乳腺癌干细胞中活性氧簇水平的研究

目的 探讨乳腺癌MCF-7细胞中CD44+CD24-/low表型乳腺癌干细胞活性氧簇水平.方法 用悬浮培养的方法富集乳腺癌干细胞.用流式细胞仪检测CD44+CD24-/low表型乳腺癌干细胞含量,体内成瘤实验验证其干细胞特性,克隆形成实验检测其辐射敏感性,2′-7′-二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测其活性氧簇...     

Akt联合电离辐射对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响

目的: 通过检测Akt联合电离辐射对乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响,探讨以Akt为靶点的乳腺癌放射治疗作用。方法: 选择人乳腺癌MCF-7细胞、Akt过表达MCF-7(Akt-MCF-7)细胞和Akt低表达(Akt-RNAi-MCF-7) 细胞,实验分为MCF-7组、MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+ 4 Gy组 。3种细胞经4 Gy照射后,Western blotting法检测Akt蛋白表达,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,MDC染色荧光显微镜观察细胞自噬百分比,MTT法检测细胞增殖活性。结果: 与MCF-7 细胞比较,Akt-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度增加,Akt-RNAi-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度降低。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy、Akt-MCF-7+4 Gy和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比均明显增加(P<0.05或P<0.01),且以Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组增加最明显;与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显降低(P<0.05或P<0.01),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显增加(P<0.05或P<0.01)。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.05或P<0.01),Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性降至最低。与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在24 h时明显升高(P<0.05),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.01)。结论: Akt过表达可以显著降低电离辐射诱导的MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖,而Akt低表达作用则相反。     

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

电离辐射对胸腺细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞仪对小鼠Ｘ射线全照射后胸腺细胞周期进程与Ｘ射线剂量效应关系进行了研究，４．０ＧｙＸ射线全身照射后４ｈ胸腺细胞便出现明显的ＤＮＡ合成抑制和Ｇ２阻滞，８ｈＧ２阻滞达最高点，不同剂量全身照射的结果表明，低剂量（５０～１００ｍＧｙ）全身照射后胸腺细胞ＤＮＡ合成了能力增强，而高剂量全身照射后则出现明显的ＤＮＡ合成抑制，Ｇ２阻滞和有丝分裂延迟。     

事艾滋病流行病学和电离辐射生物效应领域的研究。

目的：探讨电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂及诱导剂对人乳腺癌细胞株增殖的抑制作用。方法： 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞术（FCM）检测经不同剂量（0、2、4、8和10 Gy）照射和4 Gy 、4 Gy+自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（-MA）、4 Gy +自噬诱导剂（rapamycin）、4 Gy + 凋亡抑制剂泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂（z-VAD-fmk）不同方法处
理的人乳腺癌细胞存活和增殖情况,并分析其量效、时效关系。结果：随着照射剂量的增加
（4、8和10 Gy）及时间的延长（48和72 h）,乳腺癌细胞的增殖抑制率升高,组间比较差
异有显著性（P<0.05 或 P<0.01）。与4Gy＋rapamycin处理组比较,4 Gy + 3-MA和4 Gy + z
-VAD-fmk处理组癌细胞增殖抑制率比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）,不同方法处理后24、48和72
h其抑制率组间比较差异有显著性（P<0.05或 P<0.01）。结论：电离辐射联合自噬诱导剂能够促进癌细胞凋亡,而电离辐射联合自噬抑制剂或凋亡抑制剂能够抑制其凋亡。电离辐射可诱导人乳腺癌细胞自噬并促进其凋亡。     

乳腺癌干细胞的培养及鉴定

目的从乳腺癌患者的肿瘤组织中获得乳腺癌干细胞,并确定其生物学特性。方法收集乳腺癌患者的肿瘤组织,利用乳腺球悬浮培养法获得乳腺球细胞。用流式细胞仪检测细胞CD44以及CD24的表达,用Western印迹法检测细胞ALDH1,ESA以及Oct4的表达。将2×104、2×105和2×106三种细胞数的原代乳腺球囊细胞及贴壁细胞分别接种到NOD/SCID鼠的脂肪垫,观察其成瘤能力和肝肺转移情况。结果利用乳腺球悬浮培养的原代乳腺癌细胞中有62.36%呈CD44+/CD24-/low表型,且肿瘤干细胞标记物ALDH1,ESA以及Oct4的表达高于贴壁培养的原代乳腺癌细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与贴壁细胞相比,悬浮培养富集的原代球囊细胞均有更强的成瘤和肝肺转移能力。结论利用乳腺球悬浮培养法可以从人乳腺癌组织中获得乳腺癌干细胞。     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起的ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８－１２ｈ抑制深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

低剂量电离辐射对小鼠脾脏细胞凋亡的影响

目的：研究不同剂量Ｘ射线全身照射对小鼠脾脏细胞凋亡的影响,方法：采用透射电镜术定性及原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）术半定时取观察了电主辐射对小鼠脾脏细胞凋亡影响的时程变化及量效关系,结果：透射电镜观察到２ＧｙＸ射线全身照射后脾脏出现较多典型的凋亡的淋巴细胞,０．０７５Ｇｙ照射后细胞超微结构无显著变化,ＴＵＮＥＬ法观察到剂量电离辐射使脾细胞凋亡增多,低剂量电离辐射则使脾细胞凋亡减少,剂量效应关系曲线呈“     

番茄红素对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖的影响

目的:研究番茄红素对体外培养的雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能作用机制。方法:采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclinD1、bcl-2、bax的mRNA表达的变化。结果:番茄红素抑制MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示cyclinD1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论:番茄红素可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclinD1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而达到抑制肿瘤细胞增殖的可能。     

低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：研究低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应，以揭示低剂量辐射生物效应及其诱导适应性反应的可能机制。方法：实验分D2组（攻击剂量）、D1（诱导剂量）+ D2组和假照组。用X射线照射离体EL-4淋巴瘤细胞，其D1为75 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1），D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1），D1和D2间隔为3~60 h。通过流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔为3~24 h时，D1+D2组细胞凋亡百分数明显低于D2组（P<0.05或P<0.01），G₀/G₁期细胞百分数不同程度低于D2组，而S期细胞百分数明显高于D2组（P<0.05）。结论：75 mGy（12.5 mGy•min^-1）照射后3~24 h，进行1.5 Gy（287 mGy•min^-1）照射，可诱导体外EL-4淋巴瘤细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.     

低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量率效应

目的：观察低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量率效应,以揭示低剂量辐射生物效应及其诱导适应性反应的可能机制。方法：实验分D2组（攻击剂量）、D1（诱导剂量）+ D2组和假照组。用X射线照射离体EL-4淋巴瘤细胞,其D1为75 mGy（剂量率6.25~200.00 mGy•min^-1）,D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy/min）,D1和D2间隔6 h。通过流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1剂量率为6.25~50.00 mGy,D1 + D2组细胞凋亡百分数明显低于D2组（P<0.05）G₀/G₁期细胞百分数明显低于D2组（P<0.01）,而S期细胞百分数不同程度高于D2组。结论：D1为75 mGy（剂量率6.25~50.00 mGy•min^-1）,D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1）、D1和D2间隔6 h,可诱导体外EL-4淋巴瘤细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

电离辐射对胸腺细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞仪对小鼠Ｘ射线全身照射后胸腺细胞周期进程与Ｘ射线剂量效应关系进行了研究。４．０ＧｙＸ射线全身照射后４ｈ胸腺细胞便出现明显的ＤＮＡ合成抑制和Ｇ２阻滞，８ｈＧ２阻滞达到最高点。不同剂量全身照射的结果表明，低剂量（５０～１００ｍＧｙ）全身照射后胸腺细胞ＤＮＡ合成能力增强，而高剂量全身照射后则出现明显的ＤＮＡ合成抑制，Ｇ２阻滞和有丝分裂延迟。     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

靶向沉默ATRX对辐射诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:靶向沉默HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),探讨其对辐射诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用.方法:利用RNA干扰(RNAi)技术建立稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,命名为shATRX1-HeLa,以shCon-HeLa为阴性对照.分别给予0、2和8 Gy X射线照射后,...     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。