p16INK4A、NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理学意义

目的：探讨宫颈鳞癌组织中p16INK4A,NF-κB p65的表达及临床病理学意义。方法：采用免疫组化PV-9000法检测p16INK4A,NF-κB p65在30例宫颈鳞状细胞癌（SCC）、30例宫颈上皮内瘤病变（CIN）和30例慢性宫颈炎（对照组）中的表达。结果：在慢性宫颈炎组织、CIN和宫颈鳞癌中p16INK4A的阳性率分别为26．66％、50．00％及93．33％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。NF-κB p65的阳性率分别为23．33％、56．66％及86．66％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。p16INK4A、NF-κB p65在不同临床分期,病理分级及淋巴结是否转移中的阳性表达率差异均无统计学意义（P〉0．05）。p16INK4A表达与是否绝经有关,在绝经组中表达高于未绝经组（P〈0．01）。结论：p16INK4A、NF-κB p65的表达在宫颈癌的发生、发展中起重要作用,p16INK4A和NF-κB p65有可能成为预测宫颈鳞癌发生的生物学检测指标。     

胃癌中p16INK4a-CDK4-pRb通路蛋白表达异常

目的：检测胃癌组织中p16^INK4a-CDK4-pRb通路p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达状况，探讨蛋白表达与胃癌发生发展以及临床病理指标的关系。方珐；采用免疫组织化学方法检测了胃癌组织中p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达。结果：10例正常胃黏膜中相应蛋白表达全部阳性．而肿瘤组织中p16^INK4a、pRb蛋白表达阳性率分着1为54％（44／81）和90％（73／81），p16^INK4a蛋白表达显著低于正常组织（P=0．005），26％（21／81）的肿瘤组织中CDK4过表达。p16^INK4a、pRb、CDK4蛋白表达与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别、年龄均无相关性．结论：p16^INK4a、CDK4、pRb蛋白表达异常是胃癌细胞常见的分子事件p16^INK4a-CDK4-pRb细胞周期调控通路异常可能参与了胃癌的发生发展。     

细胞周期调控因子P16INK4、P57kip2和K i67在肝癌中的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控因子P16INK4、P57kip2和Ki67在肝癌中的表达水平及其意义。方法收集正常肝组织标本21例,肝细胞肝癌标本48例及对应的癌旁组织标本48例为研究对象,通过免疫组织化学和Western blot分析P16INK4、P57kip2和Ki67的表达水平。结果 P16INK4及 P57kip2蛋白肝癌组织中的表达与癌旁组织及正常肝脏组织比较显著降低,阳性率分别为49．3％和34．2％,K i67蛋白肝癌组织中的表达水平显著升高,其阳性率为91．7％,与癌旁组织及正常肝脏组织比较差异均有统计学意义（P＜0．05）,结果与Western blot结果一致;高、低分化组P57kip2、Ki67及P16INK4的表达水平比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 P16INK4、P57kip2表达降低及Ki67的高表达在肝细胞癌的发生、发展过程中可能有重要的作用。     

细胞块免疫化学技术在宫颈癌前病变筛查中的应用价值

目的 探讨细胞块免疫细胞化学技术在宫颈脱落细胞筛查宫颈癌中的应用价值.方法 以组织病理诊断结果为标准,对182例细胞学诊断为非典型鳞状上皮细胞（ASC）及以上病变的病例,利用宫颈液基细胞学残余标本制作细胞块,进行p16INK4a蛋白的免疫细胞化学染色.结果 p16INK4a蛋白在宫颈炎及低级别病变表达为41.37%（36/87）,高级别及癌中的表达95.78%（91/95）,差异有统计学意义（P＜0.01）.在细胞学诊断结果为ASC至鳞状细胞癌（SCC）中,p16INK4a蛋白阳性表达率与病变级别呈正相关,其差异有统计学意义（P＜0.01）.p16INK4a蛋白阳性表达对高级别宫颈病变诊断的敏感性为97.20%,特异性83.40%,阳性预测值92.12%,阴性预测值74.02%,诊断准确率92.37%.在宫颈病变的病例中细胞块与组织学标本中p16INK4a蛋白表达率分别为92.92%（105/113）和93.80%（106/113）,两者差异无统计学意义（P ＞0.05）.结论 细胞块技术对宫颈脱落细胞进行p16INK4a蛋白检测,可提高宫颈癌筛查的准确性,同时细胞块可长期保存,重复切片及进行多次检测,便于应用推广.     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

胃癌及癌前病变中PCNA、Bcl—2及P16蛋白的表达

目的：研究胃癌及癌前病变患者增殖细胞核抗原（PCNA）、抑癌基因p16和关键性凋亡调节基因Bcl-2蛋白的表达,进一步探讨胃癌发生的分子生物学机制。方法：应用免疫组化方法测定90例病人的PCNA、Bcl-2、P16蛋白表达情况,其中20例胃癌组织,18例异型增生,12例肠上皮化生,24例萎缩性胃炎,16例浅表性胃炎。结果：从浅表性胃炎到胃癌PCNA指数呈递增趋,各组间差异均有显著性（P＜0．05）。Bcl-2在异型增生组织中的阳性表达率与胃癌、肠上皮化生相比差异无显著性（P＞0．05）,异型增生、肠上皮生化、胃癌组织中Bcl-2的阳性表达率均显著高于慢性胃炎（P＜0．05）。p16在慢性胃炎中阳性表达率显著高于胃癌、肠上皮化生和异型增生（P＜0．05）。结论：胃癌发生的早期即存在较明显的p16基因表达低下,PCNA、Bcl-2蛋白表达增加。     

P16^INK4a联合CK17在宫颈上皮内瘤变中的表达意义

目的研究p16INK4a联合CK17在宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）中的表达情况,探索其临床意义。方法以导流杂交技术检测宫颈病变中高危型人乳头瘤病毒（high risk human papilloma virus,HRHPV）感染,用免疫组织化学方法分别检查CIN病变组织中p16INK4a和CK17表达,并分析HR-HPV病毒感染与p16INK4a及CK17的关联性。结果 1根据宫颈病理结果,将本组119例患者分为3组,其中A组43例,包括慢性宫颈炎及CINⅠ;B组71例,包括CINⅡ-Ⅲ;C组5例,包括宫颈癌。在A组中,HR-HPV感染率为51.2%（22/43）,B组中,HR-HPV感染率为86.0%（61/71）,在C组中,HR-HPV感染率为100%（5/5）;2p16INK4a在宫颈炎、CIN、宫颈癌组织中的表达率分别为14.0%、63.8%、100%,表达率逐渐增高;而CK17分别为58.1%、22.5%、0%表达率逐渐降低。差异均有统计学意义（χ2=32.13,P〈0.05;χ2=17.78,P〈0.05）。3宫颈病变中,p16INK4a与CK17无相关性;p16INK4a的表达与HR-HPV病毒含量正相关（r=0.291,P=0.001）,而CK17表达与HPV病毒含量负相关（r=-0.335,P〈0.001）。结论p16INK4a与CK17的联合检测在宫颈病变的诊断中无明显意义,但均与HR-HPV感染相关的CIN的发生发展密切关系。     

p53,nm23及PCNA蛋白的表达与结肠癌浸润转移的关系

目的：探讨结肠癌中p53、nm23及PCNA的表达与结肠癌浸润转移的关系。方法：采用免疫组化SP法检测76例结肠癌患者p53、nm23及PCNA的表达。结果：结肠癌患者中p53、nm23及PCNA的阳性率分别是53％，70％，82％，p53阳性率与癌组织分化（P＜0．05）、癌浸润深度（P＜0．05）、淋巴结转移（P＞0．05）密切相关；nm23阳性率与癌浸润深度（P＜0．05），淋巴结转移（P＜0．05）密切相关；PCNA阳性率与淋巴结转移密切相关（P＜0．05），p53与nm23表达两者呈负相关（r=-0.402),p53阳性、nm23阴性表达患者淋巴结转移率高于p53阴性、nm23阳性表达者（P＜0．05）。结论：p53、nm23及PCNA在结肠癌中的表达在肿瘤细胞增殖及浸润，转移中均起重要作用，可作为临床预测肿瘤转移潜能及预后的重要参考指标。     

宫颈鳞状细胞癌的PCNA表达及意义

目的 研究增殖细胞核抗原（PCNA）在宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法 应用免疫组化S－P法检测31例宫颈鳞癌及10例正常宫颈组织中PCNA表达。结果 宫颈鳞癌PCNA强阳性率为61．3％,正常宫颈组织均为弱阳性,两者差异有显著性（P＜0．05）,PCNA强阳性表达与组织学分级有关（P＜0．05）而与其它临床病理因素无关（P＞0．05）。结论 检测宫颈鳞癌组织中PCNA表达有助于判断细胞的增殖活性及预后判断。     

CIN和宫颈浸润癌组织中p16INK4a蛋白表达检测的意义

目的 研究p16INK4a蛋白表达在宫颈浸润癌前病变(CIN)和宫颈浸润癌组织中的意义.方法 应用免疫组化技术对68例CIN和36例宫颈浸润癌病变组织中p16INK4a蛋白表达进行检测.结果 CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率为39.7%(27/68),其中CIN Ⅰ为24.0%(6/25),CIN Ⅱ为36.4%(8/22),CIN Ⅲ为61.9%(13/21).CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率3组间的差别有统计学意义(P=0.03).宫颈浸润癌组织中p16INK4a蛋白表达阳性率为66.6%(24/36).CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率低于宫颈浸润癌组,差别有统计学意义(P=0.009).p16INK4a蛋白阳性表达率依次为宫颈浸润癌＞CIN Ⅲ＞CIN Ⅱ＞CIN Ⅰ,差异有统计学意义(P=0.004).正常宫颈上皮和宫颈糜烂组中未发现有p16INK4a蛋白表达阳性细胞.p16INK4a蛋白过度表达现象( ～ )在CIN为23.5%(16/68),宫颈浸润癌为61.1%(22/36),两组间差别有统计学意义(P=0.0001).CIN组中p16INK4a蛋白过度表达现象分别为CIN Ⅲ(47.6%)＞CIN Ⅱ(18.2%)＞ CIN Ⅰ(8.0%),3组间的差别有统计学意义(P=0.005).p16INK4a蛋白过度表达现象在CIN Ⅲ和宫颈浸润癌明显要多于CIN Ⅱ和CIN Ⅰ.结论 p16INK4a蛋白表达的检测可能作为在CIN人群中筛选高危个体的标志物.尤其是有过度表达现象出现时的意义更大.     

4-取代氨基甲酰胺基-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性

根据鬼臼毒素类化合物C_4位氮取代衍生物构效原理,设计并合成了11个4-取代氨基或烃氧甲酰胺基表鬼臼毒素类似物。从鬼臼毒素出发,经溴代、水解、叠氮化、还原以及酰化等六步反应合成标题化合物。体外抗肿瘤活性试验表明这类化合物具有较为显著的生物活性,多数化合物对L1210白血病肿瘤细胞与KB细胞生长抑制活性超过临床用药依托泊甙。     

4-氨基-4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐的合成

目的 合成二肽基肽酶4抑制剂ABT-279和K-579的重要中间体4-氨基4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐.方法 以4-哌啶甲酸乙酯为原料,经N-Boc保护、烷基化、酰胺化、Hofmann降解和N-Boc脱保护5步反应,制备得4-氨基4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐.结果 4-哌啶甲酸乙酯为原料合成目标化合物的总收率为49.5%....     

雷公藤甲素对哮喘小鼠白三烯B_4、C_4表达的影响

目的研究雷公藤甲素对哮喘小鼠哮喘小鼠白三烯B4、C4表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法建立小鼠卵蛋白哮喘模型,随机分为7组,分别为对照组、地塞米松治疗组及不同剂量雷公藤甲素治疗组,用ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织匀浆中白三烯B4、C4表达水平。结果哮喘组白三烯B4、C4表达明显高于正常对照组(P<0.01),雷公藤甲素治疗组及地塞米松组明显低于哮喘组(P<0.01)。结论雷公藤甲素抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制白三烯B4、C4表达的表达活性有关。     

4-取代氨基甲酰胺基-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性

根据鬼臼毒素类化合物C_4位氮取代衍生物构效原理,设计并合成了11个4-取代氨基或烃氧甲酰胺基表鬼臼毒素类似物。从鬼臼毒素出发,经溴代、水解、叠氮化、还原以及酰化等六步反应合成标题化合物。体外抗肿瘤活性试验表明这类化合物具有较为显著的生物活性,多数化合物对L1210白血病肿瘤细胞与KB细胞生长抑制活性超过临床用药依托泊甙。     

血清IL-4和sIL-4R与骨关节炎严重程度的相关性研究

目的通过测定不同严重程度的骨关节炎患者的血清IL-4和sIL-4R水平,对IL-4和sIL-4R水平与骨关节炎严重程度的相关性进行分析研究。方法选取临床收治的膝关节骨关节炎病例共42例作研究,选取12名性别比例、体质量指数相当的正常人作对照组。用WOMAC骨关节炎指数对骨关节炎严重程度进行临床评估。用K＆L评级法对骨关节炎严重程度进行影像学评估。用ELISA法检测研究对象血清IL-4和sIL-4R水平。结果骨关节炎组和正常对照组血清IL-4浓度在0~1.582pg/ml,差异无统计学意义。骨关节炎组的血清sIL-4R水平显著高于正常对照组（Z=-4.236,P=0.00）,差异有统计学意义。骨关节炎组的WOMAC指数与血清sIL-4R水平存在相关关系,相关系数为0.366（P=0.017）。正常对照组与骨关节炎各K＆L等级组的血清sIL-4R水平比较差异有统计学意义（χ2=29.219,P=0.00）,各组的sIL-4R水平均数呈递增趋势。结论骨关节炎患者血清IL-4水平无明显升高,骨关节炎患者sIL-4R水平显著高于正常对照组,而且sIL-4R水平与OA的严重程度具有相关性,血清sIL-4R水平可作为OA的诊断及严重程度判断的参考指标。     

4-间氨基酚-4′去甲表鬼臼酯的抗氧化与抗肿瘤作用

目的 研究4-间氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(MDE)的体外抗氧化与抗肿瘤活性.方法 体外对人胃癌细胞SGC-7901的抗肿瘤活性用四氮唑比色法;体内抗肿瘤活性用动物移植瘤法.用硫代巴比妥酸法测定大鼠肝自发性,Fe2 -抗坏血酸诱发的心、肝、肾组织匀浆中丙二醛生成;分光光度法测定H2O2诱导的红细胞溶血.结果 MDE剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞生长,IC50为36.5(17.1～77.8)mg/L,体内对小鼠移植性肿瘤S180和H22均有明显的抑制作用,并浓度依赖性地抑制大鼠肝组织自发性和Fe2 -抗坏血酸诱导的心、肝、肾组织匀浆中丙二醛的生成,对H2O2诱导的大鼠红细胞溶血也有一定的抑制作用.结论 MDE有明显的抗氧化及抗肿瘤作用.     

胰腺癌组织中DPC4/Smad4的表达及临床意义

目的　探讨DPC4 /Smad4在胰腺癌组织中的表达及意义。方法　采用免疫组织化学SABC法,对34例胰腺癌和慢性胰腺炎组织进行DPC4 /Smad4表达水平研究。结果　DPC4 /Smad4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达低于慢性胰腺炎组织(P <0 .0 5 ) ,患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、病理分型、组织学浸润之间的表达差异无统计学意义(P >0 .0 5 )。结论　DPC4作为一种抑癌基因,其改变对胰腺癌的发生、发展可能起重要作用。     

LMO4的异位表达对NB4细胞增殖和分化的影响

目的 探讨LMO4 对急性早幼粒白血病细胞系NB4细胞增殖和分化的影响. 方法 利用 qRT-PCR和 Western blot法检测 NB4 中 LMO4 表达;利用慢病毒介导 LMO4 的cDNA感染NB4 细胞后,建立过量表达 LMO4 的 NB4 细胞株;采用MTT法检测细胞增殖;使用全反式维甲酸( ATRA)诱导NB4细胞分化0 ~48 h,瑞氏染色观察分化的细胞特性;流式细胞术分析NB4 细胞分化后产生CD11b阳性的细胞比例. 结果 qRT-PCR 和 Western blot 结果均提示 NB4中LMO4表达增加;ATRA诱导NB4分化时,LMO4的表达降低;MTT结果证实过量表达LMO4促进NB4增殖;瑞氏染色和流式细胞术结果均显示,过量表达LMO4能够促进ATRA诱导NB4细胞分化. 结论 LMO4参与调节NB4细胞的增殖,并能增加NB4细胞对ATRA的敏感性,促进其分化.     

IL-4与IL-10调控CD4+ T细胞CXC趋化性细胞因子受体4的研究

目的研究IL-4和IL-10对CD4+ T细胞上CXC趋化性细胞因子受体4（CXCR4）表达的调控。方法采用流式细胞术,实时定量逆转录PCR（RT-PCR）,细胞因子的趋化性分析以及Scatchard分析法检测CXCR4和CXCR4 mRNA。结果 IL-4和IL-10能够显著上调或下调CD4+ T细胞上CXCR4的表达。SDF-1诱导的CD4+ T细胞趋化性同样也受到IL-4和IL-10的调控。IL-4和IL-10能分别上调或下调CD4+ T细胞中CXCR4的mRNA表达。在新鲜分离的CD4+ T细胞上只存在一种亲和力的CXCR4（Kd 6.3 nmol*L-1）。而IL-4刺激的CD4+ T细胞存在两种不同亲和力的CXCR4（Kd1 4.4 nmol*L-1和Kd2 14.6 nmol*L-1）。IL-4和IL-10通过环腺苷酸和环鸟苷酸双重信号途径对CD4+ T细胞上CXCR4表达的调控与Ca2+激活刺激无关。IL-4和IL-10可能是通过CD26来调控CXCR4在CD4+ T细胞上的表达。结论 IL-4和IL-10对CXCR4-SDF-1受体-配体对的调节,在HIV侵袭和炎症感染进程有关的细胞因子环境中起着重要作用。     

PAGE-4单克隆抗体的制备及表达分布

目的:制备抗PAGE-4 mAb并鉴定其特异性及敏感性,应用该抗体在蛋白质水平上分析PAGE-4在正常与疾病组织中的表达. 方法:以PAGE-4为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术建立稳定分泌抗PAGE-4 mAb的杂交瘤细胞系. 采用Western Blot及ELISA等方法鉴定抗体的特异性和敏感性. 应用正辛酸-饱和硫酸铵方法纯化抗体. 利用免疫组织化学方法对PAGE-4在正常与疾病组织中的表达进行分析. 结果:获得4株分泌特异性抗PAGE-4 mAb的杂交瘤细胞株,mAb具有较高的特异性与敏感性. 在正常男女生殖系统组织如:睾丸、前列腺、子宫中以及正常胰腺组织中有PAGE-4的表达,在前列腺癌、子宫内膜腺癌中PAGE-4高表达. PAGE-4在蛋白质水平上的表达格局与以往有关PAGE-4在mRNA水平上的报道一致. 结论:成功获得抗PAGE-4 mAb,为研究PAGE-4定位及功能提供了重要工具.