免疫毫微粒的内化作用及其逆转人肝癌细胞多药耐药性的研究

目的：观察免疫毫微粒能否内化进入人肝癌细胞及其多药耐药性(MDR)细胞，研究免疫毫微粒能否逆转MDR。方法：将抗人肝癌阿霉素白蛋白免疫毫微粒(HAbl8-ADR-HSA-NP)与人肝癌株SMMC-7721细胞及其MDR细胞(SMMC-7721／MDR^ )共同孵育，采用扫描电镜，激光共聚焦显微镜，透射电镜技术观察免疫毫微粒与靶细胞的结合及免疫毫微粒的内化过程；采用MTT比色分析法测定免疫毫微粒对靶细胞的杀伤率。计算免疫毫微粒对靶细胞的IC50和MDR细胞的耐药倍数(RF)。结果：激光共聚焦显微镜观察，SMMC-7721细胞表面和胞浆中均有许多荧光毫微粒；透射电镜观察。免疫毫微粒与SMMC-7721细胞及其MDR细胞在37℃孵育后，胞浆中可见有免疫毫微粒，随时间的延长细胞变性损伤越严重；当SMMC-7721及其MDR细胞预先经HAbl8抗体处理，再与HAbl8-ADR-HSA-NP孵育，则胞浆中未见免疫毫微粒；扫描电镜显示，多个HAbl8-ADR-HSA-NP紧密结合在SMMC-7721／MDR^ 表面。MDR细胞对于免疫毫微粒的耐药倍数(2.1)较其对于游离ADR(4．4)明显降低。结论：人肝癌特异性阿霉素白蛋白免疫毫微粒通过抗体介导能特异性内化进入人肝癌SMMC-7721细胞及其MDR细胞；该免疫毫微粒能增强MDR细胞对阿霉素杀伤的敏感性。有一定程度逆转MDR作用。     

单抗F(ab′)2段导向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制备及其体外杀伤癌细胞作用

目的制备人肝癌特异性单克隆抗体HAb18的F(ab′)2片段导向抗肝癌阿霉素(ADR)白蛋白(HSA)免疫毫微球(HAb18 F(a b′)2-ADR-HSA-NP),并研究其体外靶向肝癌细胞和杀伤肝癌细胞的作用.方法采用乳化高温固化法制备阿霉素白蛋白毫微球(ADR-HSA-NP)后,应用改进的N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)法制备HAb18 F(ab′)2-ADR- HSA-NP.在光镜和电镜下观察体外HAb18 F(ab′)2-ADR-HSA-NP和ADR-HSA-NP与肝癌细胞株SMMC-7721的结合特性,并用3H-TdR法测定两种微球体外杀伤肝癌细胞株SMMC -7 721的作用.结果在荧光染色后,HAb18 F(ab′)2-ADR-HSA-NP表面发出明亮黄绿色荧光,而ADR-HSA-NP未见荧光.HAb18 F(ab′)2-ADR-HSA-NP能结合肝癌细胞株SMMC-7721,且能呈剂量依赖地有效杀伤肝癌细胞株SMMC-7721,而ADR-HSA-NP 不能结合和明显杀伤肝癌细胞株SMMC-7721.两种微球均不能结合和杀伤人大肠癌细胞株SW 1116.结论 HAb18 F(ab′)2-ADR-HSA-NP具良好的体外特异性结合并杀伤人肝癌细胞.     

抗癌丝裂霉素白蛋白微球的制备及体外释药性能

以人血清白蛋白为载体材料,精制棉籽油为油相,采用乳化热固法制备了抗癌丝裂霉素C白蛋白微球,对丝裂霉素C白蛋白微球的粒径、载药量、包封率以及药物的体外释药等特性进行了研究。结果表明,采用乳化热固法制备的白蛋白微球平均粒径为500 nm;丝裂霉素C白蛋白微球的平均载药量为2.98μg/m g,包封率为61.2%,在体外具有明显的药物缓释效果。     

SPG膜乳化法制备载BSA的PLGA微球的工艺考察

目的 采用SPG膜乳化法,制备载蛋白药物的聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)微球,并对其形态学性质、载药量、体外释药进行考察.方法 以血清白蛋白(BSA)为模型药物,PLGA作为载体材料,采用SPG膜乳化技术结合复乳溶剂挥发法制备微球;分别考察初乳匀浆转速、内水相体积、膜挤出压力、外/内水相加盐等因素对微球质量的影响.结果 以优化处方制备的载药微球形态圆整、粒径均一,平均粒径为(55.51±0.24)μm,载药量、包封率分别为7.70％和69.33％,缓释时间达到40 d.结论 本研究获得了SPG膜乳化法制备BSA-PLGA缓释微球的新工艺.     

新疆紫草素对荷H22肝癌小鼠抗肿瘤的实验性研究

本文通过体外细胞毒试验和肿瘤抑瘤率的测定，观察了新疆紫草素对人肝癌细胞SMMC-7721体外杀伤作用及对荷H22小鼠肿瘤抑瘤率和免疫功能的影响。结果显示在对SMMC-7721肿瘤细胞的杀伤作用中新疆紫草素组的杀伤活性分别为47．2％，31．9％，24．8％。新疆紫草素组对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为66．32％，53．30％，50．02％。结果表明新疆紫草素是一种能抑制肿瘤细胞的增殖以及调控机体免疫功能的中药。     

SPG膜乳化法制备PEG-PLGA微球和PLGA微球载药释药特性的对比研究

目的 采用SPG膜乳化法,研究制备载蛋白药物的PEG-PLGA微球的新工艺,并比较PEG-PLGA微球和PLGA微球的载药释药特性的差异.方法 以多种PEG-PLGA为载体材料,牛血清白蛋白(BSA)为模型药物,采用SPG膜乳化法制备缓释微球;以载药量、包封率、体外释放、粒径等为指标,优化载体材料种类、司盘80用量等参数;采用激光共聚焦显微镜、差示扫描量热法等方法探讨PEG-PLGA微球和PLGA微球的载药释药差异的机制.结果 优化的PEG-PLGA微球形态圆整、粒径均一,平均粒径(42.89±0.21) μm,包封率和突释率分别为91.40％、16.23％,40 d累积释放率超过90％.结论 PEG-PLGA缓释微球能有效提高载药量、包封率,降低突释率,释药匀速且完全.     

单抗F（ab‘）2段导向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制备及其体外杀伤癌细胞作用

目的：制备人肝癌特异性单克隆抗体HAb18的F（ab‘)2片段导向抗肝癌阿霉素（ADR）白蛋白（HSA）免疫毫微球（HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP)，并研究其体外靶向肝癌细胞和杀伤肝癌细胞的作用。方法：采用乳化高温固化法制备阿霉素白蛋白毫微球（ADR－HSA－NP）后，应用改进的N－琥珀酰亚胺基－3－（2－吡啶二硫），丙酸酯（SPDP）法制备HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP。在光镜和电镜下观察体外HAb18 F(ab‘)2-ADR-HSA-NP和ADR－HSA－NP与肝癌细胞株SMMC－7721的结合特性，并用3H－TdR法测定两种微球体外杀伤肝癌细胞株SMMC－7721的作用。结果：在荧光染色后，HAb18F(ab‘2)-ADR-HSA-NP表面发出明亮黄绿色荧光，而ADR－HSA－NP未见荧洮，HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP能结合肝癌细胞株SMMC－7721，且能呈剂量依赖地有效杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，而ADR－HSA－NP不能结合和明显杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，两种微球均不能结合和杀伤人大肠癌细胞株SW1116。结论：HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP具良好的体外特异性结合并杀伤人肝癌细胞。     

阳和汤含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的:采用血清药理学的方法,观察阳和汤对SMMC-7721细胞生长增殖的影响,探索该复方对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用.方法:设空白对照组、阳性对照组、阳和汤组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,采用倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测各组含药血清作...     

重楼、土鳖虫对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制的协同作用

目的体外观察重楼及土鳖虫提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用及两者联合应用的抑制率及相互作用。方法采用MTT法测定两者对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制率,利用金式公式判定两药舍用的效果。结果重楼及土鳖虫提取物能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并呈浓度和剂量依赖性。两者作用于人肝癌SMMC-7721细胞72h的IC50分别为0．17mg／mL和1．99mg／mL。重楼提取物0．1-0．8mg／mL与土鳖虫提取物1～4mg／mL同时给药对人肝癌SMMC-7721细胞可产生单纯相加至协同杀伤作用.结论重楼、土鳖虫提取物联合用药可产生协同作用,两者联合应用在抗肿瘤治疗中具有合理性:      

高载药诱导的聚2-噁唑啉胶束形态变化研究

目的 制备载紫杉醇的聚2-(噁)唑啉纳米胶束,通过改变投药量考察药物引起的胶束形态变化,以期构建新型的高荷载嵌段共聚物胶束递药系统.方法 采用薄膜水化法制备聚2-(噁)唑啉载药胶束,以粒径、包封率和载药量等评价其理化性质,采用膜透析法考察其体外释药特性,利用CCK-8法测定其细胞毒性.结果 随着投药比由80∶100(紫杉醇与聚2-恶唑啉质量比)增加至110∶100,胶束逐渐由球形延长,变为蠕虫状.投药比为80∶100时,球形胶束的平均粒径为(43.17±0.95) nm,包封率为(88.81±2.93)％,载药量为(40.49±2.03)％;投药比增加至110∶ 100后,所得蠕虫状胶束的平均粒径为(107.83±1.51) nm,包封率为(77.08±0.97)％,载药量为(40.34±0.51)％.球形和蠕虫状胶束在磷酸盐缓冲液中24 h的累积释放量分别达到(76.58±3.07)％和(77.66±1.00)％,在含2％小牛血清白蛋白的PBS溶液中 24 h的累积释放量高达(100.31±1.80)％和(99.73±2.56)％.球形胶束和蠕虫状胶束对人肺腺癌细胞A549的杀伤1C50值分别为0.336和0.342 μg/mL.结论 成功制备了高荷载的球形和蠕虫状载药胶束,体外细胞毒性实验证明其具备抗肿瘤活性.     

Preparation and in vitro killing effect of adriamycin-loaded immunonanosphere against hepatoma led by F (ab')2 Fragment of monoclonal antibodies]

OBJECTIVE: To study the preparation method and in vitro killing effect of adriamycin (ADR)-loaded human serum albumin (HSA) immunonanosphere (HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP) against hepatoma led by F(ab')2 fragment of human hepatoma specific monoclonal antibody HAb18. METHODS: After ADR loaded HSA nanosphere (ADR-HSA-NP) was prepared in the emulsifying high temperature solidifying way, HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP was prepared using the modified N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio) propionate (SPDP) method. In vitro binding characters of HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP and ADR-HSA-NP and hepatoma cell SMMC-7721 were observed under optical microscopy and electronic microscopy. In vitro effects of killing hepatoma cell SMMC-7721 of two microspheres were determined using the method of 3H-TdR. RESULTS: The surfaces of HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP gave out bright yellow-green fluorescence after it was dyed with fluorescent agent, whereas ADR-HSA-NP did not give out fluorescence. HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP could integrate with hepatoma cell SMMC-7721 and effectively killed hepatoma cell SMMC-7721 with dose dependence, but ADR-HSA-NP could not obviously integrate and kill SMMC-7721. Neither of the two microspheres could bind and kill human large intestine cancer cell SW1116. CONCLUSION: HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP has a good character for in vitro specific targeting to bind and kill human hepatoma cell.     

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用.方法 MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响;Elisa法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)生成;流式细胞法检测扶正消瘤汤对人肝瘤细胞SMMC-7721凋亡的影响;免疫组化法测定bcl-2和bax表达.结果 扶正消瘤汤100 μg/ml、50μg/ml剂量组在12～84 h对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,24～48h对SMMC-7721细胞TNF-α生成均有明显的促进作用,对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用,并随浓度和时间(24～72h)的增加凋亡率增加,活细胞减少;扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用,浓度越大上调越明显.扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用,其中高剂量组与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正消瘤汤对肿瘤的治疗作用的机制可能与促进TNF-α生成有关,并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关.     

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。     

土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和分化的影响

目的探讨土大黄苷(rhaponticin)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和分化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测土大黄苷对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖抑制率,镜下观察细胞形态改变,测定各组细胞SOD水平。结果不同浓度土大黄苷对SMMC-7721细胞的增殖抑制率随浓度和时间依赖性(P<0.01),并且药物浓度在100-250μmol/L的范围内显著抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖;药物在200μmol/L作用24h后,显微镜下可观察到肝癌细胞SMMC-7721的细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转;肝癌细胞在药物浓度为200μmol/L下作用12h、24h和48h后,各时间组肝癌细胞中SOD活力逐渐上升(P<0.05)。结论土大黄苷在体外可呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖并促进其分化。其作用机制可能与提高SOD的活性有关。     

10-羟基喜树碱联合热疗对肝癌协同杀伤作用的研究

目的: 研究10-羟基喜树碱(HCPT)联合热疗对肝癌细胞有无协同杀伤作用,为临床应用提供实验依据。方法: 人肝癌细胞株SMMC-7721进行细胞培养、传代,实验分成四组:(1)单纯热疗组;(2)单纯HCPT组;(3)热疗与HCPT联合组;(4)对照组,各组分别进行实验,用MTT法测定各组对细胞的杀伤作用。结果: 单纯热疗显示温度43℃、44.5℃(各30 min)对SMMC-7721细胞有明显的杀伤作用(P<0.01),而40℃、41.5℃(各30 min)对细胞杀伤作用不明显(P>0.05)。HCPT对肝癌SMMC-7721细胞有明显杀伤作用(P<0.01),呈时间依赖性和浓度依赖性(P<0.01)。HCPT联合热疗对细胞的杀伤作用明显强于单纯的HCP T或热疗的作用(P<0.01)。结论: HCPT联合热疗对肝癌细胞的杀伤有明显的协同作用。     

原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用

目的探讨葡萄籽提取物原花青素（PA）对人肝癌细胞SMMC-7721细胞的诱导分化作用。方法用不同剂量的PA与SMMC27721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和PA对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白mRNA表达,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果 PA在20～60μg/ml的浓度范围均能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高（P〈0.05）,细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,40μg/ml和60μg/ml的PA均可使细胞甲胎蛋白mRNA表达量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高。结论 PA对人肝癌SMMC27721细胞具有抗增殖和促分化作用。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡及其机制的初步研究

目的研究10-羟基喜树碱(10-HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法用10-HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC-721人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并对这些细胞的P53蛋白进行免疫组织化学染色。结果当10-HCP终浓度>2.0μmol·L-1时,部分细胞可见典型的凋亡特征核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着10-HCPT浓度或作用时间增加,凋亡率逐渐升高。各组细胞P53蛋白免疫组化染色均为阴性。结论10-HCPT可诱导SMMCC-7721细胞凋亡,其作用效果呈剂量、时间依赖性。     

蛋白激酶Cδ对人原发性肝癌细胞增殖的影响

目的初步探讨PKCδ对人原发性肝癌细胞增殖的影响．方法体外培养SMMC-7721细胞,脂质体介导基因体外转导,通过细胞计数、细胞形态学观察、MTT法、流式细胞仪检测技术等方法研究PKCδ对人原发性肝癌细胞的影响．结果细胞计数的生长曲线示转导人PKCδ的SMMC-7721细胞数目明显减少;MTT法显示转导人PKCδ的SMMC-7721细胞的OD值减小,活细胞数目显著减少（P〈0．01）;细胞形态学观察转导入PKCδ的SMMC-7721细胞脱落,连接疏松,失去光泽;流式细胞仪检测到加入PKCδ的SMMC-7721细胞凋亡率增加．结论PKCδ有抑制SMMC-7721细胞增殖,促进凋亡的作用．     

腺病毒介导的P120ctn基因对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的以腺病毒介导连环蛋白P120(P120ctn)基因,转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法用腺病毒介导的P120ctn基因转染SMMC-7721细胞,用逆转录-PCR(RT-PCR)和Western Blot检测细胞中P120ctn表达水平,并测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果腺病毒介导的P120ctn转染SMMC-7721后,P120ctn的表达水平显著上升;体外侵袭实验显示转染后SMMC-7721的侵袭能力明显下降。结论腺病毒介导的P120ctn基因能够在SMMC-7721细胞中有效表达,并显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。