异体脱钙骨基质复合bBMP修复兔桡骨骨缺损

目的：探讨异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损的能力。方法：64只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为4组，A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized Bone Matrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料，B组植入异体DBIM，C组植入异体骨粒，D组为空白对照组。术后4、8、12、16w，进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图像分析新生骨面积。结果：异体DBM与bBMP复合材料组骨生成、新骨面积和骨连接情况明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组。结论：异体DBM复合BMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损，是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料。     

异体骨基质明胶颗粒骨水泥复合牛骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损

目的：探讨异体肌基质明胶颗粒、骨水泥作为bＢＭＰ载体及释放系统修复兔桡骨缺损的成 骨能力。方法：复合材料及自体骨分别移植于成年新西兰兔桡肌基准大小骨制损,术后不同时期进行Ｘ线、组织形态学ＥＣＴ,扫描电镜观察,比较复合材料修复骨制损的方式及能力。结果：复合材料修复成年新西兰兔桡骨基准大小骨制损;复合材料和新鲜自体骨移植相比,修复程度及愈合过程及成骨方式相同。结论：异体骨基质明胶颗粒、骨水泥是bＢＭＰ的     

同种异体骨脱钙骨基质联合BMP修复兔桡骨骨缺损的实验研究

目的：探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨泥复合骨形态发生蛋白（BMP）修复家兔桡骨节段性骨缺损的作用。方法：日本大耳白兔54只,雌雄不限,随机分为3组,A组：空白组（缺损区不植入任何材料）,B组：对照组（缺损区植入金世植骨灵）,C组：实验组（缺损区植入DBM骨泥）。建立家兔单侧桡骨骨缺损模型,采用同种异体骨DBM骨泥复合BMP进行修复,复合骨泥中加入骨胶原作为塑形剂,术后4、8、12周观察新骨生成情况,通过形态学、X线、组织学及计算机图像分析等观察指标,并与对照组及空白组进行比较,客观评价骨泥诱导成骨及骨缺损修复能力。结果：DBM与BMP复合骨泥易根据骨缺损大小塑形,术中操作简单。术后A组骨缺损未获骨性修复,B、C组骨缺损均获得骨性愈合,且新骨面积测定显示B、C组间成骨速度无明显差异（P〉0．05）,比A组快（P〈O．01）。结论：异体DBM骨泥复合BMP具有良好的骨修复作用。     

牛骨形态发生蛋白复合煅烧骨治疗缺损的实验研究

目的：验证从牛皮质骨中提取的骨形态发生蛋白（bBMP)的异位诱导成骨能力,探讨煅桡骨（SB）作为某载体对骨缺损的治疗作用。方法：（1）将bBMP植入16只balb/c小鼠肌袋内,每周宰杀4只行细胞学检查,连续4周,（2）16只新西兰大白兔手术造成双侧桡骨1cm缺损,分别植入bBMP-SB和SB进行自身对照,分批宰杀后行X－线照片和组织学检查,结果：植入肌袋内的bBMP术后一周即可诱导软骨细胞形成,2周时可见编织骨,4周时可见小梁骨及骨髓成形,而骨缺损实验中,bBMP-SB组在软骨诱导,小梁骨的形成数量,骨折愈合等方面均明显优于单纯SB组,结论：（1）bBMP有强大的异位诱导成骨能力;（2）bBMP-SB复合骨可促进骨缺损愈合。     

牦牛骨形态发生蛋白及其与陶瓷化异种骨复合修复兔桡骨缺损的实验研究

本实验采用yBMP和yBMP/CBB材料,修复1.5cm长的兔桡骨缺损。分yBMP和yBMP/CBB二个实验组。材料植入20天,缺损区均分别生成多量软骨及交织骨。40天,大量交织骨生成,其间出现骨髓组织。60天,板层骨增多。80天,板层骨进一步成熟,骨缺损修复。与之对照,空白组各期仅见两端形成交织骨。这表明:yBMP及yBMP/CBB对骨缺损的修复作用非常显著。     

骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质修复兔膝关节全层软骨缺损的实验

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)复合脱钙骨基质(deminerized bone matrix, DBM)修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效. 方法:MSCs取自4～6 mo龄2.5～3.5 kg的青紫兰兔,体外分离培养后种植于DBM支架上体外培养,再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处. 实验动物选用健康的青紫兰兔36只,随机分成A, B, C 3个处理组各12只,A处理组(MSCs/DBM)双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入DBM吸附体外分离培养的自体MSCs复合物;B处理组(DBM)单纯植入DBM;C处理组(对照)不作任何植入. 分别于术后4, 8和12 wk各处死4只兔子,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS 10.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义. 结果:MSCs复合DBM所修复组织为透明软骨样修复;而单纯DBM移植组和对照组为纤维性修复. 对术后12 wk大体及组织学形态进行评分. 按完全随机设计进行方差分析和SNK-q检验,结果显示,SMCs/DBM组明显优于DBM植入组和对照组(P<0.05);DBM组优于对照组(P<0.05). 结论:运用软骨组织工程的原理,以DBM为支架材料的自体MSCs移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法.     

异体脱钙骨基质骨粒骨水泥骨形态发生蛋白复合材料的成骨诱导活性

目的：探讨异体脱钙骨基质（ＤＢＭ）骨粒、骨水泥（ＢＣ）及重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）复合骨制损修复材料成骨诱导活性。方法：小鼠股部股袋内植入复合材料,不同时间分别取材ＨＥ染色观察复合骨制损修复材料的异位诱导成骨活笥;检测不同复合质量比的复合材料的聚合温度。结果：第７日时材料外周即形成间充质组织包膜,并沿材料不规则裂隙向植入材料内部长入间充质组织。第１４日间充质组织继续大量长入且逐渐深     

脱钙骨基质骨粒骨水泥复合自体红骨髓修复犬股骨缺损的实验研究

目的　探讨异体脱钙骨基质骨粒 (DBM)、骨水泥 (BC)、自体红骨髓 (RM)复合移植修复犬股骨骨缺损的疗效。方法　 30只家犬双侧股骨做成长×宽为 2 5mm× 10mm的骨缺损 ,将犬的自体红骨髓与异体DBM复合后再与BC混合成复合材料 ,植入犬的右侧股骨骨缺损处 ,左侧单纯植入骨水泥做对照。术后不同时期进行X线、组织形态学及生物力学研究。结果　X线观察 :骨缺损部位 1个月开始形成骨痂 ,3个月骨痂最丰富 ,6个月时复合材料与宿主骨边缘模糊。组织学观察 :3个月时复合材料内部有新生骨形成 ,6个月时边缘部分的DBM被新生骨替代 ,并与宿主骨融合。生物力学测定 :骨缺损部位的生物力学强度 3个月和 6个月分别接近正常骨的 60 %和80 %。结论　DBM、RM、BC复合材料极易塑形 ,具有明显的促进骨缺损修复作用 ,能用于修复各种形态的骨缺损并能满足早期负重的需要。     

脱钙骨基质支架构建组织工程骨的实验研究

目的以同种异体骨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)为支架材料,复合体外诱导培养的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),构建组织工程骨并通过裸鼠皮下异位成骨实验及裸鼠皮下致瘤性实验验证其成骨效果及安全性.方法贴壁法培养hMSCs,体外诱导培养扩增,以1.857×106/ml的密度与DBM复合构建组织工程骨,体外培养,并在扫描电镜下观察细胞与材料复合情况,进行组织学观察.同时进行了裸鼠皮下异位成骨实验.结果细胞与支架复合后3 d,细胞与DBM表面及孔隙可实现良好复合;复合后5 d,扫描电镜观察到细胞基质分泌旺盛,充满支架孔隙.裸鼠皮下成骨实验证明其成骨效果良好.结论以本实验中使用的细胞培养方法扩增、诱导分化的种子细胞生物安全性好,自制的DBM具有良好的生物相容性,可为种子细胞生长提供较好的三维空间,按照标准化工艺流程制备的组织工程骨安全、有效.     

去抗原牛松质骨块/bBMP复合材料修复兔长骨骨缺损

探讨大块异种骨的制备及其在修复节段性骨缺损中的作用。方法将大块的牛松质骨制备成消除抗原性的载体,与牛骨形态发性蛋白（ＢＭＰ）组合构成去抗原牛松质骨块／ｂＢＭＰ复合材料,采用兔桡骨１５ｍｍ节段性骨缺损模型,研究去抗原质骨块／ｂＢＭＰ复合材料在修复骨缺损中的作用。     

脱钙骨基质为骨组织工程支架修复骨缺损实验研究

目的：利用骨组织工程原理对节段性骨缺损进行修复,探讨脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）在骨组织工程中的应用。方法：从兔股骨分离骨髓间质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,经体外诱导分化、条件培养、5-溴-2′-dexyouridine,5-BrdU）标记后,接种到兔海绵状脱钙骨基质（sponge of DBM ,SDBM）支架上,然后分别植入兔背部肌肉内及兔桡骨中段10mm长的骨膜骨缺损内。对照组为缺损内单纯植入SDBM及空白组。术后观察6周。结果：经条件培养的BMSCs可在体外表达Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶,并形成钙结节;体内异位植入组织工程骨块可形成软骨及骨组织;组织工程骨块及单纯SDBM在术后6周完全修复骨缺损（6/6）;极限压缩强度测量显示,组织工程骨块植入组新生骨与正常桡骨段差异无显著性（P=0.623）,单纯SDBM植入组新生骨在生物力学方面低于正常桡骨段（P=0.038）。结论：脱钙骨基质在骨组织工程中是一种有效的生物活性支架材料。     

接种浓度对人骨髓基质干细胞在脱钙骨上生长和分布的影响

目的 研究不同接种浓度对人骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上生长过程及分布的影响。方法 荧光活性染料DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨支架材料上,测定细胞的粘附率;将细胞悬液浓度分别调整为20×106、10×106、5×106/mL和空白组,依次接种于同一块脱钙骨支架4个相邻象限的中心位置上。接种后第2、7 d在倒置荧光显微镜下观察材料表面的细胞分布、生长的情况,测量细胞材料面积比。结果 DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)％,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)％,两者无统计学差异(P>0.05)。不同浓度细胞的细胞材料面积比无差异(P>0.05)。结论 通过DiI标记可以动态观察细胞在材料上的生长状况。20×106、10×106、5×106/mL接种浓度均能达到覆盖脱钙骨表面直接接种部位的目的。     

骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质修复关节软骨全层缺损

目的:探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)与软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质(DBM)修复关节软骨缺损的可行性,评价修复效果,为优化种子细胞源提供依据.方法:取浓度为5×109/L的第二代BMSCs和软骨细胞,按2:1比例混匀共培养作为种子细胞.DBM与共培养细胞复合植入修复为实验组(A组),单纯材料DBM组(B组)和不处理组(C组)作为实验对照组.移植8和16 wk后经大体观察、组织学评分和免疫组化染色评价缺损修复.结果:共培养的软骨细胞基质合成丰富,细胞增殖快,共培养5～7 d两种细胞比例达1:1以上.A组缺损修复组织呈软骨样,表面光滑平坦,与周围软骨整合的软骨细胞更为成熟.B组和C组的修复组织呈纤维组织.组织学评分表明A组优于B,C两组,差异具有统计学意义(P＜0.01),B组与C组差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组化染色显示A组修复组织的细胞为透明软骨样细胞,柱状排列,Ⅱ型胶原染色阳性,与周围软骨及软骨下骨整合良好.结论:自体BMSCs与软骨细胞共培养,BMSCs能增强软骨细胞的增殖,促进软骨细胞基质合成,缩短软骨细胞培养时间和减少传代次数,可节省大量的软骨细胞,与DBM复合后能有效修复关节软骨缺损.     

复合PRP的可注射型组织工程骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的以自体富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）、骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）和纤维蛋白胶构建可注射型组织工程骨并探讨其修复骨缺损的效果。方法36只新西兰兔分为A、B、C3组,每组12只。A、B组动物术前4h抽取耳背中央动脉血提取PRP。A组于术前1-2个月抽取双髂骨处骨髓并培养出BMSCs,在体外与纤维蛋白胶（FG）及自体PRP构建成可注型组织工程骨,植入自体桡骨1.5cm节段性骨缺损,为实验组。B、C两组分别植入PRP＋FG、FG于同样骨缺损处为对照组。另取4只桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组。术后观察其一般情况并于4、8、12周取材做组织学切片,术后12周取尺桡骨做生物力学测试。分别从组织学观察、生物力学方面评估比较骨缺损的修复情况。结果组织学观察见A、B组各时间点新骨形成均优于C组。生物力学比较：12周时A组桡骨生物力学强度与正常桡骨比较无明显差异（P〉0.05）,但其明显优于B组（P〈0.05）。结论PRP对骨缺损愈合有明显促进作用,复合PRP的可注射型骨修复材料及构建的含种子细胞的组织工程骨均可修复节段性骨缺损,但种子细胞的添加可明显促进新骨成熟度和增强其生物力学性能。     

骨膜移植修复骨缺损过程中微血管的重建

目的：探讨骨膜移植修复骨缺损过程中微血管的重建。方法：实验用家兔为２０只,２只用于正常桡骨血管观察,另１８只制成骨缺损模型后植入自本骨膜碎牒主后第３,５,７ｄ和第２,４,８,１２周取材,观察微血管的重建。：结果骨缺损复过程中新生血管依次经过下列变化,形成血管芽→毛刷状血管→毛刷状血管→树枝状血管→无血管软骨组织→串珠状血管→海绵状血管→网状血管。结论：新生血管在骨膜碎片移植修复骨缺损过程中的不同阶