)差别PCR技术,快速、敏感无同位素污染,该技术的检测原理是在一定的PCR反应条件下,PCR产物的量与PCR模板的拷贝数是正相关,反映了模板拷贝... 相似文献
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应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达 总被引:3,自引:0,他引:3
逆转录POR(RT-PUR)可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达的细胞因子mRNA。这项技术又叫细胞因子mRNA扩增测定技术(即MApping)。可同时测定各种细胞中多种细胞因子mRNA。操作过程包括KNA,分离、mKNA逆转录为cDNA,PCR扩增、产物检测等。根据定量细胞因子mRNA原理和方法的不同,可分为半定量PCR法、竞争性定量PCR法、内参标定量PCR法、HPL-PCR法以及酶联免疫定量PCR5种方法。该法由于非常敏感,易产生假阳性结果,一般实验中常设置阴性对照,本文拟就有关问题作一综述。 相似文献
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用PCR检测难分类急性白血病基因重排王鲁群张明珙①宋素芹①马晓星迟翠芳(济南军区总医院,济南250031)采用聚合酶链反应(PCR)技术检测12例形态学和免疫学均难以分类急性白血病(UAL)免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ基因重排,旨... 相似文献
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肾移植术后淋巴细胞相关基因表达的差异分析 总被引:1,自引:0,他引:1
肾功能衰竭后 ,肾移植是必要的治疗手段 ,然而急性排斥反应严重影响移植器官的功能和长期存活。目前 ,移植排斥反应的发生机制尚不十分明确 ,亦未发现可早期特异诊断免疫排斥反应的指标 ,因而临床尚无早期检测排斥反应的有效方法。移植排斥反应的发生 ,其早期重要的事件是淋巴细胞与异体抗原识别后的活化增殖。本实验利用差异显示PCR (differentialdisplayreversetranscriptionPCR ,DDRT PCR)技术 ,对一例肾移植术后患者外周血淋巴细胞基因表达变化进行连续监测 ,为建立早期、无创、特… 相似文献
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冰冻组织特定区域的RNA快速提取及其RT-PCR分析 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 为减少RNA提取过程中不同细胞和组织间的交叉污染,提高逆转录PCR(reversetranscription PCR,RT-PCR)结果的特异性的可靠性。方法 建立冰冻组织特定区域的RNA快速提取及RT-PCR检测技术。首先,制备5μm和20μm的连续冰冻切片,前者用于常规组织学染色和针对靶基因产物的免疫组织化学染色。依观察结果,在20μm的切片上,分离某一特定区域做快速RNA提取和RT-P 相似文献
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陈新月 《国外医学:病毒学分册》1995,2(1):20-24
定量PCR是一种高度敏感、特异的检测技术,它可从基因水平上反应病原的活动性。本文介绍了定量PCR的基本原理、方法及其在丙型肝炎诊断、治疗等方面的应用新进展。 相似文献
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抗原肽-MHC-TCR三元体一特异性免疫应答的分子基础周光炎(上海市免疫学研究所上海第三医科大学上海200025)T淋巴细胞在特异性免疫应答中起关键作用。T细胞通常识别由抗原递呈细胞APC提交,并与MHC分子相结合的抗原片段层,因而在T细胞和MC之间... 相似文献
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PCR技术与实体瘤微转移的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
薛开先 《国外医学:遗传学分册》1997,20(5):227-230
肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤的重要特征,也是肿瘤病人死亡的主要原因。许多恶性肿瘤患者常规病理学检查未显示有肿瘤转移,但术后仍有部分患者死于肿瘤的复发与转移。这提示,临床常规方法尚不能检出已转移的少量肿瘤细胞。近年来发展起来的免疫学和分子生物学技术,已能在肿瘤患者的血液、骨髓和淋巴结中检出少量肿瘤细胞,如在临床常规检查转移阴性的患者称之为微转移。本文主要简介应用RT-PCR和PCR等技术在常见肿瘤检出 相似文献
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为了提高聚合酶链反应(PCR)的敏感性和特异性,曾设计了巢式PCR、半巢式PCR,实验需进行2次加样,我们可将这种巢式PCR称为巢式PCR2次加样法。这种巢式PCR提高了PCR的敏感性,但由于需进行两次加样,第1次PCR扩增产物有可能对2次PCR造成交叉污染,增加了出现假阳性的机会。为了克服这一缺陷,HiguchiR设计了一种称为“dropin,dropoutheminestedPCR”方法用于HIV检测,通过设计内部、外部的不同长度引物和不同反应浓度,改变循环温度,3个PCR引物同时加入反应管进行2次PCR反应,… 相似文献
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应用间接法原位PCR检测石蜡切片中HPVDNA王剑波王伯马福成陈万录杨莉胡沛臻聚合酶链式反应(PCR)是一种对特定的DNA片段在体外经酶促反应进行快速扩增的技术。它是一种极其敏感的技术。间接法原位PCR是先将待检基因在原位进行PCR扩增,然后再用原... 相似文献
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目的 表达戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2 C端128个氨基酸残基的抗原片段ORF2.3,并进行其免疫学特性的研究。方法 用pBV220载体进行抗原的非融合表达,包涵体经变性凝胶过滤层析及离子交换层析纯化后透析复性,以Westem blot、ELISA、动物免疫与抗原籍捕获RT-mPCR等方法研究其免疫学特性。结果 获得了ORF2.3的高效表达,表达量占菌体总蛋白 相似文献
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聚合酶链反应检测HBVDNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞,丁雁本文用套式PCR检测318例患者血清乙肝病毒DNA,同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半,以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法1.血清标本来源门诊及住院病人,... 相似文献