孕妇外周血中胎儿细胞及DNA分离方法的比较

产前非创伤性诊断技术是国内外围生学关注的重要课题。近 10年来 ,由于相关分子生物学、流式细胞学技术的进展 ,人类对研究母亲外周血中胎儿细胞的工作迈进了一大步。但由于母血中胎儿细胞甚微 ,分离及纯化胎儿细胞的技术难点尚未解决 ,使该技术还无法在临床上广泛应用。本研究旨在探索可靠稳定的分离胎儿细胞和ＤＮＡ的方法 ,为产前诊断奠定基础。一、材料和方法1.材料来源 :(1)研究对象 :选择 1997年 10月至 1999年6月在武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科进行产前检查的健康孕妇 15 3例。年龄 2 1～ 35岁 ,孕 5～ 41周 ,血红…     

显微操作分离ε-血红蛋白阳性的胎儿细胞用于产前诊断

近年来高龄妊娠妇女呈增长趋势.高龄妊娠妇女胎儿染色体畸变的可能性较大,需要做产前遗传学诊断.羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐静脉穿刺是传统的创伤性产前诊断方法,许多妇女不愿意接受.现在的非创伤性检查方法包括超声检查和血清学筛查,对发现胎儿非整倍体特异性低,因此从母体外周血中分离胎儿细胞作为非创伤性产前诊断方法就引起了关注.母体外周血中存在各种胎儿细胞,包括胎儿有核红细胞(NRBC)、胎儿滋养细胞和胎儿白细胞等,NRBC被认为是用于研究的最佳靶细胞.     

应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少，Hahn，Holzgreve和Bianchi等报道，孕妇每毫升外周血中仅有1～2个完整胎儿细胞。所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记，并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术，是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的最佳手段。但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体，故不同学者选用的标记性抗体也有所不同。本研究采用荧光激活细胞分离技术（fluorescence-activated cell sorting，FACS），通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体（transferrin receptor，CD71）单标记染色和胎儿血红蛋白（fetal haemoglobin，HbF）单标记染色与双标记染色情况的比较，探讨CD71与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值。