髓系细胞触发受体1慢病毒载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达的影响

目的 了解髓系细胞触发受体1(TREM-1)基因重组慢病毒短发夹RNA(vshRNA)载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达及小鼠存活率的影响.方法 (1)构建TREM-1 vshRNA载体.经实验确定脓毒症小鼠模型制作条件:腹腔注射2.5×10<9CFU/mL灭活脆弱拟杆菌0.5 mL,刺激12 h.(2)115只小鼠按随机数字表法分为健康对照组(3只)和脓毒症模型组、绿色荧光蛋白(GFP)干扰组、TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组.后4组每组28只,先分别经尾静脉注射等渗盐水、GFP vshRNA、TREM-1 vshRNA 2×108TU、TREM-1 vshRNA 1×108TU;1 h后,将该4组小鼠制成脓毒症模型,健康对照组注射等体积等渗盐水.12 h后处死5组小鼠(每组3只),取血检测血浆TNF-α、IL-1β和IL-6含量;取肝组织标本检测TREM-1 mRNA及其蛋白的表达水平.后4组小鼠每组所余25只用于观察腹腔注射后72 h的存活率.(3)另建立脓毒症小鼠模型125只,其中100只分别于腹腔注射后1、2、4、6 h尾静脉注射TREM-1 vshRNA 2×108TU(每时相点25只),余下25只尾静脉注射等渗盐水为对照组.计算尾静脉注射后72 h小鼠存活率.结果 (1)与脓毒症模型组比较.TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6含量均下降(P<0.05),以TREM-1干扰组下降最明显.GFP干扰组中各促炎因子含量与脓毒症模型组接近(P>0.05).(2)与GFP干扰组比较,TREM-1干扰组及其半量干扰组小鼠肝组织TREM-1 mRNA表达均明显下调(P<0.01),以TREM-1干扰组尤为明显(P<0.05).各组小鼠TREM-1蛋白表达情况与此一致.(3)脓毒症模型组、GFP干扰组小鼠腹腔注射后72 h存活率均为16%.TREM-1干扰组及其半量干扰组分别为76%和44%(P<0.05或P<0.01).(4)另建立的125只脓毒症小鼠模型中,对照组及腹腔注射后1、2、4、6 h组其尾静脉注射后72 h存活率分别为16%、72%、56%、40%、16%,其中1、2、4 h组明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 运用TREM-1 vshRNA干扰技术,可有效降低脆弱拟杆菌脓毒症小鼠肝组织TREM-1表达水平,抑制炎性反应,提高小鼠存活率.     

髓系细胞触发受体-1在新生儿肺损伤中作用机制的研究进展

背景 髓系细胞触发受体(triggering receptor expressed on myeloid cells,TREM)-1主要在中性粒细胞和单核巨噬细胞中表达,能诱导中性粒细胞和单核细胞分泌TNF-α、IL-1β等促炎因子,在炎症的级联放大反应中发挥重要作用.目的 了解TREM在新生儿肺损伤中作用机制的研究进展.内容 综述TREM来源及在炎症反应中的作用、TREM-1的功能、可溶性TREM-1在新生儿疾病(如早产儿感染性疾病、呼吸机相关性肺炎、新生儿感染性肺损伤等)中作用的研究进展.趋向 TREM-1在新生儿肺损伤中起到关键作用,为临床研究提供理论依据.     

单核巨噬细胞中的髓样细胞触发性受体-1在脓毒血症中的作用

髓样细胞触发受体(TREM)是新近发现的免疫球蛋白超家族成员,目前至少有5个成员被发现。其中单核巨噬细胞中的TREM-1已证明在脓毒血症中起重要作用,它选择性的表达于血液中性粒细胞和单核细胞。TREM-1可被脂多糖(LPS)上调,促进炎症因子如白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等的分泌,触发和放大单核细胞中的炎症反应。靠DAP12的帮助,TREM-1能激活下游信号活动,而TREM-1的溶解形式sTREM-1目前也被认为是代表感染后炎症反应的一个负反馈调节器。通过对TREM-1的作用及转导途径的研究,可对脓毒血症的防治和诊断带来积极影响。     

髓系细胞触发受体-1（TREM-1）与脓毒症

髓系细胞触发受体-1（TREM-1）是主要表达于中性粒细胞、成熟的单核细胞、巨噬细胞,树突状细胞表面的免疫球蛋白超家族成员,在炎症反应的触发及放大过程及天然免疫中具有重要作用。我们主要对TREM-1的表达,信号通路及在脓毒症中的作用做了一综述。     

髓系细胞触发受体-1 mRNA在急性胰腺炎中的表达

为探索髓系细胞触发受体 -1(TREM 1)mRNA在轻、重型的急性胰腺炎患者及正常人白细胞中表达的差异程度 ,笔者采用逆转录聚合酶链法检测 10例轻型胰腺炎患者及 8例重型胰腺炎患者和 10例正常人白细胞TREM 1mRNA的表达。结果示轻、重型急性胰腺炎患者和正常人TREM 1mRNA的表达分别为 0 .7714± 0 .2 744 ,1.0 918± 0 .3 3 13和 0 .45 87± 0 .1749,各组之间差异均有显著性 (均P <0 .0 5 ) ,显示急性胰腺炎患者白细胞TREM 1表达明显增加 ,且与急性胰腺炎的严重性明显相关 ,提示TREM 1在急性胰腺炎的发生发展过程中可能有重要作用。     

TREM-1在脆弱类杆菌脂多糖诱导单核细胞炎症反应中的作用

脂多糖（LPS）与免疫细胞表面相应的受体结合后可引发一系列信号转导进而诱生大量炎性介质，导致全身炎症反应综合征（SIRS）或脓毒症。以往的研究多以大肠杆菌LPS为对象，对于临床厌氧菌感染中最重要的致病菌脆弱类杆菌（bacteroides fragilis，B．fragilis的LPS研究较少。髓系触发受体-1（TREM-1）是新近发现的表达于单核／巨噬细胞等髓系细胞表面的激活型受体，能在细菌或LPS等的刺激下触发髓系细胞产生大量炎性因子，从而在炎症反应的触发和放大过程中起重要作用。本文拟通过体外单核细胞炎症反应模型，观察TREM-1在转录及翻译水平的表达情况，以探讨其是否参与脆弱类杆菌LPS所致炎症反应。     

髓系细胞触发受体1在胆道感染患者中的表达

目的　了解胆道感染患者外周血髓系细胞触发受体 1(TREM 1)在转录水平上的表达规律及其意义。方法　收集 3 2例胆道感染患者 (研究组 )和 7例健康志愿者 (对照组 )外周血标本 ,以半定量RT PCR检测白细胞TREM 1mRNA表达水平 ;ELISA检测血清TNF α表达水平。结果　对照组TREM 1mRNA半定量比值为 0 .48± 0 .0 72 ,研究组 1,2 ,3 ,7天外周血TREM 1mRNA半定量比值分别为 0 .93± 0 .0 70 ,0 .90± 0 .0 60 ,0 .82± 0 .0 92和 0 .66± 0 .0 62 ;与对照组相比 ,差异有显著意义 (P<0 .0 5 )。急性重症胆管炎组患者第 1天和第 7天TREM 1mRNA半定量比值高于非重症胆管炎组 (P<0 .0 5 )。TREM 1与TNF α表达水平高度正相关 ( r =0 .75 2 ,P <0 .0 0 1)。结论　TREM 1表达上调可能在胆道感染脓毒症的发生中起重要作用。     

髓样细胞触发性受体-1的研究进展

目的总结髓样细胞触发性受体-1(TREM-1)的研究进展。方法复习相关资料,就近年来TREM-1的研究进展进行综述。结果 TREM-1是激发、放大炎症反应的重要介质,在多种疾病中能增强、放大炎症反应,最终导致炎症反应过度表达。结论 TREM-1在多种疾病的发生、发展过程中有重要作用,为炎性疾病提供了新的分子治疗靶点。     

髓系细胞触发受体1在烧伤后早期患者外周血单核细胞中的表达

目的了解髓系细胞触发受体1（TREM-1）在烧伤后早期患者外周血单核细胞中的表达情况，并探讨其意义。方法选择8例健康志愿献血者（健康对照组）及伤后48h内入院的29例轻、中度烧伤患者（烧伤1组），9例重度、特重度烧伤患者（烧伤2组），采集其外周血分离单核细胞。半定量反转录-PCR法检测单核细胞TREM-1mRNA的表达，流式细胞术检测细胞表面TREM-1蛋白的表达。酶联免疫吸附测定法检测血浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的含量。结果健康对照组、烧伤1组、烧伤2组外周血单核细胞中TREM-1mRNA表达量分别为0．74±0．13、1．24±0．09、1．46±0．07，细胞表面TREM-1蛋白表达率分别为（9±4）％、（51±6）％、（71±7）％。烧伤1组、烧伤2组以上2项指标及血浆中TNF-α、IL-1β含量均较健康对照组明显升高（P=0．000）。3组受试人员血浆中TNF—d、IL-1p的含量与TREM一1mRNA表达水平呈显著正相关（rs=0．68、0．72，P=0．000）。结论严重烧伤后早期患者外周血单核细胞中TREM-1表达增高，这一变化与炎性因子分泌相关；TREM-1参与了烧伤后急性炎性反应的发生与发展。     

人髓样细胞触发受体-1原核表达载体的构建和表达及多克隆抗体的制备

目的 构建人髓样细胞触发受体-1(TREM-1)原核表达载体使其表达并制备多克隆抗体。方法 采用特异性引物扩增人TREM-1胞外段cDNA,经酶切、连接、构建到原核表达载体pET28a(+),将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21( DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA 柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果 序列测定证实构建的重组表达载体pET28a(+)-TREM-1含有人TREM-1编码序列,其序列分析与Genbank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为21.80 kDa的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯,双向琼脂扩散法检测抗体效价为1:16,ELISA法检测抗体效价为1:25 600,Western blot分析显示抗体能特性结合人TREM-1重组蛋白。结论 成功构建高表达重组人TREM-1蛋白的原核表达载体及制备高效价兔抗人TREM-1多克隆抗体。     

Quercetin治疗裸鼠移植人肝癌的作用及机制

目的:探讨quercetin治疗裸鼠移植人肝癌中的作用及三磷酸肌醇( IP3) 和Bax基因表达变化。方法:采用quercetin治疗实验性肝癌,观察肝癌增长情况;用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3 含量;RT-PCR分析癌组织bax mRNA的表达;Western blotting 分析肝癌组织bax蛋白的表达。结果:治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组［体积（15.8±10.1）mm3 vs. (52.3±26.5)mm3;重量（44.8±10.4）mg vs.(91.3±31.4) mg;均P<0.01］，IP3 含量显著低于对照组［（15.9±2.8）pmol/mg vs.（35.3±6.6）pmol/mg; 均P<0.01 ］，bax mRNA表达与对照组无显著性差异［RI（灰度与面积之积的相对强度）(0.64±0.12) vs.(0.56±0.15), P>0.05］，但bax蛋白表达显著高于对照组［RI( 3.16±0.95) vs.(1.37±0.48）］。结论:Quercetin能减少IP3 生成,上调肝癌组织bax蛋白的表达,抑制裸鼠移植人肝癌的增长。     

单人操作建立小鼠原位肝移植模型

目的：探讨一种能稳定、高效地建立小鼠原位肝移植模型且能单人操作的手术改良方法。方法：参照“双袖套”法,肝上下腔静脉采用连续缝合,门静脉、肝下下腔静脉采用袖套法,胆管用支架法吻合,完成小鼠原位肝肝移植70例。术后观察24 h,1周和1个月受体存活率,肝功能及肝组织病理变化。并设立假手术组对照。结果：受体术后24 h,1周和1个月存活率分别为95.7%,90.9%和85.1%。术后1周ALT逐渐升高,1个月降至正常水平;术后ALP值逐渐增高;病理显示肝组织结构良好。结论：该方法成活率高,稳定性好,重复性强,是建立小鼠原位肝移植模型的理想方法。     

COX-2对脓毒症大鼠肝损伤和代谢的影响

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）在脓毒症大鼠肝组织炎症反应中的表达及其对代谢反应的影响。方法：选择体质量相近的Wistar大鼠54只随机分为3组。A组为假手术组;B组为脓毒症模型组;C组为B组+NS-398干预组。通过建立盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症动物模型,用RT-PCR方法检测各组肝组织COX-2 mRNA的表达;采用放射免疫法检测前清蛋白(PA)、转铁蛋白(Tf);同时检测ALT,AST和血浆清蛋白(Alb),并观察肝脏病理变化。结果：（1）COX-2 mRNA 在A 组呈低表达,B,C组表达明显增高,但C组较B 组各时点明显降低(P＜0.05);（2）ALT和AST在B组各时点改变较A,C组明显增高（P＜0.05）;（3）B组病理损伤重,C组肝脏病理损伤减轻;（4）B,C组PA,Tf,Ab较A组下降明显,但C组各时点显著高于B 组（P＜0.05）。结论：COX-2在脓毒症肝损伤中发挥重要作用,它促进分解代谢,抑制合成代谢;其选择性抑制剂可以减轻肝损伤,减弱蛋白分解。     

大蒜素对肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨大蒜素对肝癌细胞生长的影响及相关机制。方法：(1)体外实验：MTT法测定不同浓度大蒜素对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用;荧光定量PCR法测定大蒜素对HepG2细胞VEGF mRNA及ICAM-1 mRNA表达的影响。（2）在体实验：建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、大蒜素处理Ⅰ组［1 mg/(kg·d)］和大蒜素处理Ⅱ组［10 mg/(kg·d)］（n=8）,4周后观察其对肿瘤生长的影响。结果：体外实验显示,不同浓度的大蒜素均能抑制肝癌细胞的生长（P＜0.01)。高浓度大蒜素能直接杀死HepG2细胞。大蒜素能下调肝癌细胞VEGF mRNA和ICAM-1 mRNA的转录（P＜0.01)。在体实验显示,小剂量和大剂量大蒜素对肝癌裸鼠皮下移植瘤均有抑制作用。对照组、大蒜素Ⅰ组和Ⅱ组肿瘤体积分别为(1 923.44±101.25) mm,(918.43±90.65) mm和(604.28±77.41）mm（P＜0.01)。结论：大蒜素在体内和体外均可抑制肝癌细胞的生长;其机制与大蒜素抑制细胞增殖和下调肝癌细胞VEGF mRNA和ICAM-1 mRNA转录有关。     

缺血预处理对大鼠移植小肠基因表达谱的影响

目的:研究缺血预处理(IPC)后大鼠移植小肠基因表达谱的变化，探讨IPC保护移植物的机制。方法:大鼠随机分为假手术组（S组）、小肠移植组（SBT组）和缺血预处理后小肠移植组（ISBT组）。移植肠冷保存/再灌注1 h后，抽提各组小肠总RNA并纯化mRNA;逆转录合成cDNA荧光探针，与cDNA芯片杂交。洗片后扫描芯片荧光信号图像，将SBT组和S组杂交结果与ISBT组和S组杂交结果行生物信息学分析。结果:在4 096条基因中，正常小肠与ISBT组差异表达基因共有297条，已报道有GeneBank（基因库）登录号的基因84条。其中表达下调的基因共18条，表达上调基因共66条，这些差异表达基因与IPC保护效应有关。结论:IPC通过调节细胞黏附相关基因、细胞能量和物质代谢相关基因及细胞信号转导相关基因的表达，发挥移植物细胞保护效应。     

小鼠生长激素促分泌素受体真核表达载体的构建及表达鉴定

目的 构建小鼠生长激素促分泌素受体(GHS-R)真核表达系统,并观察其在瞬时转染的COS-7细胞系中的表达情况.方法 以小鼠基因组为模板,通过拼接PCR技术(SOE-PCR)克隆出GHS-R的编码序列(CDS),插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组真核表达质粒pcDNA3-GHS-R,酶切鉴定并测序,瞬时转染COS-7细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的 蛋白.结果 成功扩增了小鼠GHS-R编码序列(CDS),酶切和测序证明pcDNA3-GHS-R构建正确,Western Blot方法证实转染的该质粒能在COS-7细胞中正确表达目的 蛋白.结论 成功构建了小鼠GHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础.     

靶向沉默IGF1R基因miR30-shRNA慢病毒的构建及其抗肝癌细胞生长

目的：目的 研究靶向人胰岛素样生长因子1类受体(IGFIR)基因miR30-shRNA慢病毒对肝癌细胞生长的影响。方法：针对已经筛选确定的IGF1R基因干扰有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和EcoRI酶切后的pPRIME载体连接产生pPRIME-IGF1R-miR30-shRNA。用后者,psPAX2及pMD2G 3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒。慢病毒PRIME-IGF1R-miR30-shRNA大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。RT-PCR及Western blot检测IGF1R表达,CCK-8法检测细胞生长。结果：成功构建PRIME-IGF1R-miR30-shRNA,滴度为4.58×109PFU/mL; 该慢病毒能抑制肝癌细胞IGF1R表达及生长。结论：IGF1R基因miR30-shRNA慢病毒靶向转染可有效地封闭肝癌细胞的IGF1R表达,降低肝癌细胞的增殖能力,为以IGFIR基因为靶点的肝癌生物治疗的进一步研究奠定了实验基础。     

线粒体融合素基因-2对肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其机制。 方法:利用脂质体2000将质粒mfn2转染HepG2细胞。RT-PCR检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平;Weastern Blot法检测mfn2蛋白的表达;MTT检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响;Annnexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因的表达;电镜观察超微结构的变化。 结果: 转染mfn2基因的HepG2细胞可以稳定表达Mfn2蛋白;MTT实验提示转染mfn2基因后，HepG2细胞增殖受到抑制;转染组与转染空质粒组和空白对照组相比前者可促进细胞凋亡(P<0.05);电镜示mfn2转染后HepG2细胞线粒体嵴断裂、消失、基质疏松;RT-PCR结果示Bcl-2和survivin基因表达下调。结论:外源性mfn2基因可抑制HepG2细胞的增殖，诱导其凋亡。凋亡相关基因的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。     

甲状旁腺癌的诊治：附6例报告

目的 总结甲状旁腺癌(PTC)的诊治经验.方法 回顾分析6例PTC的临床资料.结果 5例有原发性甲状旁腺功能亢进症的表现,3例可扪及颈部肿块,4例高钙血症[(3.62±0.56 )mmol/L],4例血甲状旁腺素(PTH)升高达正常上限的2倍以上.3例术中快速病检确诊,2例术后石蜡病检及免疫组化确诊,1例术后石蜡病检及免疫组化结合临床资料确诊.5例行甲状旁腺切除术 患侧甲状腺次全切除术,随访1~5年,其中1例术后复发;1例仅行甲状旁腺肿瘤切除术的甲状旁腺癌伴多发性骨转称患者,术后16 d死于多器官功能衰竭.结论 PTC术前诊断困难,术前血生化检查,PTH,99mTc-MIBI,超声、CT检查及术中大体标本观察和快速病检有利于明确诊断.手术方式以选择甲状旁腺切除术 患侧甲状腺次全切除术为宜.     

Galectin-1表达对LoVo细胞凋亡的影响

目的 观察galectin-1对LoVo细胞生长的影响.方法 构建galectin-1真核表达载体转染LoVo细胞,观察LoVo细胞生长情况.用免疫细胞化学方法检测转染后细胞galectin-1蛋白表达水平,免疫印迹检测转染后细胞Bc1-2表达的变化.结果 成功构建了 galectin-1真核表达载体pEGFP-C1/GAL1(p-GAL1),并建立了稳定的空载体(LoVo)细胞和真核表达载体转染细胞(P-LoVo细胞和p-GAL1-LoVo细胞).p-GAL1细胞可表达galectin-1,而另2组细胞则不能.galectin-1表达可降低LoVo细胞Be1-2的表达,诱导的细胞凋亡增加,3组细胞凋亡率分别为(9.61±0.56)%,(3.56±0.53)%和(3.46±0.46)%(P<0.001).而细胞生长曲线表明,P-GAL1-LoVo细胞增殖与P-LoVo和LoVo细胞相似.结论 galectin-1可促进LoVo细胞凋亡可能与galecfin-1可降低LoVo细胞Be1-2的表达有关.