敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3-L1中FOXP1的表达增加

目的 在小鼠前脂肪细胞系3T3-L1分化过程中敲低双链RNA结合蛋白Staufen1(Stau1)后筛选差异表达的基因,分析其生物学功能,并用qPCR验证测序结果。方法 用RNA-seq分析Stau1敲低后基因的转录调控。构建STAU1 shRNA并转染3T3-L1细胞,鸡尾酒方法诱导其分化为成熟脂肪细胞,收取0、4 d的细胞设立对照组和STAU1敲低组(各3组生物重复样本)收取12组样品的细胞基因芯片信息,以变化倍数log2(Fold change)>1且校正后的P<0.05作为条件筛选Stau1敲低的细胞与对照组样本间的差异表达基因,进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(KEGG通路数据库),qPCR验证差异表达的基因。荧光素酶报告基因实验验证SATU1与叉头盒蛋白P1 FOXP1 mRNA 3′UTR上Staufen1结合位点(SBS)存在结合。结果 较对照组STAU1敲低细胞组中共筛选出差异表达基因588个,其中上调406个、下调182个。差异表达基因主要参与的生物学过程中脂代谢、炎性反应因子,主要富集的信号通路有糖代谢和能量代谢相关通路。敲低Stau1后FOXP1...     

膀胱癌中Caveolin-1的表达及意义

目的探讨Caveolin-1在膀胱癌中的表达状况及意义。方法采用免疫组化和统计学方法,分析39例膀胱癌组织中Caveolin-1的表达情况及其与各临床病理参数间的相关性。结果膀胱癌组织中Caveolin-1阳性率为28.2%(11/39),与正常对照组存在差异显著性(P0.05),阳性信号主要定位于胞质,少数病例显示核中定位,Caveolin-1在膀胱癌中表达阳性率与肿瘤的分级(1级0%、2级23.5%、3级53.9%)、分期(pTa-pT16.3%、pT2-pT443.5%)、生长方式(表浅型4.2%、侵袭型66.7%)密切相关,与年龄、性别无关。结论 Caveolin-1表达可作为判断膀胱癌生物学行为和预后的指标,Caveolin-1的异常表达、异常定位及可能的氨基酸突变,在膀胱癌发展过程中起着重要作用。     

前列腺癌组织中Apaf-1和Caspase-9表达及临床意义

目的检测凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和细胞凋亡蛋白酶-9(Caspase-9)在前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)中的表达,探讨Apaf-1、Caspase-9表达与PCa临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例PCa和60例BPH组织中Apaf-1和Caspase-9蛋白的表达。结果 PCa组中Apaf-1和Caspase-9的阳性率明显低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);Apaf-1和Caspase-9的表达与患者年龄及远处转移无关,与病理分级及临床分期相关(P<0.05)。结论 Apaf-1和Caspase-9在PCa组织中低表达,二者呈正相关(rs=0.645,P<0.01),Apaf-1和Caspase-9可能与PCa的发生、发展密切相关。     

膀胱癌组织中DMBT1基因的表达及临床意义

目的探讨膀胱癌中脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBT1)的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法采用RT-PCR和免疫组化SP法检测70例膀胱癌组织和12例正常膀胱组织中DMBT1 mRNA及蛋白的表达。结果膀胱癌组织中DMBT1 mR-NA和蛋白的表达水平低于正常膀胱组织(P<0.05),随着病理分级和临床分期的升高,DMBT1 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P<0.05)。DMBT1在有淋巴结转移的癌组织中表达明显低于在无淋巴结转移癌组织中的表达(P<0.05)。结论 DMBT1基因在膀胱癌组织中存在表达缺失和低表达,提示DMBT1基因在膀胱癌的发生、发展中可能具有抑癌基因的作用。     

前列腺癌中HIF-1α和MMP-9表达及其临床意义的探讨

目的:探讨前列腺癌(PCa)组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测了20例良性前列腺肥大(BPH),10例前列腺上皮内肿瘤(PIN)和56例PCa组织中HIF-1α和MMP-9的表达情况。结果:Pca组织中HIF-1α和MMP-9的表达均明显高于BHP和PIN(P0.01),而后两者中HIF-1α、MMP-9的表达比较均无显著性差异(P0.05)。Pca组织中HIF-1α和MMP-9的表达均与Gleason分级、临床分期、癌穿透被膜、骨转移及淋巴结转移有关(P0.05),而与年龄及病变部位无关(P0.05)。Pca组织中HIF-1α和MMP-9蛋白阳性表达呈正相关(rs=0.729,P0.05)。结论:HIF-1α、MMP-9蛋白与前例腺癌的生长、侵袭、转移密切相关,HIF-1α可能通过上调MMP-9的表达来提高肿瘤细胞的侵袭力。     

BRG1和BRM蛋白在前列腺癌中的表达

目的 探讨SWI/SNF催化亚基BRG1/BRM蛋白在前列腺癌及癌旁组织中的表达以及与前列腺发生发展之间的关系.方法 采用半定量免疫组织化学法配对评价前列腺癌及癌旁组织中BRG1和BRM蛋白的表达水平,分析BRG1和BRM表达与临床病理参数之间的关系.结果 在同一病例中,癌组织BRG1平均免疫反应得分为(57.0±9.8)分,远比前列腺癌旁组织的(19.0±4.1)分高,P=0.000 17,而且这种表达的差异在高级别的肿瘤中更显著;BRM呈现异质性表达,癌组织的平均免疫反应得分为(112±17)分,低于癌旁组织的(151±19)分,P=0.0047;同一病例的癌旁组织和癌组织中BRG1和BRM表达相反;大肿瘤组中癌组织BRG1的平均免疫反应得分与相应癌旁组织的比值明显高于小肿瘤组(P=0.0112).结论 SWL/SNF复合物蛋白BRG1和BRM的异常表达与前列腺癌的发生发展有关,BRG1的表达增强可能促进前列腺癌的生长.     

前列腺癌细胞系中TMSG-1的表达及其意义

目的 探讨一种新的肿瘤转移抑制基因TMSG-1(tumor metastasis suppressor gene 1,TMSG-1)在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其意义.方法 采用半定量RT-PCR、Western blotting、细胞爬片免疫组化PV-9000法来检测TMSG-1在人不同转移潜能前列腺癌细胞系PC-3M-2B4(低转移潜能)和PC-3M-IE8(高转移潜能)中的表达情况.结果 TMSG-1在PC-3M-2B4(低转移潜能)细胞系中的mRNA及蛋白表达量均明显高于在PC-3M-IE8(高转移潜能)细胞系中的表达,具有统计学意义(P<0.05).结论 TMSG-1在低转移潜能前列腺癌细胞系中的表达明显高于在高转移潜能前列腺癌细胞系中的表达,证明它是一种肿瘤转移抑制基因,有可能成为判断前列腺癌细胞浸润及转移的重要预后指标.     

前列腺癌组织中Plexin-B1的表达及其与AR表达的相关性

目的 探讨前列腺癌组织中Plexin-B1的表达与临床病理学特征、预后的关系,及其与AR表达的相关性。方法 采用免疫组化EnVision法检测82例前列腺癌及46例良性前列腺组织中Plexin-B1和AR的表达,应用qRT-PCR检测20对前列腺癌和良性前列腺组织中Plexin-B1 mRNA的表达。结果 前列腺癌组织中Plexin-B1阳性率(74.39%)明显高于良性前列腺组织(10.87%,P0.01)。Plexin-B1表达与前列腺癌临床分期、WHO/ISUP分组以及患者总生存期相关(P 0.01,P0.05)。qRT-PCR检测显示Plexin-B1 mRNA在前列腺癌组织中高表达(267.15±57.06)%(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Plexin-B1高表达组累积生存率(55.74%)低于低表达组(85.71%),差异有统计学意义(P 0.05)。Spearman等级相关性分析显示,前列腺癌中Plexin-B1表达与AR表达呈正相关(r=0.275,P=0.012)。结论 Plexin-B1在前列腺癌组织中过表达,与前列腺癌组织临床分期、WHO/ISUP分组密切相关,有望成为判断前列腺癌预后的分子标志物。     

前列腺癌的神经内分泌分化

一、良性前列腺中的神经内分泌细胞 正常前列腺主要由分泌细胞和基底细胞组成,可在HE染色下由普通显微镜分辨。另外还有散在微量的神经内分泌细胞（neuroendocfine cell,NE细胞）,该细胞仅能由电镜分辨,或者通过免疫组织化学方法用特异性标记物如嗜铬粒素A（CgA）、突触素（Syn）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）等识别。前列腺的NE细胞具有上皮性、神经性和内分泌性特征,散在分布于前列腺,但在移行区和外周区比在中心区更多见。NE细胞的这种分布,可能与前列腺增生和前列腺癌有关。     

MTSS1基因在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究MTSS1基因在膀胱癌中组织的表达及其对膀胱癌EJ138细胞增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测41例膀胱癌及相应癌旁正常组织中MTSS1基因的表达。将MTSS1基因特异性的siRNA转染EJ138细胞。转染后,Western Blot检测转染后MTSS1蛋白的表达,MTT法测定细胞生长抑制率,流式细胞法检测细胞凋亡率。结果与癌旁正常组织相比,MTSS1 mRNA在膀胱癌组织中表达明显下调。RNA干扰能够显著抑制EJ138细胞中MTSS1蛋白的表达;MTSS1基因表达降低后,EJ138细胞的生长抑制率明显降低,细胞增殖活力明显增加,而且凋亡率明显降低。结论 MTSS1基因在膀胱癌低表达,促进膀胱癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。     

Caveolin-1在膀胱癌的表达及其与膀胱癌生物学性状关系

目的探讨caveolin1在膀胱癌中的表达及其与膀胱移行细胞癌(以下简称为膀胱癌)生物学性状的关系。方法采用SABC免疫组织化学法分析63例膀胱癌组织及15例正常膀胱粘膜中caveolin1表达,结合临床病理资料采用χ2检验进行统计学分析。结果正常膀胱粘膜中caveolin1无表达,膀胱癌组织中caveolin1阳性表达率为34.92%。其中G1、G2、G3期膀胱癌阳性率分别为0%、2.86%、54.28%,病理分级间比较有显著性差异(P<0.01);临床分期Ta～T4阳性率分别为0%、25%、52.94%、40%、50%,各期间比较有显著性差异(P<0.01)。结论caveolin1在膀胱癌的高表达与其病理分级及临床分期有密切的关系,对膀胱癌生物学性状评估有重要意义。     

PKCα和PLK1在膀胱癌中的表达与相关性

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)与Polo样激酶1(PLK1)在膀胱癌细胞中的表达及其相关性。方法利用PKCα的siRNA转染膀胱肿瘤J82细胞系后,基因芯片筛选出下游靶点PLK1,RT-PCR及Western-blot方法对其表达水平进行验证,分析两者的相关性。结果在膀胱癌细胞中利用siRNA抑制PKCα的表达会导致膀胱癌细胞中PLK1的表达量的下降(P0.05)。同时在膀胱肿瘤标本中二者呈正相关(P0.01)。结论 PKCα和PLK1是膀胱癌治疗的可能新靶点。     

Smad4和TGF-β1在膀胱癌的表达及意义

目的观察Smad4和转化生长因子(TGF)-β1在膀胱癌组织内的表达情况,分析Smad4和TGF-β1的表达与膀胱癌进展及预后之间的关系。方法选取临床资料完整的膀胱癌病例48例,其中,淋巴结转移组20例,无淋巴结转移组28例。免疫组化法检测膀胱癌组织内Smad4和TGF-β1的表达。取膀胱癌术后组织16例,Western blot法检测Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达情况。结果 Smad4表达于肿瘤细胞浆和胞核,在有淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量明显低于其在无淋巴结转移组的表达量,Smad4表达与膀胱癌临床分期、分级、淋巴结转移以及膀胱癌复发密切相关(0.05)。TGF-β1表达于肿瘤细胞的胞浆内,在有淋巴结转移膀胱癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量,TGF-β1的表达与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移之间具有相关性(0.05)。Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达呈显著负相关(r=-0.324,=0.025)。Kaplan-Meier分析表明Smad4阳性患者的五年总体生存率高于Smad4表达阴性患者的生存率,而TGF-β1的表达与膀胱癌患者的预后无关。结论 Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织的表达呈负相关,与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移相关。     

WIF-1在鼻咽未分化癌中表达的研究

目的 分析WIF-1在鼻咽慢性炎性组织、鼻咽癌中表达的特点,探寻其在鼻咽未分化癌中表达与相关临床资料的关系,以及在鼻咽癌发病机制中的作用.方法 应用免疫组化技术SP法检测65例鼻咽未分化癌鼻咽癌标本、20例鼻咽部慢性炎症中WIF-1的蛋白水平.结果 ① WIF-1在正常鼻咽上皮细胞中存在表达,在鼻咽假复层纤毛柱状上皮的纤毛柱状上皮细胞中呈强阳性表达.其表达呈周期性.② 鼻咽癌标本表达的平均百分数为(31.0±8.0)%,与非癌上皮组织中WIF-1在柱状细胞中全部呈强阳性相比,有显著差异.WIF-1在部分淋巴细胞中表达阳性.在鼻咽癌和淋巴细胞中表达两者无相关性.③ WIF-1在鼻咽未分化癌细胞中的表达与患者的年龄、性别、原发灶大小(T分期)、淋巴转移、远处转移均无关系.结论 WIF-1在正常鼻咽上皮细胞中呈阳性表达;WIF-1在鼻咽未分化癌细胞中出现表达缺少和(或)下调;WIF-1表达缺少和(或)下调的出现可能是鼻咽未分化癌发生的早期事件,WIF-1表达异常可能在鼻咽未分化癌的发病机制中发挥一定作用.     

子痫前期重度患者胎盘中ROR γ tmRNA和FOXP3 mRNA的表达

目的通过研究Th17细胞和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FOXP3在正常妊娠和子痫前期重度患者胎盘组织中的表达,探讨二者在子痫前期发病机制中的作用。方法以子痫前期重度患者35例作为实验组,同期选35例正常妊娠患者作为对照组,用SYBR6reenⅠ荧光定量PCR方法,检测胎盘组织中RORγt-mRNA和FOXF3-mRNA的表达水平。结果和对照组相比,子痫前期重度胎盘组织中RORγt-mRNA升高,FOXP3-mRNA的表达降低,RORγt-mRNA／FOXP3-mRNA比值增大（P〈0．05）;子痫前期重度胎盘组织中RORγt-mRNA与FOXP3-mRNA存在明显的负相关（r=-0．547,P〈0．01）。结论促炎性Th17细胞与抑制性Treg细胞之间平衡状态的打破可能是导致子痫前期发病的病因之一。     

RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定

目的建立有活性的蛋白激酶C受体1(RACK1)过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系(HUVEC),为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP获得过表达载体p IRES2-EGFP-RACK1;同时,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,亚克隆至p Genesil-1得到相应的干扰载体;脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,qRT-PCR及Western blot鉴定RACK1 mRNA和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。     

eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响

目的探究eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响。方法重组质粒载体eIF4H-shRNA-1或eIF4H-shRNA-2与pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2共同转染HEK293T细胞,获得可使eIF4H低表达的慢病毒。慢病毒侵染MEL细胞,获得eIF4H低表达的MEL细胞稳定株,Western blot检测干扰效果。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;联苯胺染色观察红系分化情况。结果与对照组相比较,eIF4H-shRNA-2组细胞eIF4H表达明显下调,细胞增殖能力明显减弱(P0.01),G1期细胞比例明显增加;经丁酸钠处理后eIF4H-shRNA-2组联苯胺阳性细胞明显增加(P0.01)。结论成功构建eIF4H低表达MEL稳定株;eIF4H低表达抑制MEL细胞增殖能力;eIF4H低表达不能诱导MEL细胞红系分化,但可促进丁酸钠诱导MEL细胞红系分化。     

PIM-1蛋白激酶在前列腺癌组织中的表达

目的观察原癌基因PIM1表达产物PIM1蛋白激酶在前列腺癌组织、良性前列腺增生组织及正常前列腺组织中的表达。方法应用免疫组织化学方法测定37例前列腺癌组织、26例良性前列腺增生组织及12例正常前列腺组织中PIM1蛋白激酶的表达。结果PIM1蛋白激酶在前列腺癌组织、良性前列腺增生组织及正常前列腺组织中的阳性表达例数分别是29例(78.38%),11例(42.31%)和3例(25.00%)。前列腺癌组PIM1的表达显著高于良性前列腺增生组及正常前列腺组(P<0.001)。结论原癌基因PIM1及其产物PIM1蛋白激酶有可能在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

前列腺癌中Bad蛋白的表达及其意义

目的探讨Bad蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法选择前列腺癌和癌旁良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia, BPH)各48例及21例前列腺上皮内瘤(prostate intraepithelial neoplasms, PIN),采用免疫组化SP法观察Bad蛋白在前列腺上皮及间质细胞中的表达,采用化学发光法检测血清PSA值,分析Bad蛋白与前列腺癌、PSA值的相关性。结果 Bad蛋白在前列腺癌和PIN中的阳性率分别为83.3%、66.7%,高于癌旁BPH的33.3%,差异有统计学意义(P均0.01);Bad蛋白在前列腺癌和BPH间质细胞中的阳性率分别为52.1%和25.0%,差异有统计学意义(P0.05);Bad蛋白在Gleason评分≤7和7的前列腺癌中阳性率分别为66.7%和92.6%,差异有统计学意义(P0.05);血清PSA值与Bad蛋白表达无相关性(P均0.05)。结论前列腺癌组织中Bad蛋白高表达,并与Gleason评分有关,提示Bad蛋白在前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。