血管束植入联合细胞移植治疗兔股骨头坏死模型的实验研究

目的:探讨血管束植入联合同种异体骨髓基质干细胞移植治疗兔股骨头坏死骨缺损模型的可行性,探索治疗股骨头坏死的一种新方法.方法:36只新西兰大耳白兔随机分成A、B、C3组,每组12只,所有动物的双侧股骨头均参加实验.用液氮冷冻法造模,股骨头钻孔造成骨缺损.A组为空白对照组,B组为同种异体骨髓基质干细胞移植组,C组为同种异体骨髓基质干细胞移植联合血管束植入组.分别于术后2、4、8、12用处死3只实验动物.所获的股骨头标本分别做组织切片HE染色,进一步测算股骨头冠状截面的血管密度及新生骨小梁在骨缺损区所占的面积百分比,做统计分析.结果:C组股骨头缺损区2周时可见新生骨小梁和原始毛细血管形成,8周时新生骨小梁板层状或编织状,毛细血管丰富,12周时骨小梁变宽变粗,排列规则,可见成熟的骨小梁及新生骨髓.B、C两组股骨头冠状截面的血管密度及新生骨小梁在骨缺损区所占的面积比,2周时差异无统计学意义,4、8、12周时C组股骨头冠状截面的血管密度及新生骨小梁在骨缺损区所占的面积比均比同时期B组大.结论:体外培养的同种异体骨髓基质干细胞能在股骨头坏死骨缺损区形成新生骨小梁,可以用作异体移植.植入股骨头坏死骨缺损区的血管束可以有效改善股骨头的血运,促进新生骨小梁的形成.     

仿生脉冲磁场联合同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头坏死的实验研究

目的研究仿生脉冲磁场（BEMF）联合同种异体骨髓间充质干细胞（BMSCs）对兔早期股骨头坏死（ONFH）模型的促血管再生、骨再生的修复作用。方法取成功造模的液氮型ONFH模型24只,并随机分为4组,A组为制作模型而不填充任何材料,B组为单纯明胶海绵和PBS液填充,C组为填充复合骨髓间充质干细胞的明胶海绵,D组为填充复合骨髓间充质干细胞的明胶海绵,并予仿生脉冲磁场照射4周（2h/d）。于治疗后2、4、8周对各组股骨头进行解剖学、X线片、CT、组织切片观察及免疫组化血管染色,并进行血管计数。结果 （1）股骨头大体及CT观察：A组2周时可见典型的骨坏死;B组2周时可见明胶海绵吸收,4、8周骨坏死缺损清晰可见;C、D组：2周可见明胶海绵吸收,4周有新骨形成伴髓腔再通,8周新生骨与宿主骨界限模糊;（2）血管计数：术后4、8周C、D组新生血管计数大于A、B组（P〈0.05）,C、D两组比较,D组新生血管计数大于C组（P〈0.05）。结论 BEMF联合同种异体骨髓间充质干细胞移植可促进坏死股骨头内血管再生和骨修复作用。     

骨髓基质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究

[目的]探讨骨髓基质干细胞移植对股骨头缺血性坏死的治疗作用和修复机理，为临床应用提供依据。[方法]24只新西兰大白兔随机分为两组，A组为髓芯减压组，B组为干细胞移植组。采用液氮冷冻法造模。A组钻孔后植入空白明胶海绵，B组钻孔后植入复合有骨髓基质干细胞的明胶海绵。术后每组分别于2、4、6、8周各处死3只动物，做X线及组织学检查。[结果]（1）X线结果：2周时A、B组钻孔区均呈低密度，4周时A组钻孔边缘密度增加，B组整个钻孔区密度增加，8周时A组钻孔区均呈低密度，边缘形成硬化线，B组钻孔区形成骨小梁结构。（2）组织学结果：2周时A组钻孔区出现少许炎症细胞，边缘出现较多成骨细胞并有骨组织形成，至8周时，钻孔区内形成骨髓组织，只在边缘形成骨小梁结构。2周时B组钻孔区有大量的成骨细胞，边缘有较多骨组织形成，4周时钻孔区内充满新生骨小梁结构，8周时钻孔区内骨小梁成熟，小梁有骨髓组织填充。[结论]骨髓基质干细胞对兔股骨头缺血性坏死有良好的修复作用。     

移植骨复合骨髓基质干细胞修复兔股骨缺损

目的观察同种异体骨复合骨髓基质干细胞对兔股骨大段缺损修复情况,探讨其修复骨缺损的可行性。方法将24只大耳兔随机分为2组,造成股骨大段缺损,对照组植入打孔同种异体骨,实验组植入打孔同种异体骨＋明胶海绵＋骨髓基质干细胞。术后2个月行X线片观察、病理组织学检查及骨密度测试。结果①放射学检查：对照组在异体骨结合部可见骨痂通过,实验组整个异体骨段均可见明显骨痂形成。②病理组织学检查：对照组可见少量内骨痂及外骨痂且被大量纤维结缔组织所分隔,实验组异体骨有坏死后弧形吸收窝,可见内外骨痂生长,髓腔内充满大量骨母细胞。③平均骨密度值测定：实验组高于对照组及正常股骨,差异有显著性（P〈0．05）。结论同种异体骨复合骨髓基质干细胞用于修复兔股骨大段缺损,较单纯异体骨成骨量大、迅速,能够对骨缺损进行有效的修复。     

骨髓基质干细胞复合Ⅰ型胶原修复兔膝关节软骨缺损的研究

目的 探讨骨髓基质干细胞复合Ⅰ型胶原海绵对兔膝关节浅层大面积软骨缺损的修复作用;观察3H-TdR对骨髓基质干细胞的示踪作用.方法 骨髓基质干细胞复合组织工程支架Ⅰ型胶原海绵,植入修复兔膝关节大面积浅层软骨缺损模型,分别于术后4、12、24周取材,观察修复效果;运用3H-TdR标记骨髓基质干细胞,同法植入软骨缺损区,分别于术后4、12、16及24周取材,液体闪烁计数定量分析、乳胶封片、4周后显影定性分析.结果 实验组术后4周缺损表面未见明显的新生软骨形成;12周,缺损表面有少量的新生软骨形成;24周,缺损表面的新生软骨较4、12周的新生软骨明显,仍存在部分缺损尚未修复.对照组则均未见明显的修复.修复组织的细胞核内均有放射活性,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),提示修复组织的细胞来源为体外移植的细胞,而非自体细胞,至术后24周,植入的细胞仍然存活.结论 该方法对兔膝关节软骨缺损具有修复作用,但不能完全修复;所修复组织的细胞来源为植入的骨髓基质干细胞;3H-TdR标记对骨髓基质干细胞具有较好的长期示踪作用.     

胶原蛋白膜包裹藻酸钙凝胶/骨髓基质细胞/BMP-2复合体修复兔桡骨缺损

[目的]探讨在外源性生长因子(BMP -2)作用下,使用胶原蛋白膜包裹经体外培养扩增的骨髓基质干细胞(BMSCs)与藻酸钙凝胶形成的复合物修复骨缺损的可行性.[方法]选用成年新西兰白兔36只.手术造成两侧桡骨标准缺损后,左侧植入复合体,右侧空白对照.取自体BMSCs,经体外分离培养扩增后,与BMP -2、藻酸钙凝胶及胶原蛋白膜形成复合体修复骨缺损,于2、4、8、12周时行大体、X线片、免疫组织化学观察.[结果]整个过程中可见实验组缺损区新生骨组织增殖明显、持续时间较长,且无过量的结缔组织生长;X线早期可见连续性骨痂通过缺损区,分布均匀;免疫组织化学可见多个成骨中心,骨小梁排列有序,成熟骨替代完全,BMP分布持续时间长,且在新骨组织中分布范围大.[结论]复合体能修复骨缺损,并且能够阻挡周围软组织进入缺损区,为新骨生长提供空间;同时作为BMP的载体,能减少外溢,提高其疗效.     

骨髓基质细胞体内成骨分化研究

目的探讨将自体骨髓基质干细胞（BMSCs）移植到股骨头缺损坏死部位后能否成活、增殖,并向成骨分化,促进骨修复。方法取狗犬髂骨骨髓,体外培养扩增BMSCs,经5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记,移植到股骨头骨缺损模型。术后5周取材。行大体组织观察,组织化学染色,免疫组化检测骨钙素、骨桥素。结果BMSCs能增加骨缺损区内的成骨量、提高骨基质矿化的程度和骨成熟度,提高成骨细胞分化特异性标记物骨钙素、骨桥素的表达。新骨形成越活跃的地方,BrdU阳性细胞数目越多,很多成骨细胞BrdU阳性,新骨形成区的很多血管壁也分布着BrdU阳性细胞。结论移植的骨髓细胞在股骨头内能成活,并能停留在骨坏死、缺损部位生长增殖。移植的BMSCs能分化成为多种细胞,包括成骨细胞、血管壁细胞等。BMSCs不但能直接通过分化成成骨细胞参与成骨,也能通过参与血管形成而促进成骨。     

自体和异体骨髓间充质干细胞移植对家兔股骨头缺血性坏死治疗作用的比较研究

目的 比较同种异体和自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植,对实验性家兔股骨头缺血性坏死的治疗作用;为建立BMSCs库及临床应用,提供实验证据.方法 采用新西兰大白兔液氮冷冻法造模,随机分为对照组(A),髓芯减压组(B),自体细胞移植组(C)和同种异体细胞移植组(D);对术后2、4、6、8周的标本,进行X线和组织学观察.结果 (1)X线检查显示:2周时,A组股骨头标本呈高密度,随时间延长,骨密度进一步增加,并出现骨小梁结构的紊乱和囊性变,8周时变化最为显著.2周时,在B、C、D组股骨头钻孔区的边缘,出现密度增加;8周时,在B组股骨头钻孔区的周围,形成硬化线.在C、D组钻孔区,出现骨小梁结构.(2)组织学观察表明:液氮冷冻后,A组股骨头标本出现骨坏死和修复的病理变化.8周时B组钻孔区修复不完全.2周时C、D组钻孔区,均有大量移植的BMSCs存在;4周时两组钻孔区内,充满了新生骨小梁结构;在8周时钻孔区内,骨小梁趋于成熟.而且,C、D两组间骨小梁面积的图像分析,其差异无统计学意义.结论 同种异体和自体:BMSCs移植,对实验性家兔股骨头缺血性坏死的治疗,呈现相似的结果:建立BMSCs库供临床应用,具有较大的可行性.     

雷洛昔芬对骨质疏松大鼠颅骨缺损修复的影响

目的探讨雷洛昔芬对骨质疏松大鼠骨缺损修复的影响。方法建立骨质疏松大鼠实验性模型,并应用该骨质疏松大鼠建立颅骨缺损模型,采用异体骨髓基质干细胞复合生物材料修复颅骨缺损,观察雷洛昔芬对骨缺损修复的影响。结果实验组见大片新生骨形成,新生骨可见大量的骨小梁,对照组见岛状骨性基质分布在大量纤维结缔样组织中,成骨面积和密度均较实验组低。结论雷洛昔芬可有效改善骨质疏松大鼠的骨缺损修复能力。     

Cad—Ⅱ基因转染的兔骨髓间充质干细胞自体移植术后的表达研究

[目的] 研究Cad-Ⅱ基因转染的骨髓间充质干细胞在骨缺损局部移植后Cad-Ⅱ基因的表达变化.[方法] 20只日本长耳白兔制作双侧髂骨缺损模型,将体外培养扩增的自体骨髓干细胞经脂质体介导转染Cad-Ⅱ基因,再与胶原海绵复合移植于髂骨缺损处,术后4周取材,RT-PCR和免疫组化方法检测Cad-Ⅱ基因的表达.[结果] 术后4周各组骨缺损区已有新骨生成,Cad-Ⅱ基因转染移植组和对照组均检测到Cad-ⅡmRNA的表达,但转染组Cad-Ⅱ mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.01).免疫组织化学染色结果显示,与对照组比较转染移植各组Cad-Ⅱ阳性细胞数量也显著增多(P＜0.01).[结论] 转染了 Cad-Ⅱ基因的骨髓间充质干细胞使骨缺损区Cad-Ⅱ基因的表达增高.     

跖骨感染骨外露的显微外科治疗

[目的]回顾总结跖骨骨感染骨外露的显微外科治疗方法。[方法]自1995年～2005年采用显微外科技术治疗214例跖骨骨外露骨感染患者。[结果]全部病例获得随访1～10年，平均随访3年，14例游离植皮术后皮肤成活良好，199例术后皮瓣全部成活，1例腓肠神经营养血管皮瓣移位修复术出现远端部分皮肤坏死，后经换药处理后，伤口自然愈合。皮瓣移植术后质地良好，无溃疡复发。患足均可负重走路。[结论]应用显微外科技术治疗跖骨骨感染骨外露可获得较好的疗效。     

Genetic regulation of bone mass: from bone density to bone strength

Osteoporosis is a common disease characterized in adults by diminished bone density. Bone is an organ that evolves and grows throughout life, and establishing optimal bone density in childhood and adolescence serves to buffer bone loss later in life. Bone density, a measurable entity, is the clinical substitute for bone strength, or the ability to defend against fracture. Chronic diseases may adversely affect optimal peak bone density. Bone density is under genetic control, as revealed by three lines of investigations. These include (1) the finding of quantitative trait loci for bone density, (2) the finding that specific mutations in genes that are important in the development of osteoblast or osteoclast lineages alter bone density, and (3) the linkeage of known polymorphisms for genes involved in mineral homeostasis to bone density and/or fracture. Future therapeutics for improving peak bone density or delaying bone loss later in life may take advantage of the genetic nature of bone density development.This work was presented in part at the IPNA Seventh Symposium on Growth and Development in Children with Chronic Kidney Disease: The Molecular Basis of Skeletal Growth, 1–3 April 2004, Heidelberg, Germany     

重组合异种骨植骨修复骨囊肿所致骨缺损

2001年10月～2003年9月,笔者共收治28例骨囊肿患者,均采用病灶刮除,瘤腔灭活和重组合异种骨植骨治疗,获得满意疗效,体会如下。     

复合人工骨修复骨良性病变切除后骨缺损

目的探讨骨良性病变切除后骨缺损的修复方法，并对其疗效进行评估。方法总结1999年1月-2003年10月我科应用混合自体骨松质的异体脱蛋白骨松质复合自体红骨髓治疗骨良性病变切除后骨缺损28例。年龄12—61岁，平均20，5岁。结果除2例因死亡失访外，其余26例均取得满意随访，平均骨愈合时间为4．2个月。骨腔大小或植骨量不同，骨愈合时间不同。骨腔越大，植骨越多，骨愈合时间越长。本组病例未见明显排斥反应及并发感染。随访至今，无一例复发。结论利用这种复合人工骨修复骨良性病变切除后骨缺损的方法可行性好，安全性高，自体损伤小，便于推广，可用于骨缺损的修复。     

从骨免疫学到骨微生物学：肠道微生物如何调节骨骼

肠道微生物群被称为人体的第二个基因库,在维持人体平衡中起主要作用。不良饮食习惯、抗生素滥用、病理状态和生活环境改变会对肠道菌群产生负面影响,以引起多种疾病。最新研究发现肠道微生物群与骨质疏松症之间有着密切的联系,同时引入了一个新术语"骨微生物学",该研究领域旨在弥合骨骼生理学、胃肠病学、免疫学和微生物学之间的差距。本文简要介绍了肠道菌群通过免疫系统、新陈代谢和内分泌环境以及其他因素影响骨代谢的潜在机制,通过研究肠道菌群与骨骼健康之间的关系,不仅对于维持骨骼健康和最大程度地减少骨质疏松症很重要,而且对于肠道微生物群是否可作为骨质疏松症新型治疗靶标以及是否可用作骨折预测的生物标志物方面具有重要意义。     

Assessment of bone density and bone loss

Osteoporosis International - Dual-energy X-ray absorptiometry has become the standard for the evaluation of osteoporosis. It is useful both for identifying those people who are going to be at risk...     

Aneurysmal bone cyst of the occipital bone

A 13 years boy presented with a painless hard and fixed swelling in occipital region for the last three months. Plain X-ray, CT scan and MRI showed an expansile multi loculated cystic lesion in occipital bone. Histopathological examination revealed it to be an aneurysmal bone cyst. Treatment of choice is surgery. However, radiotherapy may be helpful in incompletely excised lesions.     

Development of bone canaliculi during bone repair

We recently found that silver impregnation staining with protargol (silver protein), that is, a modified Bodian method, is useful for histologically identifying the details of bone canaliculi structure, using thin sections of decalcified bone tissues. With this staining method, we conducted the present study to assess the development of bone canaliculi during the process of intramembranous ossification using a fracture-like stimulation model of the rat femur. After making a drill-hole in the cortex of the rat femur, decalcified thin sections were obtained after 3, 5, 7, and 14 days by the standard paraffin-embedding procedure. Silver staining for bone canaliculi was performed using our previously reported technique. The results showed that woven bone covered the fracture surface of the cortex after 5 days, then immature lamellar bone attached to the woven bone after 7 days, and finally the lamellar bone matured and became thick with appositional growth after 14 days. The osteocytes in the woven bone appeared at an early stage of bone repair and developed a few canaliculi that were short and irregularly distributed in the osteoid matrix, while the osteocytes in the lamellar bone at a late stage formed many bone canaliculi that were long and regularly distributed in mature bone matrix. Therefore, we concluded that woven bone osteocytes may be necessary for induction of the lamellar bone osteocytes followed by active appositional growth of the lamellar bone at the early stage of bone repair, and also that both bone tissues could be clearly distinguished from one another based on the pattern of development of bone canaliculi by the osteocytes, as seen with the use of our sensitive staining method.