前列腺特异抗原的酶联免疫分析

用本室纯化的人前列腺特异抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株体外稳定分泌抗人前列腺特异抗原的杂交瘤细胞株，分别命名为ＱＷ２、ＱＷ４、ＱＷ７和ＱＷ８。将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔制备腹水，用ＥＬＩＳＡ方法测得腹水抗体效价为１０６，其中ＱＷ８的抗体滴度最高。ＱＷ８腹水经５０％硫酸铵沉淀后包被酶标板，建成双抗体夹心ＥＬＩＳＡ，标准曲线线性良好，灵敏度为１．０μｇ／Ｌ血清稀释曲线，回收率及批内、批间变异系数测定表明，该方法的准确性和精密度均符合质量控制要求。检测８１名５０岁以下正常男性血清，ＰＳＡ均值为１．０５±０．７３μｇ／Ｌ，１０例临床确诊为前列腺癌患者的血清ＰＡＳ均值为３６．５±２．３μｇ／Ｌ明显高于正常值。     

化学发光免疫测定抗dsDNA抗体的实验条件分析和初步应用

采用正交设计确定了化学发光免疫测定抗ｄｓＤＮＡ抗体的最适实验条件，并与免疫荧光法（ｌＦ）、酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫测定法（Ｆａｒｒ）比较。结果表明，最适条件：ｄｓＤＮＡ包被浓度为１０μｇ／ｍｌ、ＡＢＥＩ－ＳａＨＩｇＧ结合物使用发光强度为１．０×１０￣４ｍｖ坎德拉，氯化高铁血红素（Ｈｅｍｉｎ）浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，Ｈ＿２Ｏ＿２浓度为０．３％，５６份ＳＬＥ患者血清中，化学发光免疫测定法（ＣＬＩＡ）检测抗ｄｓＤＮＡ抗体阳性率为８３．９％，高于ＩＦ和ＥＬＩＳＡ法，接近Ｆａｒｒ法水平。阻断试验证明，本方法检测抗ｄｓＤＮＡ抗体具较高特异性。     

检测人血清IgD的酶联免疫吸附试验

本文采用亲和层析法，从ＩｇＤ型骨髓瘤病人血清中分离得到高纯度的ＩｇＤ，以此为抗原免疫动物得到ＩｇＤ抗血清，经再次纯化后用于ＥＬＩＳＡ方法中的包被抗体及酶标记抗体。本文还介绍了用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法测定人血清ＩｇＤ含量，该法灵敏度为０．０１～０．０５μｇ／ｍｌ，精确度试验结果：批内平均变异系数为５．５％，批间平均变异系数为８．５％。１００例正常人血清ＩｇＤ定量检测，其均值为７３．６３μｇ／ｍｌ，与文献报道７５．５６μｇ／ｍｌ值相吻合。木文建立了特异、敏感、快速、简便的血清内ＩｇＤ定量检测的ＥＬＩＳＡ方法，适合于临床应用。     

用ELISA微板法检测乙型肝炎病毒核心抗原

以双抗体包被的抗体夹心法，用微板ＥＬＩＳＡ检测血清乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢＣＡｇ），确定双包被工作浓度ＭＣ－抗－ＨＢｃ（效价１０００）为０．０４μｌ／孔，ＭＣ－抗－ＨＢｓ（１ｍｇ／ｍｌ）为３～４μｌ／孔；最佳裂解剂及其工作浓度为７％ＮＰ－４０巯基乙醇溶液。分别用不同的酶标记抗体检测，均证明双包被具有特异性。加入抗－ＨＢｃ进行阻断试验，其阻断率为７９．３％。对８４４例ＨＢｓＡｇ阴性的血清及１１４例ＨＢＶ－ＤＮＡ探针阴性血清用本法进行ＨＢｃＡｇ检测，均为阴性。在临床应用上，本法的阳性率明显高于试管法的，与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的阳性符合率为９１．４％，并且特异性与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的一致。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

rr－烯醇化酶单克隆抗体双位点夹心ELISA的建立和临床应用

在自制的８株烯醇化酶（ＮＳＥ）ＭｃＡｂ中，经方阵排列滴定筛选出无交叉反应且效价较高的２株ＭｃＡｂ，用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）为标记物，建立了ＮＳＥ－ＭｃＡｂ双位点夹心ＥＬＩＳＡ。经直线回归方程、取代试验、阻断试验检验，该标准曲线近似直线关系，可测定标本中ＮＳＥ的范围为５～５０μｇ／Ｌ。对２３例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）（Ⅰ和Ⅱ期４例、Ⅲ期７例、Ⅳ期１２例）．３２例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ），２２例肺良性疾病（ＢＰＤ）和３６例健康体检者血清ＮＳＥ进行了测定，ＳＣＬＣ的阳性率为８２．６％（１９／２３），其中Ⅰ和Ⅱ期为５０％（２／４）；Ⅲ期为８５．７％（６／７），Ⅳ期为９１．７％（１１／１２）；ＮＳＣＬＣ的阳性率为３．１％（１／３２），ＢＰＤ阳性率为４．５％（１／２２）。ＳＣＬＣ的显著高于ＮＳＣＬＣ和ＢＰＤ（Ｐ＜０．０１）；ＳＣＬＣ的Ⅳ和Ⅲ期显著高于Ⅰ和Ⅱ期（Ｐ＜０．０１）。２３例ＳＣＬＣ经综合治疗后，完全缓解组和部份缓解组血清ＮＳＥ水平非常显著低于进展组和无改变组（Ｐ＜０．０１）。本文研究结果证明，ＮＳＥＭｃＡｂ双位点夹心ＥＬＩＳＡ具有灵敏、特异和简便快速的特点，对ＳＣＬＣ的血清学诊断有较高的灵敏度和特异性，对ＳＣ     

IgM类抗HCV独特型抗体（抗HCV—Ab2）的ELISA法检测及意义

用抗人μ链单克隆抗体建立的ＥＬＩＳＡ法检测１５２例肝病患者ＩｇＭ类抗ＨＣＶ独特型抗体，甲肝阳性率０％（０／１５），乙肝８．５％（４／４７），丙肝３２．１％（２６／８１），丙肝合并乙肝者２２．２％（２／９）。丙肝组内频率为急肝０％（０／１７），慢性迁延性肝炎３８．１％（８／２１），慢性活动性肝炎４３．８％（１４／３２），肝炎肝硬化３６．４％（４／１１）。本法重复性好，批内变异系数４．６％，批间变异系数８．５％。用纯化人抗ＨＣＶ抗体进行阻断，阻断率＞８５％，丙肝组与乙肝组有显著性差异（Ｐ＜０．０１），与各种自身免疫性疾病无交叉，有较好的特异性和精密度，且与血清中ＩｇＭ抗ＨＣＶ关系密切，提示丙型肝炎ＩｇＭ类抗ＨＣＶ－Ａｂ２具有模拟抗原的作用，是慢性丙型肝炎的重要检测指标并与丙肝慢性化有关。     

肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。     

两种人化SCID小鼠的建立及其免疫应答性

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳｅｖｅｒｅＣｏｍｂｉｎｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔＤｉｓｅａｓｅ，ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，建立人化ＳＣＩＤ小鼠（即ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ，ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ）。两个月后，两种人化小鼠体内淋巴器官都可以检测到人Ｔ、Ｂ淋巴细胞分布；小鼠血清人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体水平（ＩｇＧ／ＶＣＡ）比较显示，用Ｂ９５８死细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。１４只ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ小鼠血清内人ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度在１∶１０８和９６．２±５６．４μｇ／Ｌ；在另８只ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ中为１∶７．９和１３．８４±６．０μｇ／Ｌ。实验提示，ＳＣＩＤ－ｈＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ｈＰＢＬ小鼠更适合于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

单克隆抗体ELISA法快速诊断疱疹性脑炎

本文用单纯疱疹病毒单克隆抗体（ＨＳＶ－ＭｃＡｂ）ＥＬＩＳ法检测了１２８例病毒性脑炎患儿脑脊液中ＨＳＶ特异性抗原（ＨＳＶ－Ａｇ），２０例苊他神经系统疾患也作了测定，３２例脑炎患儿同时取脑脊液和血清作ＨＳＶ－ＩｇＧ抗体水平测定比较，病毒性脑炎忠儿的ＨＳＶ－Ａｇ阳性检出率为１９．５％，与血清／脑脊液的ＨＳＶ－ＩｇＧ测定比较，敏感性８４．６％，特异性９４．７％。用ＥＬＩＳ法检测脑脊液中ＨＳＶ－Ａｇ是一种简     

胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原(CEA)抗体的检测及意义

目的：探讨循环中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）特异性抗体的情况，评价ＣＥＡ及抗体的联合检测在胃肠道癌诊断中的作用。方法：用放免法检测血清中 ＣＥＡ含量，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体，用竞争抑制法检测抗体的特异性。结果：胃肠道癌患者血清 ＣＥＡ含量升高者（≥１５ ｎｇ／ｍｌ）为 ３０．９％（２１／６８），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为３５．３％（２４／６８），ＣＦＡ及抗 ＣＥＡ抗体的联合检测可使阳性率提高到５４．３％（３７／６８）；胃肠道良性疾病患者（多发性息肉、溃疡、胰腺炎等）血清ＣＥＡ升高者为３．３％（１／３０），抗 ＣＥＡ　ＩｇＧ抗体阳性者为 ３．３％（１／３０）；健康对照组血清 ＣＥＡ升高者为 ０，抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ２．５％（１／４０）。结论：胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）抗体的检出率较高，这些抗体可作为胃肠道癌的一种肿瘤标志物。     

单克隆抗体ELISA法快速诊断疱疹性脑炎

本文用单纯疱疹病毒单克隆抗体（ＨＳＶ－ＭｃＡｂ）ＥＬＩＳＡ法检测了１２８例病毒性脑炎患儿脑脊液中ＨＳＶ特异性抗原（ＨＳＶ—Ａｇ），２０例其他神经系统疾患也作了测定，３２例脑炎患儿同时取脑脊液和血清作ＨＳＶ—ＩｇＧ抗体水平测定比较，病毒性脑炎患儿的ＨＳＶ－Ａｇ阳性检出率为１９．５％，与血清／脑脊液的ＨＳＶ－ＩｇＧ测定比较，敏感性８４．６％，特异性９４．７％。用ＥＬＩＳＡ法检测脑脊液中ＨＳＶ－Ａｇ是一种简便、快速、敏感、特异的方法，对疱疹性脑炎具有早期诊断价值。     

血清抗人染色体抗体的初步研究

以人染色体为抗原，用免疫金银染色（ＩＧＳＳ）与免疫荧光试验（ＩＦＴ）相对照，自ＳＬＥ患者血清中检出抗人全染色体抗体（Ａｈ ＣｈｒＡ）。其对ＳＬＥ的敏感性和特异性，ＩＧＳＳ法分别为５８．１％和９８．５％，ＩＦＴ法分别为３４．９％和９９．５％；其阳性率及滴度与ＳＬＥ活动及肾损、免疫功能异常等密切相关。对与该抗体起反应的抗原成份亦进行了初步分析。     

sCD23在SLE患者血清中的检测

目的了解ｓＣＤ２３及ＣＤ２３在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）发病中的变化及意义。方法采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、ＳＰ及ＡＰＡＡＰ免疫组化法检测ＳＬＥ患者血清ｓＣＤ２３水平、皮损及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＣＤ２３表达,对ｓＣＤ２３及ＣＤ２３同ＡＮＡ、抗ｄｓＤＮＡ抗体关系进行了比较。结果①病人组血清ｓＣＤ２３水平〔（４．１０±３．１６）ｎｇ／ｍｌ〕与正常对照组〔（１．４８±０．４１）ｎｇ／ｍｌ〕比较显著增高（Ｐ＜０．００５）,活动期水平明显高于静止期;②血清ｓＣＤ２３与ＡＮＡ滴度、抗ｄｓＤＮＡ抗体等具有明显的平行关系;③皮损表皮少数（３／９）弱表达ＣＤ２３,ＰＢＭＣ则明显表达ＣＤ２３。结论ＣＤ２３及ｓＣＤ２３在ＳＬＥ发病中有一定的意义,其主要作用可能与抗原处理和递呈以及促进Ｂ淋巴细胞分化、增殖产生自身抗体有关,而且ｓＣＤ２３是监测ＳＬＥ疾病活动程度一个很好的指标     

白细胞介素6单克隆抗体的研制

采用纯化的工程菌表达产物白细胞介素６免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）在ＰＥＧ作用下进行融合,通过ＥＬＩＳＡ筛选并多次亚克隆,获得了１株能分泌抗ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤细胞Ｉｃ－１．３．４．５。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示：抗体结合抗原的分子量与ＩＬ－６相符,为特异性抗ＩＬ－６抗体。亚类鉴定表明：该细胞分泌的单克隆抗体为ＩｇＧ１亚类,ｋａｐｐａ型。染色体数目为１００条左     

血清标本中HBsAg免疫复合物对检测HBsAg的影响

０．５ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ处理１ｈ后解离ＨＢｓＡｇ－抗ＨＢｓ免疫复合物，并变性抗ＨＢｓＡｇ抗体而对ＨＢｓＡｇ免疫反应性无影响，３４例临床抗ＨＢｓ＾＋血清样品经ＨＣｌ处理前后，常规ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ比较，结果；酸处理前ＨＢｓＡｇ阳性率为１１．７６％，处理后增加至４１．１８％，实验表明血清样品经酸处理后能明显提高临床乙肝ＨＢｓＡｇ检出率。     

急性白血病患者血清白细胞介素6和可溶性白介素6受体含量测定

采用生物学方法和ＥＬＩＳＡ，分别检测了２０例急性白血病患者和２０名正常人血清中ＩＬ－６和ｓＩＬ－６Ｒ８０ｋＤ水平。正常人血清ＩＬ－６水平低于５ｋＵ／Ｌ，ｓＩＬ－６Ｒ８０ｋＤ平均为５．００±４．６４μｇ／Ｌ。急性白血病患者血清ＩＬ－６、ｓＩＬ－６Ｒ８０ｋＤ水平明显增加（Ｐ＜０．０１），提示ＩＬ－６和ｓＩＬ－６Ｒ８０ｋＤ协同作用可能参与急性白血病的发病机制。     

测定人血清纤维连接蛋白含量的双抗体夹心ELISA法的建立

４株经细胞融合获得的针对纤维连接蛋白（Ｆｎ）的单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ抗体相加试验和抗体竞争试验证实，为作用于Ｆｎ不同位点的单克隆抗体。选择其中２株单克隆抗体，应用于测定人血清Ｆｎ含量的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法．其批内差异为４．５％，批间差异为５．９％．建立的标准曲线相关系数为０．９８２，测定１３２例献血员血清Ｆｎ合量为０．２５５±０．０２８ｍｇ／ｍｌ，与文献报道相符．     

前列腺特异抗原和酸性磷酸酶测定用于鉴别前列腺癌和前列腺肥大

本文报告了１８０名正常人，１１８例前列腺癌和９５３例前列腺肥大病人的ＰＳＡ和ＰＡＰ测定结果。正常人、前列腺肥大和前列腺癌病人血清ＰＳＡ水平的中位数依次为１．３、３．０和１５２μｇ／ｌ、血清ＰＡＰ的中位数为０．６、１．２和１３．５μｇ／ｌ。如分别以４．２μｇ／ｌ和２．８μｇ／ｌ为正常上限，则前列腺肥大的阳性检出率为３８．９％和１８．７％。推荐血清ＰＳＡ以２０μｇ／ｌ、ＰＡＰ以１０μｇ／ｌ为鉴别前列腺癌和前列腺肥大的有效水平，此时ＰＣａ的阳性检出率分别为９７．２％和５９．２％，但ＢＰＨ的交叉率下降到５．４％和３．１％。     

0：3型耶尔森氏菌致免疫兔甲状腺变化的实验研究

用０３型小肠结肠炎耶尔森氏菌（ＹｅｒｓｉｎｉａＥｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）抗原免疫４只新西兰纯种兔，４～１０周后兔眼球突出，体重下降，血清ＴＴ３、ＴＴ４浓度升高。２／４只兔免疫前ＴＴ３为１．４７±０．１ｎｍｏｌ／Ｌ（ｘ±ｓ），免疫后达６．５±０．２４ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．００１）；免疫前ＴＴ４为３７．９８±６．３７ｎｍｏｌ／Ｌ，免疫后达８６．４３±１２．７７ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．００１）。病理变化主要为：甲状腺滤泡缩小，胶质减少，滤泡上皮增生肥大。电子显微镜下见甲状腺上皮细胞粗面内质网扩张，分泌颗粒增多等高分泌功能状态，间质内可见浆细胞浸润。酶免疫组织化学显示０３型耶尔森氏菌抗血清与甲状腺组织有特异的结合反应。