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分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用常规方法建立了4株稳定分泌抗重组人IL-6(rHuIL-6)单克隆抗体(McAb)小鼠杂交瘤细胞系1H3、2A10、3A3和4B1。其中,1H3为IgG2b(K),2A10为IgG1(K),3A3和4B1为IgG2a(K)。4株McAb特异性强,与细胞因子IL-1β、IL-3、IL-8、TNF-α、GM-SCF、ICAM-1,以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ELISA测定小鼠腹水McA 相似文献
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应用常规方法建立了4株稳定分泌抗重组人IL-6(rHuIL-6)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系1H3、2A10、3A3和4B1。其中,1H3为IgG2b(k),2A10为IgG1(k),3A3和4B1为IgG2a(k)。4株McAb特异性强,与细胞因子IL-1β、IL-3、IL-8、TNF-α、GM-SCF、ICAM-1,以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ELISA测定小鼠腹水McAb效价为10(-6)~10(-8)。应用识别不同表位的McAb建立了双抗体夹心ELISA法检测IL-6,敏感性为100pg/ml。初步应用表明可用于临床标本的检测。 相似文献
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应用常规方法制备了4株能稳定分泌抗人重组γ-干扰素单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系:3D3、3D12、3F9和3B8.经免疫琼脂双扩散法鉴定,其分泌的McAb的亚类分别为:IgG2b、IgG3、IgG1和1gG1.相对亲和常数前两株McAb为6.25×10-11、后两株McAb为6.25×10-13.问接ELISA法测培养上清的效价为2×102~1.28×105.由小鼠腹水提取的4株McAb与天然γ-干扰素均产生交叉反应,对重组的人γ-干扰素均具有中和活性.其中3F9和3D3培养上清对重组人γ-干扰素亦有明显的中和活性。用3F9McAb与溴化氢活化的SePharose4B偶联制备了亲和层析柱,用其纯化粗提的γ-干扰素纯度达到95%以上,比活性达1.9×107IU/mg蛋白. 相似文献
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本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了4株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素(rHuEPO)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系BⅡ1B5、DⅡ6B9、MⅡ1H4和GI3E7。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定,其分泌的McAb的类分别是IgM、IgM、IgG1和IgG2a。间接ELISA法测定细胞上清的效价为1×10-2~1.25×10-4,腹水效价为1×10-2~1×10-8。培养上清经ELISA鉴定,与IL-2、GM-CSF、IFN-α等细胞因子均无交叉反应,只与rHuEPO特异性结合。 相似文献
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人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以人心肌肌钙蛋白T(cTnT)为抗原,采用脾内免疫法,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠Sp2/0细胞融合,经间接ELISA法筛选,三次克隆化后获得5株能稳定分泌抗cTnT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞G3、G8、G10、A5和A7。免疫球蛋白亚类鉴定其中1株为IgG2a,4株为IgM。染色体数目92~110条。将G3、G8、G10、A5的单克隆抗体腹水做1:100稀释与LDH、CK、CKMB和GOT等心肌酶均无交叉反应。5株McAb的腹水效价为3.2×10-6~1.6×10-7。McAb相加试验表明,A5和G3可识别不同的抗原表位。 相似文献
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以重组人IL-1免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞653融合,得到一组分泌抗人重组IL-1单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的3株YA133、YA140和YA163进行了初步鉴定;抗体类别为IgG,亚类均为lgGl;免疫转印显示,3株抗体均能特异性地识别分子量为17.5kD的IL-1蛋白条带;ELISA法证明与其它细胞因子如:IL-2、IL-6、TND-α、IFN-γ和GM-CSF均无交又反应;放射免疫测定结果证实,3株抗体分别识别IL-1分子上两个不同的抗原决定簇。 相似文献
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以重组人IL-1免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞653融合,得到一组分泌抗人重组IL-1单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的3株 YA133、YA140和YA163进行了初步鉴定,抗体类别为IgG,亚类均为IgG1,免疫转印显示,3株抗体均能特异性地识别分子量为17.5kD的IL-1蛋白条带,ELISA法证明与其它细胞因子如:IL-2、IL-6、TND-α,IFN-γ和GM-CSF均无 相似文献
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采用人巨细胞病毒(HCMV)AD169株作为免疫原,制备出13株鼠-鼠杂交瘤细胞系。对其中的6株进行了检定.免疫印迹试验结果表明:单克隆抗体(McAb)7B4、7D7、7E11、8E8和8D6相对应的HCMV多肽分子量分别为46、150、38、5172和65kD.HCMV感染人胚肺二倍体细胞(2BS)后不同时间制成抗原片,与McAb作间接免疫荧光试验。结果表明:McAb8B8相应的病毒多肽为即刻早期抗原,其它5株McAb相应的病毒多肽均为晚期抗原,6株McAb等量混合后,标上辣根过氧化物酶,用于IgM抗体捕获法ELISA(MacELISA)中,并与间接ELISA(IELISA)同时检测HCMV-IgM.在未经选择的100份脐带血中,两法均为阳性的3份,两法均为阴性的94份;MacELISA阳性而IELISA阴性的2份血清的特异性试验证明,HCMV-IgM确为阳性.IELISA阳性而MacELISA阴性的1份血清的特异性试验证明,它是由RF引起的假阳性。 相似文献
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抗远缘链球菌OMZ176表面蛋白抗原(220kD)单克隆抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
采用远缘链球菌OMZ176(d血清型)全菌细胞作抗原,通过免疫BALB/c小鼠,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选及亚克隆,最终获得抗远缘链球菌OMZ176表面蛋白抗原(220kD)的单克隆抗体(Wc3A6)。结果表明:McAb的Ig及亚类鉴定为IgG2a,ELISA效价1:8000,Western B1-oting鉴定可见McAb与220kD蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌MT6R(C血清型)有弱的 相似文献
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制备抗人IL-3,IL-5和GM-CSF受体β链人工合成多肽DI,D2,D3和D4共39株McAb杂交瘤细胞系,并对其分泌McAb的类与亚类,效价性和上滑的阻断活性进行了初步分析,McAb上清阻断活性效果提示,至少部分McAb可与天然的受体β链发生免疫反应,并可能有阻断GM-CSF与β链结合作用,此外,还应用人工合成多肽片段,确定了23株抗D1McAb的大致识别表位,这些McAb杂交瘤细胞系的获得 相似文献
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试验两种大鼠抗小鼠胸腺基质细胞(MTSC)McAbsPf18-3、Rs21-C6的生物作用。Pf18-3McAb识别分子表达于胸腺细胞、脾脏T及B细胞;Rs21-C6只表达于MTSC。加Pf18-3或Rs21-C6于MTECI与胸腺细胞或脾细胞的体外培养中,在ConA存在及不存在下,均可抑制MTEC1诱导胸腺细胞及脾细胞的增殖作用。ConA活化下,其对胸腺细胞增殖的抑制率Pf18-3为96%;Rs21-C6为91%。对脾细胞的抑制率Pf18-3为75%;Rs21-C6为51%。Pf18-3对单纯ConA活化的胸腺细胞增殖也有显著的抑制作用,而Rs21-C6无此作用。包被于平皿的固相Pf18-3McAb,对胸腺细胞、脾细胞均有轻度但显著的促增殖作用。故Pf18-3McAb识别的抗原分子(及其配基)参与T细胞的活化过程。鉴于Pf18-3+细胞的分布有其特异性,分析此抗原分子的功能有重要的意义。 相似文献
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HIV感染的检测在预防AIDS传播方面有重要作用。本研究以重组抗原pG1免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了5株识别HIV核心抗原p24的杂交瘤细胞株D3,1H1,2G10,3H5和4H6。经鉴定这5株McAb与其它病毒抗原无交叉反应,分别识别3个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的McAb2G10和3H5建立了检测HIVp24抗原的夹心ELISA法,并初步检测了24份HIV抗体阳性血清。 相似文献
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肿瘤碱性蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清肿瘤碱性蛋白(Tumourbasicpro-tein,TBP)杂交瘤细胞株(1C3、4F4、5F4、3G9),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:均为IgG2a,腹水效价为1×10-6~1×10-8。特异性测定:TBPMcAb与IgG、IgA、IgM和Alb无交叉反应。单抗相加试验证实:5F4、4F4和1C3为识别TBP上同一抗原决定簇,3G9则为识别TBP上另一抗原决定簇。分别利用单株和混合株McAb标酶建立了可应用于人血清TBP含量测定的ELISA双抗体夹心法,并用于人血清TBP含量测定。 相似文献
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用HCV非结构区ns-5合成多肽抗原交联后免疫小鼠,成功地建立了3株抗ns-5单克隆抗体(McAb),经检测这3株McAb属于同一位点,与其它区域无明显交叉反应,具有高度特异性。McAb的研制为检测ns-5抗原奠定了一定基础。 相似文献
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以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒(HFRSV)结构蛋白(55000,67000)为特异性抗原,体外免疫正常人外周血淋巴细胞(PBL),然后将体外免疫的淋巴细胞与人-鼠种间杂交瘤细胞(K6H6/B5)融合,经ELISA间接法筛选出2株(2D5,1B7)分泌抗-HFRSV人单克隆抗体(H-McAb)杂交瘤细胞株,4次克隆化后,100%阳性。对2D5株初步鉴定表明,其抗体类型为IgG1;培养上清中抗体浓度为20~30μg/ml;特异性免疫荧光反应证明2D5株H-McAb是HFRSV特异性;中和效价为1∶160;体外连续传代6个月仍稳定分泌抗体。 相似文献
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抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
采用杂交瘤技术,获得了4株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。4株McAb均为IgG1κ链。ELISA交叉试验结果表明,该McAb不与人凝血酶、凝血酶原和HCV多肽反应。4株杂交瘤细胞培养上清液效价为3.2×10-2~1.28×10-3,腹水效价为1.6×10-6~5.12×10-7。 相似文献
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用白细胞介素-6(IL-6)依赖性人多发性骨髓瘤细胞株XG-1作为免疫原,我们成功地制备获得一株分泌抗人IL-6受体单克隆抗体的杂交瘤,命名为SI15。夹心ELISA和位点竞争试验表明,SI15和抗人IL-6受体单克隆抗抗M19识别IL-6受体上的同一位点,对IL-6受体的生物活性无影响。 相似文献
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采用远缘链球菌OMZ176(d血清型)全菌细胞作抗原,通过免疫BALB/c小鼠,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选及亚克隆,最终获得抗远缘链球菌OMZ176表面蛋白抗原(220kD)的单克隆抗体(WC3A6)。结果表明:McAb的Ig及亚类鉴定为JgG2a,ELISA效价1:8000,Westernbloting鉴定可见McAb与220kD蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌MT6R(C血清型)有弱的交叉反应(OD值=0.23)。 相似文献
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恶性淋巴瘤血清sIL—6R检测的临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解可溶性白细胞介素6受体(sIL-6R)在恶性淋巴瘤(ML)中的作用及意义,运用ELISA法检测30例ML患者及20例题正常对照者血清sIL-6R浓度。结果表明:Ⅳ期ML患者明显高于正常对照及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者;未缓解组(23例)明显高于缓解组(7例);P均〈0.01;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期及缓解组与正常对照组相差不显著(P〉0.05)。提示血清sIL-6R浓度与ML患者病情有关,可作为临床判断病情的良好 相似文献