髓系触发受体-1在脆弱类杆菌诱导小鼠脓毒血症中的作用

目的 探讨小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体(Lentivector,LV)TREM-1 vshRNA对脆弱杆菌脓毒血症小鼠脾脏中促炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达及NF-κB通路的影响.方法 将清洁级BALB/c雄性小鼠分成4组,即正常对照组(C组),脆弱类杆菌脓毒症模型生理盐水组(S组),TREM-1 vshRNA干扰实验组(T组)和GFPvshRNA干扰实验组(G组).观察各组中小鼠脾内TREM-1,TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达以及IkBa,pDAP12,NF-κB p65的表达情况的变化.结果 与C组比,T组TREM-1 mRNA及蛋白表达均有显著增加(P＜0.01);T,G,S组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较C组显著增加(P＜0.01);T组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较S,G组明显降低(P＜0.01).S组脾细胞中的pDAPl2和核内NF-κB p65蛋白表达水平明显增强,IκBa蛋白表达水平降低;而T组与S组比较,pDAP12和NF-κB p65蛋白的表达水平显著下调.结论 小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体可选择性抑制TREM-1表达,下调脆弱类杆菌诱导的促炎症因子的分泌,而转染可能是通过下调DAPl2的表达,稳定IkBa/NF-κB复合物,抑制TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8基因的转录,而对脆弱类杆菌脂多糖炎症反应产生抑制作用.     

肾病综合征氧化低密度脂蛋白脂质肾损伤的实验研究

目的 通过观察氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）对系膜细胞（Mesangial Cells,MCs）分泌炎症介质功能的影响及MAPK信号通路和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）活性的改变,进一步阐明脂质在肾损伤中的作用机制.方法 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖,分别采用ELISA、real-time PCR、western blot技术检测MCs炎症介质、MAPK通路相关蛋白（p38、JNK、ERK）及NF-κB的表达水平.结果 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,其表面炎症因子[CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、干扰素（IFN）、白细胞介素（IL6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）]的表达水平以及MAPK信号通路（p38、JNK、ERK）、NF-κB的磷酸化水平显著升高（P〈0.01）.结论 ox-LDL可促使系膜细胞释放CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、IFN、IL6、TNF-α等炎症介质,CXCR6可介导这一途径.ox-LDL激活MAPK信号转导通路,使p38、ERK1/2、SAPK/JNK的磷酸化水平升高,激活了NF-κB p65的活性,CXCR6-CXCL16介导MAPK信号途径.     

金黄色葡萄球菌肽聚糖促进破骨细胞分化的分子机制研究

目的探讨金黄色葡萄球菌肽聚糖(Staphylococcal peptidoglycan,PGN-sa)促进破骨细胞分化的分子机制。方法 Western blot检测:取Raw264.7细胞,以PGN-sa或SC75741(NF-κB激活的强效抑制剂)+PGNsa分别作用0、1、2、3 d,检测活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)蛋白表达;分别作用0、5、10、20、40、60 min,检测破骨细胞分化信号通路相关蛋白[细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB-α)、Akt及磷酸化蛋白p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt、p-NF-κB]表达。ELISA检测:取Raw264.7细胞分为4组,分别以100(A组)、200(B组)、400 ng/m L PGN-sa(C组)及PBS(D组)作用1、2、3 d,检测TNF-α、IL-1α及IL-6的蛋白表达量。结果 Western blot检测:随培养时间延长,NFATc1蛋白表达量呈逐渐增加趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05);但加入SC75741后,NFATc1蛋白表达在2、3 d明显受到抑制,与未加入SC75741前比较差异有统计学意义(P0.001)。PGN-sa刺激后5、10 min时IκB-α蛋白表达量明显降低,p-NF-κB蛋白表达量明显增高,均于20 min后恢复正常,5、10 min时蛋白表达量与其余时间点比较差异均有统计学意义(P0.001),且5 min时p-NF-κB蛋白表达量高于10 min时(P0.001)。加入SC75741后,IκB-α及p-NF-κB的蛋白表达量无变化,各时间点间比较差异均无统计学意义(P0.05)。其他蛋白(ERK、p38、JNK、NF-κB、Akt及p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt)表达量在各时间点均无明显变化(P0.05)。ELISA检测:各时间点A~D组TNF-α及IL-1α均未见表达。各组IL-6的表达随时间延长呈递增趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05)。培养1 d时,各组间比较IL-6蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);2、3 d时,A、B、C组IL-6蛋白表达显著高于D组,A、B、C组间呈递增趋势,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PGN-sa通过NF-κB信号通路促进破骨细胞的分化形成,IL-6在这一过程中可能起一定作用。     

抑制核因子κ B活化对高脂饮食大鼠主动脉内皮细胞的保护作用

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对高脂饮食模型大鼠主动脉内皮细胞的影响并探讨其机制。方法 SD大鼠18只随机分为高脂对照组、PDTC干预高脂组、空白对照组。12周后取主动脉行电镜检查,以电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测核因子κB(NF-κB)活性,放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,酶联免疫吸附实验测量可溶性血栓调节蛋白(sTM)水平。结果高脂对照组的血管内皮细胞存在明显的崩解现象,而PDTC干预组损伤轻微。PDTC干预高脂组sTM水平显著高于空白对照组,低于高脂对照组(P0.05)。与空白对照组相比,高脂对照组主动脉NF-κB活性、血清TNF-α和IL-6水平显著升高,PDTC干预高脂组也有升高但明显低于高脂对照组(P0.05)。NF-κB活性与TNF-α、IL-6、sTM水平呈正相关(P0.05)。结论 PDTC可以通过抑制高脂饮食模型大鼠的主动脉中NF-κB的活化、减轻过度的炎症反应而发挥保护内皮细胞的作用。     

NF-κB诱骗寡核苷酸对内毒素性肝损伤的保护作用和机制

目的探讨NF-κB诱骗寡脱氧核苷酸对大鼠内毒素性肝损伤的保护作用及其机制。方法60只SD大鼠随机分为对照组、内毒素(LPS)组、诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)处理组。取各组大鼠肝组织检测NF-κB蛋白结合活性(EMSA),观察组织病理学改变(光镜)及肝细胞凋亡(TUNEL)。取静脉血检测AST(自动生化仪)以及TNF-α,IL-6的表达水平(ELISA)。结果与对照组相比,内毒素组NF-κB活性明显升高,诱发大量肝细胞凋亡,肝脏损伤明显;同时血清AST,TNF-α及IL-6明显升高(P0.01)。与内毒素组相比,NF-κB诱骗寡核苷酸处理组NF-κB活性受抑制(P0.01)、肝脏组织病理学改变和肝细胞凋亡明显减轻,血清中TNF-α和AST表达水平降低(P0.01),但IL-6表达与内毒素组差异无统计学意义(P0.05)。结论NF-κB诱骗策略能高效抑制NF-κB的活性,抑制其下游有害细胞因子的产生,从而减轻内毒素性肝损伤。     

IL-6抑制剂对种植体周围炎小鼠模型的疗效及其作用机制探讨

目的：探讨IL-6抑制剂对种植体周围炎小鼠模型的疗效及其作用机制。方法：选取4周龄雄性小鼠(C57BL/6J)15只,实验总共分为三组(每组5只)：对照组(植入种植体,但未进行结扎诱导)、模型组(结扎诱导,构建种植体周围炎小鼠模型)和抑制剂组(结扎诱导+腹腔注射IL-6抑制剂)。使用微计算机断层扫描(Micro-CT)检测种植体周围骨丢失,苏木精和伊红(HE)染色检测种植体周围牙龈组织的炎症浸润,使用RT-qPCR检测牙龈组织中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA相对表达量,使用Western blot法检测牙龈组织中NF-κB通路相关蛋白p-P65和p-IκBα蛋白表达水平。结果：Micro-CT结果显示IL-6抑制剂可减少种植体周围炎的骨丧失。HE结果显示IL-6抑制剂处理后,小鼠炎症浸润显著减少。RT-qPCR和Western blot结果显示,IL-6抑制剂可显著降低牙龈组织中IL-6、TNF-α mRNA相对表达量以及p-P65和p-IκBα的蛋白表达水平。结论：IL-6抑制剂可抑制种植体周围炎的骨丧失和炎症浸润,这些治疗效果可能与抑制TNF-α的...     

慢性胰腺炎大鼠肝组织NF—κB的表达及中药的干预作用

目的:研究实验性慢性胰腺炎大鼠肝组织核转录因子(NF-κB)的表达以及药物的干预作用。方法:建立慢性胰腺炎大鼠模型,Western印迹法检测各组大鼠肝组织NF-κB蛋白的表达,应用放免法检测血清IL-6、TNF-α的水平。结果:慢性胰腺炎模型组大鼠肝组织NF-κB蛋白的表达较对照组明显升高(P<0.05),且血清细胞因子IL-6、TNF-α含量增加。大承气颗粒治疗组及丹参治疗组NF-κB的表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论:慢性胰腺炎导致大鼠肝组织NF-κB蛋白的表达升高,大承气颗粒及丹参对NF-κB蛋白的表达有明显的抑制作用。     

核因子-κB在癌性恶病质形成中的作用

目的研究核因子(NF)-κB和促炎细胞因子在癌性恶病质形成中的作用以及吲哚美辛(IND)对其调控作用.方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为5组A组为对照组,B组为荷瘤加生理盐水组,C组为荷瘤加IND(0.25 mg/kg)组,D组为荷瘤加IND (0.5 mg/kg)组;E组为荷瘤加 IND (2.0 mg/kg)组.利用鼠结肠腺癌26细胞株皮下接种诱导癌性恶病质.恶病质出现后,皮下分别给予生理盐水以及不同剂量IND.1周后检测动物血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)浓度和脾脏中NF-κB活性.整个实验过程中跟踪监测动物体重以及腓肠肌重量改变.结果所有接种动物均出现恶病质,食物摄入量组间无明显差异.第16天B组体重为A组的82.0% (P<0.01),腓肠肌重量下降了28.7% (P<0.01),血清TNF-α和IL-6浓度显著升高(P<0.01).0.5 mg/kg的IND腓肠肌重量显著增加(P<0.01),血清TNF-α(P<0.05)和IL-6水平降低(P<0.01).凝胶电泳迁移率分析显示B组小鼠脾脏NF-κB活性较A组显著增加(P<0.01), IND降低NF-κB活性,在0.5 mg/kg剂量组最为显著(P<0.01).且脾脏NF-κB活性与细胞因子浓度呈正线性相关(rTNF-α=0.918, PTNF-α=0.028;rIL-6=0.884, PIL-6=0.046).结论癌性恶病质的产生与受NF-κB调控的细胞因子TNF-α和IL-6水平相关.IND可以降低NF-κB活性和细胞因子水平,缓解恶病质症状.     

芪归益肾方通过调控TLR4相关信号通路对急性肾损伤的保护作用

目的:探讨芪归益肾方通过调控TLR4相关信号通路对急性肾损伤的影响及机制。方法:小鼠右侧肾切除、左侧肾动脉夹闭25 min后恢复动脉血流引起肾缺血再灌注损伤。18只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组,芪归益肾方组(50 g/kg)。术后24 h内留取小鼠血清以及肾组织标本。HE染色观察肾小管间质损伤情况,western blot检测TLR4、NF-κB以及c-Jun表达。RT-PCR检测IL-6、TNF-α的mRNA水平。结果:模型组和芪归益肾方组小鼠血清肌酐明显高于假手术组(P 0.05),芪归益肾方组血肌酐值低于模型组(P 0.05)。HE染色显示假手术组肾组织结构正常;模型组及芪归益肾方组出现肾小管上皮细胞肿胀变形、肾间质炎症细胞浸润以及充血,芪归益肾方组病理损伤较模型组减轻(P 0.05)。模型组与芪归益肾方组TLR4、NF-κB及c-Jun蛋白水平表达较假手术组有显著升高(P 0.05),芪归益肾方组TLR、NF-κB、c-Jun蛋白水平较模型组下降(P 0.05); RT-PCR结果显示模型组与芪归益肾方组肾组织炎症因子的mRNA水平较假手术组升高(P 0.05),芪归益肾方组炎症因子表达水平较模型组下降(P 0.05)。结论:在缺血再灌注引起的急性肾损伤小鼠模型中,芪归益肾方可通过调控TLR4的表达抑制下游NF-κB及JNK炎症相关信号通路,从而减少肾组织TNF-α及IL-1等炎症介质的产生,并达到保护肾组织的作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路和核因子-κB/抑制因子κB通路在烧伤后促炎性细胞因子产生中的相互作用

目的探讨烧伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路和核因子(NF)-κB/抑制因子(I)κB通路在调控细胞因子产生方面的地位及是否存在相互作用。方法人单核细胞株THP-1分为正常血清对照组、烧伤血清组、烧伤血清+SB203580组(p38 MAPK特异性抑制剂)和烧伤血清+PDTC(NF-κB特异性抑制剂)组,每组均实验8次。血清刺激24 h后,酶联免疫吸附法测定上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量,蛋白印迹(W estern b lot)法检测THP-1内p38 MAPK的活性和IκBα的表达,凝胶电泳迁移率变化分析法检测THP-1内NF-κB和激活蛋白(AP-1)活性的变化。结果和正常血清相比,烧伤血清刺激后24 h,THP-1上清液中TNF-α和IL-1β的含量均明显上升[分别为(7.30±0.84)ng/m l和(2.20±0.28)ng/m l,P<0.05;(2.88±0.38)ng/m l和(0.81±0.14)ng/m l,P<0.05],p38 MAPK活性升高(4728±582和1291±163,P<0.05),IκBα含量下降(1211±115和2658±318,P<0.05),THP-1中NF-κB活性和AP-1活性均较正常血清显著升高(1636±170和317±32,P<0.05;946±137和361±40,P<0.05),使用SB203580和PDTC均能抑制烧伤血清刺激后THP-1上清液中TNF-α和IL-1β的含量的上升。预先给予SB203580能抑制烧伤血清刺激后THP-1中p38 MAPK和AP-1活性升高,但对IκBα含量和NF-κB活性无显著影响;预先给予PDTC可以防止烧伤血清刺激后THP-1中IκBα含量的下降和NF-κB活性的升高,而对p38 MAPK和AP-1活性无影响。结论在烧伤后全身炎症反应的发生中,p38 MAPK信号转导通路和NF-κB/IκB通路是两个平行和独立的信号转导通路,彼此之间没有直接的联系,共同调节着烧伤后单核细胞TNF-α和IL-1β的产生。     

美托洛尔对脓毒症大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ、肿瘤坏死因子α及核因子κB的影响

目的 探讨美托洛尔对脓毒症大鼠心肌的作用及可能的作用机制.方法 选择健康雄性SD大鼠18只,随机均分为三组:盲肠结扎加穿孔(CLP)组、美托洛尔干预(M)组和假手术(C)组.M组于CLP后2 h,经尾静脉给予美托洛尔0.05 mg冲击量,继以0.2 mg·kg-1·h-1至CLP 5 h;C组开腹后不做任何处理.用晦联免疫吸附试验(ELISA)榆测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),同时心肌组织用免疫组化半定量法观察核因子κB(NF-κB)的变化.结果 M组、C组血清cTnI、TNF-α及心肌NF-κB均低于CLP组(P<0.05);M组血清cTnl与血清TNF-α、心肌NF-κB之间均呈正相关.结论 美托洛尔有保护脓毒症大鼠心肌损伤的作用,其机制与抑制TNF-α及NF-κB的表达有关.     

基于JNK信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响

目的基于JNK信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响。方法将48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、SP600125组(JNK抑制剂)和豨莶草高(4 g/kg)、中(2 g/kg)、低(1 g/kg)组,对照组和模型组灌胃给予生理盐水,其他各组给予相应的药物,连续7天,第5天给药1 h后向大鼠膝关节腔注射尿酸钠建立痛风性关节炎模型,对照组不做处理,采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量,western bloting测定JNK和p-JNK蛋白含量和RTPCR测定c-jun、AP-1和NF-κB mRNA表达。结果与对照组比较,模型组炎性细胞浸润,滑膜细胞增生,成纤维细胞,SP600125组和不同浓度豨莶草组对滑膜组织炎性细胞浸润明显减少,滑膜细胞增生和成纤维细胞增生明显减轻;模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显增高,SP600125组和不同浓度豨莶草组血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显降低;western bloting和RT-PCR结果显示模型组滑膜组织中JNK和p-JNK蛋白含量明显增加,AP-1、c-jun和NF-κB mRNA表达明显增加,不同浓度豨莶草组和SP600125组能够明显降低痛风性关节炎大鼠JNK和p-JNK蛋白含量及c-jun、AP-1和NF-κB mRNA表达。结论豨莶草能够改善急性痛风性关节炎症状,其可能机制是调控JNK信号通路异常激活。     

血必净对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子的影响

目的 观察血必净注射液对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子表达的影响,探讨血必净治疗尿源性SIRS的作用机制. 方法 健康实验猪45头按随机数字表法分为假手术对照组、模型组和血必净治疗组3组,每组15只,每组所有动物按时间点又分为术后0、4、6、12和24 h5个时间点亚组.建立尿源性SIRS猪模型.应用RT-PCR法检测肾组织中TNF-α、IL-6、IL-10、NF-κB p65mRNA的表达;采用Western blot法检测肾组织中NF-κB的活性. 结果 模型组猪的SIRS表现最为明显,血必净治疗组SIRS表现明显较轻.模型组猪肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.05);血必净治疗组较模型组的TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达情况则与之相反. 结论 血必净通过抑制NF-κB活性、上调IL-10、下调TNF-α,IL-6及NF-κB的表达而达到治疗尿源性SIRS的作用.     

IL-17对小鼠脊髓星形胶质细胞相关炎性因子及A20、NF-κB蛋白表达的影响

[目的]探讨白介素17(Interleukin-17,IL-17)对小鼠脊髓星形胶质细胞相关炎性因子产生及A20(tumor necrosis factorαinducible protein 3,TNFAIP3)、NF-κB蛋白表达的影响。[方法]使用不同浓度的IL-17刺激体外培养小鼠脊髓星形胶质细胞,并于不同时间点(3、6、12、24和48 h)行酶联免疫吸附检测(ELISA)法和qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、MIP-2、MCP-1/5的表达,采用蛋白质免疫印迹法(WB)和qRT-PCR检测A20、NF-k B的表达。[结果]与对照组相比,实验组小鼠脊髓星形胶质细胞在IL-17刺激6、12 h时,IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2 mRNA和蛋白的表达水平分别显著升高(P0.05);NF-κB mRNA和蛋白的表达分别在6 h和12 h时显著升高,A20蛋白在12 h时表达量显著减少与NF-κB呈相反趋势,但其mRNA的表达呈逐渐减少趋势。[结论]A20和NF-κB可能在小鼠脊髓星形胶质细胞相关炎性因子产生过程中起调节作用。     

槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响

目的探讨槲皮素对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响及可能机制。方法选用人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)为研究对象,TNF-α诱导MH7A细胞,用不同浓度的槲皮素干预,RT-PCR法检测对IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的变化的影响,Western blot法检测对NF-κB的影响。结果槲皮素浓度依赖性地降低TNF-α诱导的MH7A细胞IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达,对TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB的磷酸化有明显的抑制作用。结论槲皮素可有效地减轻类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子及基质金属蛋白酶的表达,其机制可能和抑制NF-κB的表达相关,槲皮素是治疗类风湿性关节炎的潜在有效药物。     

NF-κB圈套技术在小鼠重症急性胰腺炎并发肺损伤中的实验研究

目的 探讨NF-κB圈套技术对小鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的影响.方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为正常对照组、SAP组、NF-κB decoy处理组、错配decoy处理组,每组9只.除正常对照组外,其他组采用雨蛙素联合脂多糖改良法制备小鼠SAP肺损伤模型.制模12 h后处死,采用EMSA法、Western印迹法检测肺脏NF-κB活性和P65蛋白含量的变化;采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法测定肺脏TNF-α、ICAM-1、IL-1 mRNA表达;同时行肺脏病理学损伤评分.结果 12 h后急性胰腺炎组和错配decoy处理组NF-κB活性较正常对照组和圈套技术处理组显著增高;然而除正常对照组外,其他三组间细胞核中NF-κB P65蛋白含量表达没有显著差异;正常对照组下游调控因子TNF-α(0.362±0.043)、ICAM-1(0.198±0.065)、IL-1 mRNA(0.321±0.089)低表达;急性胰腺炎组和错配decoy处理组下游调控因子TNF-α(1.131±0.066;1.031±0.058)、ICAM-1(0.365±0.051;0.385±0.050)、IL-1(0.869±0.110;0.961±0.061)mRNA水平升高(P<0.05);圈套技术处理组下游调控因子TNF-α(0.329±0.059)、ICAM-1(0.186±0.086)、IL-1(0.318±0.136)mRNA水平较上述两组降低(P<0.05).急性胰腺炎组和错配decoy处理组,肺脏组织水肿、炎性浸润方面的病理损伤评分高于正常对照组和圈套处理组(P<0.05).结论 应用圈套技术抑制NF-κB的活性及减少下游炎症介质的表达,可减轻SAP并发的肺组织损伤.     

消栓通脉颗粒药物血清对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB表达的影响

目的:研究核转录因子NF-κB在TNF-α诱导的人脐静脉血管内皮细胞中的表达,探讨NF-κB在DVT炎症-血栓反应环节的作用及中药消栓通脉颗粒的干预作用。方法:以TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞为实验模型,分为模型组、消栓通脉高剂量组、中剂量组及低剂量组,运用RT-PCR、Western-Blot方法检测NF-κB表达量的变化。结果:人脐静脉内皮细胞经TNF-α刺激后,NF-κB的表达水平比未激活的细胞中NF-κB水平明显升高。消栓通脉颗粒含药血清干预后,NF-κB表达水平下降,且该抑制作用呈剂量依赖效应,高剂量含药血清作用下,NF-κB表达水平最低。结论:消栓通脉颗粒能够抑制激活的人脐静脉血管细胞中NF-κB的表达。     

CYLD 在急性胰腺炎肺损伤中的表达及其与 NF-κB通路关系的体外研究

目的:探讨急性胰腺炎(AP)致急性肺损伤(ALI)时肺泡巨噬细胞(AM)中肿瘤抑制因子cylindromatosis(CYLD)的表达及其与NF-κB炎症反应信号通路的关系。方法:60只成年SD大鼠随机均分为实验组与对照组;经支气管肺泡灌洗获取大鼠AM后,实验组给予TNF-α刺激(AP致ALI体外模拟),对照组给予等量生理盐水,每组AM分别在处理后0、1、3、6、12h,行相关炎性因子,以及CYLD、NF-κBp65、NF-κB必须调节蛋白(NEMO)及IκBα蛋白表达检测。结果:对照组各时间点上,AM中释放的各炎症因子、以及CYLD、NF-κB通路相关蛋白的表达水平均无明显变化(均P0.05)。与对照组比较,实验组各项指标在0h均无差异(均P0.05),但其后时间点均有统计学差异(均P0.05);TNF-α、IL-1β、IL-6、NO的释放均在1h明显升高,且达到峰值,其后缓慢下降;从1h开始,CYLD蛋白表达明显下调、NF-κBp65和IκBα蛋白表达明显上调,其后均有所恢复;NEMO蛋白表达从1h明显上调,3h时表达降低,6、12h表达量再次回升。实验组AM中CYLD与NF-κBp65、NEMO及IκBα的表达呈明显负相关(r=-0.759、-0.849、-0.813,均P0.05)。结论:AM中CYLD的表达可能在AP致ALI时降低,进而其对NF-κB炎症反应信号通路的抑制减弱。上调CYLD的表达可能是减轻AP致ALI的有效途径。     

转化生长因子β1对脂多糖刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响，并探讨其可能的机制。 方法 把原代培养的第2代大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）分成对照组、LPS刺激组（1 mg/L）、TGF-β1刺激组（5 μg/L）及LPS+TGF-β1刺激组。RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） mRNA及蛋白的表达。蛋白印迹方法检测磷酸化核因子（p-NF）-κB/NF-κB值的变化。 结果 (1)LPS可刺激RPMCs上调TNF-α和IL-6表达。LPS刺激24 h后，p-NF-κB/NF-κB值升高。(2)TGF-β1可拮抗LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞上调TNF-α和IL-6表达，同时，也降低p-NF-κB/NF-κB值。 结论 在体外培养的大鼠腹膜间皮细胞，TGF-β1可拮抗LPS的致炎作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化而介导。     

061氯胺酮抑制内毒素诱导的细胞核因子κB表达

细胞核因子κB(NF-κB)是转录多种基因时所必需的诱导型转录因子,包括促炎细胞因子、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6和8(IL-6,IL-8)的编码。大多数细胞质(包括脑细胞)含有潜伏性NF-κB蛋白并作为一种无活性的P50蛋白和P65蛋白异源体与抑制蛋白IκB相结合而共存。细胞与TNF-α或脂多糖(LPS,内毒素)接触引起包含体(IB)降解,则许可游离B蛋白易位进入细胞核并激活DNA链成为特殊基因编码,例如TNF-α基因。接着细胞内TNF-α基因增多,引起TNF-α mRNA转录.结果导致一系列细胞过程并释放TNF-α。