硼替佐米对Raji细胞、Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨硼替佐米对Raj i细胞、J ur kat细胞增殖及凋亡的影响及作用。方法:使用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Raj i及Jurkat细胞增殖的改变;使用流式细胞仪,Annexi n V和PI双染色,监测细胞凋亡。结果:硼替佐米对Jurkat细胞、Raj i细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡存在剂量依赖性和时间依赖性。结论:硼替佐米抑制Jurkat细胞、Raj i细胞的增殖,诱导其凋亡,呈剂量依赖性和时间依赖性。     

雷公藤内酯醇对前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:分别用0、6.25、12.5、25、50 nmol/L浓度的雷公藤内酯醇作用于PC-3细胞,24 h、48 h、72 h后,以MTT法检测细胞生长活性,24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;ELISA法测定培养上清液VEGF的水平.结果:雷公藤内酯醇能以剂量与时间依赖性的方式抑制PC-3细胞的生长,促进其凋亡;细胞周期主要阻滞于S期,部分细胞出现凋亡的形态学改变;VEGF表达较对照组明显降低.结论:雷公藤内酯醇能显著抑制PC-3细胞的体外生长,促进其凋亡,并降低VEGF的表达.     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者的护理

应用硼替佐米治疗5例多发性骨髓瘤患者，给药前做好心理护理，给药时密切监护并观察不良反应，包括低血压、乏力、消化道反应、血小板减少、中性粒细胞减少和周围神经感觉异常，经采取相应护理措施，患者均完成药物治疗，其中1例完全缓解，4例部分缓解。均未发生与护理相关的不良反应。     

姜黄素雷公藤内酯醇对前列腺癌细胞PC3及血管内皮生长因子影响的比较

目的研究姜黄素（curcumin,Cur）、雷公藤内酯醇（triptolide,TL）对非雄激素依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞体外作用及其血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法分别用梯度浓度的Cur和TL作用于PC3细胞,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测PC3细胞内VEGF mR-NA的表达;ELISA检测细胞上清液中分泌VEGF蛋白的浓度。结果Cur及TL都能呈剂量与时间依赖性显著抑制PC3细胞的生长,不同浓度组之间及不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.01）。Cur、TL诱导PC3细胞分别出现剂量依赖性G2/M、S期阻滞（P〈0.01）,且各浓度组凋亡细胞比例差异有统计学意义（P〈0.01）;PC3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中分泌VEGF蛋白亦呈剂量依赖性降低。结论Cur、TL能显著抑制体外PC3细胞的生长,分别促进细胞周期阻滞于不同时期,增加凋亡,并且VEGF mRNA及蛋白的表达明显降低,两药抑制肿瘤和血管生长机制不同。     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者的护理

应用硼替佐米治疗5例多发性骨髓瘤患者,给药前做好心理护理,给药时密切监护并观察不良反应,包括低血压、乏力、消化道反应、血小板减少、中性粒细胞减少和周围神经感觉异常,经采取相应护理措施,患者均完成药物治疗,其中1例完全缓解,4例部分缓解.均未发生与护理相关的不良反应.     

硼替佐米联合丙戊酸钠对胰腺癌细胞株SW1990的生长抑制作用

目的 探讨硼替佐米联合丙戊酸钠对人胰腺癌细胞株SW1990的协同凋亡作用及其机制.方法 以浓度为100 nmol/L的硼替佐米联合3 mmol/L的丙戊酸钠干预SW1990细胞株,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染法检测细胞早期凋亡;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡因子生存素(Survivin)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的mRNA表达水平;Western blot法检测Survivin、Caspase-3前体(pro-Caspase-3)、裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平.结果 硼替佐米单药对SW1990的生长抑制作用较弱,而丙戊酸钠单药可有效抑制SW1990细胞的增殖,硼替佐米单药组干预SW1990细胞48 h的早期凋亡率为(13.47 ±2.21)％,而丙戊酸钠单药组为(26.73±2.36)％,两药联合组为(47.06±2.76)％.硼替佐米单药组Survivin mRNA及蛋白水平表达无明显改变、而丙戊酸钠单药组及两药联合组的Survivin、Caspase mRNA及蛋白表达水平均明显下调,cleaved-Caspase-3蛋白表达水平明显上调,各项检测指标联合用药组与单药组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且两药联合有协同作用,可提高SW1990对硼替佐米的敏感性.结论 硼替佐米联合丙戊酸钠对诱导人胰腺癌细胞株SW1990凋亡有协同增效作用,其机制可能与下调Survivin的表达水平相关.     

硼替佐米治疗肾移植术后确诊多发性骨髓瘤一例并文献复习

多发性骨髓瘤（muliple myeloma,MM）是浆细胞恶性增殖性疾病.骨髓瘤细胞在骨髓内增殖并分泌单克隆免疫球蛋白或其轻链,正常多克隆浆细胞功能受到抑制,导致体内多器官功能受损,从而引起一系列临床表现.肾功能受损是MM常见的并发症,如不及时治疗,大部分将迅速进展为终末期肾病,即使行肾移植术,也将导致移植肾损伤[1-2].中山大学附属第一医院器官移植科于2012年收治肾移植术后33个月确诊MM患者1例,经硼替佐米治疗,达到部分缓解,但移植肾功能未能恢复,现报道如下。     

硼替佐米联合沙利度胺和地塞米松治疗初治多发性骨髓瘤30例

目的 观察硼替佐米联合沙利度胺和地塞米松（VTD方案）与传统长春新碱联合多柔比星和地塞米松（VAD方案）治疗初治多发性骨髓瘤的疗效和安全性。 方法 回顾性分析采用VTD和VAD方案治疗的56例初治多发性骨髓瘤患者的临床资料。VTD组患者采用VTD方案治疗，硼替佐米1.3 mg.（m2）-1，快速静脉注射，第1，4，8，11天；沙利度胺100～200 mg.d-1，每晚口服；地塞米松20～40 mg.d-1，第1～4，8，11天，静脉注射。每21 d为1个疗程。VAD组患者采用传统VAD方案化疗，即长春新碱0.5 mg.d-1，多柔比星9 mg.（m2）-1，地塞米松40 mg.d-1，第1～4天静脉滴注，每28 d为1个疗程。所有入组患者治疗2～8个疗程，平均4个疗程。比较两组的疗效及不良反应。采用国际骨髓瘤工作组（IMWG）标准判定疗效，按美国国立癌症研究院通用CTCAEv3.0标准评价不良反应。结果 VTD组总有效率为96.7%，VAD组总有效率69.2%，差异有统计学意义（P<0.01）。VTD组常见不良反应主要为中性粒细胞和血小板减少（36.7%和43.3%）、乏力（53.3%）、胃肠道反应（83.3%）、周围神经病变（33.3%）及带状疱疹病毒感染（6.7%），VAD组分别为65.4%，73.1%，80.8%，96.2%，34.6%，26.9%。差异有统计学意义（P<0.05）。结论 VTD方案治疗初治多发性骨髓瘤的疗效显著优于VAD方案，且不良反应轻微，患者易耐受，值得推广。     

硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病的抑制作用

目的 探讨硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用及其可能机制.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,获取骨髓细胞及脾细胞.以Balb/c小鼠为受鼠,共分为5组:空白对照组(n=17)小鼠不予任何处理;单纯照射组(n=17)小鼠仅接受7.0 Gy X射线全身照射(TBI);药物对照组(n=17)小鼠也接受TBI,并且由尾静脉注射硼替佐米;aGVHD组(n=8)小鼠TBI后注射供鼠骨髓细胞及脾细胞;实验组(n=8)小鼠TBI后输注供鼠骨髓细胞及脾细胞,并予以硼替佐米.观察各组小鼠aGVHD的发生情况、存活时间及嵌合状态,蛋白印迹法测定空白对照组、单纯照射组和药物对照组小鼠肝脏及小肠组织细胞核中核因子κB(NF-κB)p65的表达.结果 aGVHD组和实验组的临床aGVHD评分分别为7.37±0.32和5.85±0.40,实验组明显低于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Thomas GVHD病理分级Ⅲ～Ⅳ级改变.实验组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Ⅰ～Ⅲ级GVHD改变,较aGVHD组有所减轻.实验组存活时间长于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组和实验组小鼠移植后12 d时外周血细胞中H-2Kb分子阳性细胞的百分率均＞90%.药物对照组肝脏及小肠组织细胞核内NF-κB p65表达均高于单纯照射组(P＜0.05).结论 硼替佐米可能通过在一定程度上抑制照射预处理损伤所致肝脏及小肠组织中NF-κB的激活起到减轻aGVHD的作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of bortezomib on acute graft-versus-host disease (aGVHD) in an aGVHD model of mice and investigate the related mechanism. Methods Male C57BL/6( H-2Kb)mice were used as donors and female Balb/c (H-2Kd) mice used as recipients. Balb/c mice received total body irradiation (TBI) by 7.0 Gy X-radiation, and randomly divided into five groups. normal (group A), TBI (group B), TBI + bortezomib (group C), TBI + bone marrow cells (BMC) + spleen cells (SC) (group D) and TBI + bortezomib + BMC + SC (group E). The physical signs and the pathological damage of aGVHD, mean survival time, and chimerism were observed in recipients. The NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues of groups A,B and C were analyzed by Western blot. Results ( 1 ) The clinical aGVHD score in group D was (7.37±0. 32), significantly higher than in group E (5.85 ± 0.40) (P＜0. 05). Histopathology of the gut, liver and skin illuminated that the Ⅲ-Ⅳ degree GVHD occurred in group D. The occurrence of aGVHD in group E was later than in group D. The symptoms and the pathological damage of aGVHD in group E were milder than in group D. The average survival time in group E was significantly longer than that in group D (P＜0.05). The percentage of donor-derived cells in recipient mice was above 90% at day 12 after transplantation; (2) NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues in group B was significantly higher than in group C on the day 1,3 and 5 (P＜0. 05). Conclusion Bortezomib can inhibit the activation and expression of NF-κB,which may be the underlying mechanism for it to relieve aGVHD.     

端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的:探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)抑制前列腺癌细胞PC3端粒酶活性后,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对PC3凋亡的增敏作用。方法:采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用MTT比色试验观察hTERTAS PS-ODN与TNF-α共同作用对前列腺癌细胞PC3生长活力的影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率。结果:hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制,与正义寡核苷酸组及空白对照组相比差异有显著性(P<0.05)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,PC3细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有统计学差异(P<0.01)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,细胞出现典型的凋亡形态变化。hTERT ASPS-ODN作用于PC3细胞后加入4μg/ml TNF-α作用48h,凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:hTERTAS PS-ODN能降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性;hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌细胞PC3凋亡有增敏作用。     

晚期前列腺癌联合雄激素阻断治疗的长期随访

目的:了解晚期前列腺癌联合雄激素阻断治疗的长期生存率。方法:选取1993年1月~2000年1月初采用联合雄激素阻断治疗的59例前列腺腺癌患者,其中28.81%和45.76%为临床局部晚期(T3-4 N0M0期)和转移(TxNxM+期)病例,全部随访5年以上。结果:全组病例3、5、7年的总体生存率分别是79.36%、61.46%、49.15%,其中,临床局部晚期和转移者的5年生存率分别为80.77%和32.65%,而高分化腺癌和低分化腺癌的5年生存率分别为86.21%和30%(P<0.01)。另外,PSA>30μg/L时其长期生存率有明显下降趋势。结论:采用内分泌治疗的晚期前列腺癌,病理低分化、临床分期达T3 c-4NxMx或TxNxM+期及PSA>30μg/L均提示预后较差,晚期前列腺癌病例的治疗应综合多因素,选择个体化方案。     

Co-Morbidities and Survival of Men with Localized Prostate Cancer Treated with Surgery or Radiation Therapy

Purpose

We determined the impact of preexisting co-morbidities on survival of men with clinical stages T1b and T2NXM0 prostate cancer treated with surgery or radiation therapy.

Materials and Methods

A weighted co-morbidity score was determined for 276 consecutive men treated with surgery (138) or radiation therapy (138) at a Veterans Affairs medical center and was correlated with actuarial freedom from death due to co-morbid disease.

Results

After a median potential followup of 7.0 years 91 patients (33 percent) died of co-morbid disease and 20 (7 percent) died of cancer related causes. There were highly significant correlations between actuarial survival and weighted co-morbidity (p less than 0.000001), and the 10-years actuarial survivals in men with no or severe co-morbidities were 66 and 9 percent, respectively. Associations between patient age and co-morbidity score were highly significant (p less than 0.0001). The age adjusted risk of co-mobid death was 5.7 times greater in men with severe compared to no co-morbidities. There were also significant correlations between actuarial survival and weighted co-mobidity among patients treated with surgery (p = 0.02) and radiation therapy (p = 0.0002). Patient age and severity of co-morbidities were significantly greater among men treated with radiation therapy compared to surgery, and age adjusted risk of co-morbid death among men with a co-morbidity score of 1 was 3.8 times greater among men treated with radiation therapy (p = 0.025).

Conclusions

Cancer related deaths are unusual within 5 to 10 years after surgery or radiation therapy in men with stages T1b and 2 prostate cancer. The risk of death during this interval is directly related to the severity of co-morbid conditions, which should be factored in an individual when assessing the advisability of therapeutic intervention. Since patient co-morbidities impact all cause survival, quantitative assessment of co-morbidities using validated instruments offers a method to control partially for the variabilities of health status among men receiving different treatments for localized prostate cancer.     

Circulating Prostate Specific Antigen-positive Cells Correlate with Metastatic Prostate Cancer

Summary— Analytical flow cytometry was used to study circulating prostate specific antigen (PSA)-positive cells in 40 consecutive patients with newly diagnosed, untreated prostate cancer; 25 patients (63%) had metastatic disease confirmed by a positive bone scan. Cell suspensions were prepared for each patient from both the primary tumour and peripheral blood samples. The cells were stained with a monoclonal antibody against PSA, and analysed by flow cytometry; PSA-positive cells were sorted according to their immunofluorescence and light scatter properties. The cellular deoxyribonucleic acid (DNA) content of each specimen was also analysed to establish ploidy status. PSA-positive cells were detected in the peripheral blood of 33 patients (83%). The presence of these cells in the circulation showed a higher degree of sensitivity and specificity in predicting positive bone scans than did serum PSA levels. Circulating PSA-positive cells may represent either a subpopulation of tumour cells with distinct metastatic properties or, alternatively, host immunocytes which take up PSA in an active or passive manner.     

雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TL)对前列腺癌细胞株RM-1增殖的影响,分析其抗前列腺癌细胞的作用机制。方法:MTT实验检测TL对RM-1细胞的增殖抑制;吖啶橙染色检测细胞形态学变化;FCM分析细胞周期及凋亡峰;DNA电泳分析细胞凋亡断裂带;RT-PCR检测RM-1细胞中caspase-3及bcl-2 mRNA表达。结果:MTT实验结果显示,TL(5、10、20、40、80ng/ml)处理后RM-1细胞生长抑制率分别为9.8%、25.1%、39.2%、48.8%、53.2%,以TL(10、20ng/ml)处理RM-1细胞12、24、36、48h后,细胞生长抑制率分别为8.4%、25.1%、36.1%、42.4%和10.2%、39.2%、50.2%、58.5%;经TL处理后吖啶橙染色观察发现,细胞核浓缩,细胞膜内陷、胞内有不规则橘黄色颗粒,呈凋亡样形态学改变;FCM检测显示TL(10、20ng/ml)作用RM-1细胞48h后,在G1期前出现明显的凋亡峰;TL处理RM-1细胞24、36、48h后,均可见DNA“梯形”条带;TL处理RM-1细胞caspase-3 mRNA表达高于未处理对照细胞(P<0.05),bcl-2 mRNA表达低于对照细胞(P<0.05)。结论:TL可抑制小鼠前列腺癌细胞株RM-1增殖,此作用是通过降低bcl-2、提高caspase-3表达诱导小鼠前列腺癌细胞凋亡来实现的。     

葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。方法:经预试选用不同浓度(100、200、300μg/ml)的GSE分别作用PC-3细胞24、48、72h,以原代培养的1～3日龄SD大鼠肾细胞作为正常对照;采用四唑氮蓝(MTT)显色法检测GSE对PC-3细胞和SD大鼠肾细胞的生长抑制作用。结果:GSE以浓度和时间依赖性方式抑制PC-3细胞生长(P<0.01),对原代培养SD大鼠肾细胞生长仅有轻度抑制作用。结论:GSE可抑制前列腺癌PC-3细胞生长,有可能成为治疗前列腺癌的一种新药物。     

联合多西紫杉醇治疗非激素依赖性前列腺癌临床进展

非激素依赖性前列腺癌(HIPC)是PCa发展的终末阶段,它的中位生存时间短,约9~18个月。两个大的Ⅲ期临床实验证实多西紫杉醇化疗能延长HIPC患者的生存期。新的联合治疗策略已经发展,结果很有前景,目前大多数研究均集中在联合多西紫杉醇和化疗药物(骨钙三醇)、抗血管生成药、疫苗、生物制剂等上。本文对联合多西紫杉醇治疗HIPC的新进展作一综述。     

葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞形态结构的影响

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞形态结构的影响。方法:采用相差显微镜、HE染色和透射电镜观察不同浓度(100、200、300μg/ml)GSE与PC-3细胞作用24、48和72 h后细胞形态结构的改变。结果:对照组PC-3细胞在相差显微镜下可观察到细胞呈不规则梭形爬壁生长,贴壁牢固,折光性强;HE染色后光镜下观察显示细胞呈梭形,核规整,染成均一蓝色;透射电镜观察结果显示对照组PC-3细胞有丰富的微绒毛,细胞质内线粒体完整,线粒体嵴清晰,内质网无明显扩张,胞质、胞核无水肿,核膜、质膜完整。采用不同浓度的GSE作用24~72 h后,相差显微镜下可见PC-3细胞变圆、变小,细胞膜透亮,高浓度组(300μg/ml GSE作用72 h)出现悬浮细胞,表明细胞分裂减少,生长受到抑制;光镜下见PC-3细胞核质比增大,呈多核、巨核,异染色质增多,细胞轮廓模糊。电镜显示GSE作用后PC-3细胞微绒毛结构多数消失,细胞萎缩,胞内出现大量的空泡、染色质凝集、核膜皱缩和核下出现微小空泡等坏死和凋亡的形态特征。结论:GSE可造成PC-3细胞形态结构改变,并诱导PC-3细胞凋亡与坏死,其具体作用机制有待进一步研究。