胰酶中脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶活力测定方法的研究

<正> 胰酶是指从猪、牛羊等动物胰脏提取得到的一种混合物,主要含胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、淀粉酶、脂肪酶和RNA酶。临床上广泛应用于腹外分泌障碍,消化不良等疾患。目前,各国药典对胰酶制剂质量标准不一致,胰酶中胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶直接影响人体的消化吸收和营养状态。外国药典(B.P、USP、J.P等)胰酶制剂大都是规定胰蛋白酶、胰淀粉酶,胰脂肪酶三酶的含量指标和三酶比例,而中国药典(77)对此品种仅作胰蛋白酶的半     

从生产胰岛素的胰渣中制备胰酶、胰蛋白酶及糜蛋白酶

目的 从中性乙醇提取胰岛素后的残渣中提取制备高活性的胰酶,并从中分离纯化出胰蛋白酶(T)、糜蛋白酶(CT).方法 在胰渣中加入活化剂活化后,用PEG-6000沉淀、丙酮脱脂干燥得到胰酶;胰酶经CM-纤维素纯化得到胰糜蛋白酶混合制剂,再经CM-sepharose FF层析分离得胰蛋白酶和糜蛋白酶.结果 胰酶回收率为12.1％,胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶的活性分别为5.40、39.72、76.72 U·mg-1,3种酶的活性比例达1∶7.4∶14.2.胰蛋白酶、糜蛋白酶的效价分别为2505、1003 U·mg-1;相对于胰酶,二者的活性回收分别为48.93％、61.73％.结论 从胰渣中制得的胰酶活性较高(约9倍于《中国药典》2010年版中的标准);制得的T及CT的活力也达到《中国药典》2010年版中的标准.     

胰酶制备中三酶活性的相互关系及其主要影响因素的研究

作者对猪胰酶制备过程中胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等三酶活性间的相互关系,主要影响因素及如何提高胰酶产品的三酶活性等方面进行了研究。结果表明,三酶中起主导作用的是胰蛋白酶,最不稳定的是胰脂肪酶;三酶活性可通过温度、时间、激活剂等因素控制,适当的工艺条件可使产品在脂肪酶、淀粉酶活性较高的前提下,其蛋白酶活性提高。     

用丙酮法制备胰酶工艺的探索

<正> 胰酶系胰脏提取的酶的混合物,含有胰蛋白酶,糜蛋白酶,多种肽酶,脂肪酶及淀粉酶等,体内蛋白质的消化主要靠胰蛋白酶。现在国内基本上采用乙醇低浓度激活,高浓度沉淀的制备工艺,高浓度的乙醇会使脂肪酶失去活性,为了保证胰酶中三种主要酶的天然活性,我们对胰酶生产工艺进行了改革,其结果如下:一、工艺路线     

医药用酶及其进展概述

<正> 酶是生物体内的一种功能性物质。生物体内各种生化反应几乎都有酶参加活动。因此酶与生命及疾病的关系显得非常密切,酶在医药方面的应用,历来受到重视。一、已生产的药用酶1.美国药典1980年版载有药用酶六种:结晶胰蛋白酶、糜蛋白酶及α-糜蛋白酶、胰酶、胰脂酶、透明质酸酶、凝血酶。值得注意的是对质量要求都比较高。例如结晶胰蛋白酶的纯度达到2500μ、s、p单位/毫克,国内生产的只     

胰酶药物

<正> 胰酶是具有生理活性的复合酶,是国际医药卫生界公认的疗效确切的生化药品之一。主要含有胰蛋白酶、胰糜蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶,还有羧肽酶、核糖核酸酶、弹性蛋白酶及激肽释放酶等。1983年以前,我国生产的胰酶是控制单项     

猪胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分离和纯化

<正> 猪胰综合利用正受到越来越多的关注,其中蛋白水解酶的综合分离、纯化更是受到青睐。本文在猪胰激肽释放酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶提取和分离的基础上,对其中的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分离、纯化作一介绍。一、材料和检测方法 1.胰酶为长沙生化制药厂产品;结晶纯牛胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、N-乙酰-L-酪氨酸乙酯(ATEE)、N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)均由上海生化制药厂提供。     

激肽释放酶、弹性蛋白酶和糜胰蛋白酶联产研究

<正> 本文介绍了一种胰酶综合利用的方法。胰酶经提取后,用离子交换剂分离,得到了激肽释放酶和糜胰蛋白酶。从提取的残渣中回收得到弹性蛋白酶,上述联产方法操作简便,经扩大试验证明完全适应于工业化生产。胰脏是哺乳动物体内唯一内外分泌腺共体腺体,是许多生化药物的原材料,要充分利用胰脏有限的资源,胰脏综合利用是唯一适宜的途径。胰酶基木上含有胰脏中各种酶类,因此对胰酶的综合利用也是胰脏综合利用的一个重要内容。1963年戚正武从猪胰中用重结晶法,提取出糜胰蛋白酶共晶以来,我国从猪胰中提     

胰酶制造方法

<正> 本发明涉及的是具有分解淀粉、蛋白质和脂肪的高活力,而无致病菌的胰酶混合物及其制备方法。胰腺外分泌部份分泌一种弱碱性的液体,经胰管最后进入十二指肠。这种胰液含有活化后会使蛋白质水解成肽的胰蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶原,使淀粉变成糊精和糖的淀粉酶,以及把脂肪转变成甘油和脂肪酸的脂肪酶。胰蛋白酶是由十二指肠里分泌的所谓肠激酶激活的。胰蛋白酶又转而激活胰凝乳蛋白酶原。淀粉酶和脂肪酶主要是从体内分泌时自身活化的。     

多酶片肠溶衣包制的两种方法比较

<正> 多酶片是一种常用的助消化药。它含有胰酶、胃蛋白酶和淀粉酶(1989年部颁标准已取消淀粉酶)。由于胰酶中所含的胰蛋白酶、胰脂肪酸和胰淀粉酶发挥作用的最适pH分别为8.0～9.0,7.0和6.9,故在胃液中(pH1～2)失活,而胃蛋白酶发挥作用的最适pH约为1.2,在pH1.2以上则失活。因此,自1966年始多酶片被制成双层片,片芯为胰酶和淀粉酶,外包肠溶衣;外层为胃蛋白酶并包糖衣。因此肠溶衣包制质量直接影响到多酶片中胰酶作用     

牛胰蛋白酶制备工艺的改进及其对基因工程人胰岛素前体的酶切作用

目的对牛胰蛋白酶制备工艺进行改进,制备高纯度牛胰蛋白酶,并对其酶切基因工程人胰岛素前体的作用进行考察。方法采用粗制后先色谱分离再活化的方法对传统工艺进行改进,对传统工艺制备样品和改进工艺制备样品中的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的比活力进行测定和比较;进一步采用这2种样品对基因工程人胰岛素前体进行酶切,对酶切作用进行比较。结果传统工艺制备样品中胰蛋白酶比活力为212.5 U·mg-1,胰凝乳蛋白酶比活力为20.4 U·mg-1;而改进工艺样品中胰蛋白酶比活力为240.4 U·mg-1,胰凝乳蛋白酶比活力为0.14 U·mg-1。传统工艺制备样品酶切基因工程人胰岛素前体目标产物纯度质量分数为16.3%,改进工艺制备样品酶切基因工程人胰岛素前体目标产物纯度质量分数为32.2%。结论粗制后先进行SP色谱可实现胰蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶原较好的分离,该方法适合于高纯度胰蛋白酶的制备,制备的胰蛋白酶适合作为工具酶进行基因工程人胰岛素前体的酶切。     

大黄中酶抑制剂的研究

酶抑制剂广泛分布于植物、动物和微生物中,大黄是我国应用最广的中药之一,我们研究发现,它的根茎的水溶性部分有抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶的作用。本文报道了应用水提取、乙醇沉淀、硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-100凝胶过滤以及胰蛋白酶-琼脂糖凝胶亲和层析等方法,首次从大黄根茎水溶醇不溶部位中分离纯化到二种新的胰蛋白酶抑制剂Ⅰ和Ⅱ。抑制Ⅰ和Ⅱ除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶。用苯甲酰精氨酸β-萘酰胺(BANA)为底物,分别求出抑制剂Ⅰ、Ⅱ对胰蛋白酶的重量抑制比值为1:0.94和1:1.35。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-7)～10~(-8)范围内。用葡聚糖凝胶过滤测定了抑制剂Ⅰ、Ⅱ     

混乱的胰酶制剂急需纠正

<正> 我国一九八五年版药典明确规定,胰酶“每1g含胰蛋白酶不得少于600单位,胰淀粉酶不得少于7000单位,胰脂肪酶不得少于4000单位”。但国内大多数厂家生产的胰酶只注意到胰蛋白酶,测定方法是已经淘汰了的转化酪蛋白的方法(我国一九七七年版药典的胰酶标准早已通知停用),未测定胰淀粉酶和胰脂肪酶。按我国药品管理法规定“禁止生产,销售劣药,有下列情形之一的药品为劣药:一、药品成份     

胰酶酶活力测定方法分析

胰酶系从猪、牛、羊等动物的胰脏提取的多种酶混合物,临床上主用于消化不良、食欲不振及胰腺分泌疾病引起的消化障碍等疾病。根据１９９５年版《中国药典》,其质量指标是以胰蛋白酶、胰淀粉酶及胰脂肪酶的活力指标来衡量的,这几种酶的测定方法较复杂,实验要求较高,现对测定方法进行分析。１胰蛋白酶１．１测定原理：胰蛋白酶可催化酪蛋白水解生成不被三氯醋酸所沉淀的、肽、陈及氨基酸等,其中酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸在２７５ｎｍ处有最大吸收。药典中的测定方法以酪蛋白为底物（１．５％）,用硼酸盐缓冲液稀释配成相应浓度,采用Ｃ…     

一种酶反应器筛选胰蛋白酶抑制剂方法的建立

目的建立从黄酮化合物库中筛选胰蛋白酶抑制剂的新方法。方法利用毛细管固定化酶反应器技术,通过环氧基的开环反应,将胰蛋白酶与poly(GMA-co-PEGDA)有机聚合物整体材料共价键合制备毛细管固定化胰蛋白酶反应器;对酶反应浓度与反应时间等参数进行了系统研究,利用荧光显微镜、扫描电子显微镜和拉曼光谱对酶反应器进行了表征;采用微径液相色谱法对酶反应器的活性和动力学参数进行了系统评价;将制备的酶反应器用于20种中药黄酮化合物中胰蛋白酶抑制剂的筛选;通过分子对接手段进一步考察胰酶与抑制剂之间的作用机制。结果 16种黄酮化合物具有不同程度的胰蛋白酶抑制作用,其中,漆黄素的抑制效果最佳,抑制率为(62.9±1.2)%,分子对接结果进一步说明了漆黄素与胰蛋白酶之间的作用机制。结论建立了一种简单、有效的胰蛋白酶抑制剂的筛选方法,可进一步推广应用。     

蜈蚣粉酶解工艺最佳用酶的初步筛选

目的分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶对蜈蚣粉进行酶解并选取最佳用酶来制备抗肿瘤多肽。方法利用4种酶对蜈蚣粉进行酶解,采用MTT体外抗肿瘤实验方法,以蛋白质的水解度及酶解提取液对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为指标,同时以蜈蚣粉的水溶性蛋白质含量为标准,评价4种酶对蜈蚣粉的酶解效果并筛选出最佳用酶。结果胃蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为10.44%;胰蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为28.29%,在0.125 mg·m L~(-1)及0.25 mg·m L~(-1)的较小浓度下对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率低于对照组,但随浓度的增大抑制率逐渐增大,在0.5~2 mg·m L~(-1)浓度时,胰蛋白酶在4种酶中达到最大抑瘤效果;胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶的水解度分别为50.45%、44.16%,当浓度>0.5 mg·m L~(-1)时其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组,在浓度为0.5mg·m L~(-1)时抑制率分别为2.86%、36.37%,且随浓度增大抑制率增大。结论蜈蚣粉酶解工艺最佳用酶为胰蛋白酶,其次是胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶,而胃蛋白酶活性较低可以去除。     

口服用糜胰蛋白酶及其片剂的工艺

<正> 注射用结晶糜胰蛋白酶为我国首次从猪胰中提取制得的蛋白水解酶,1976年由苏州地区科技组,卫生局组织鉴定。该药具有糜蛋白酶与胰蛋白酶二种酶协同水解蛋白质肽链的作用它能液化脓液和坏死组织,从而净化创面,有利于新生肉芽的生长,促进治愈。同从牛胰中提取的α——糜蛋白酶或胰蛋白酶比较,它具有疗效高、适应症广、付作用小、使用安全等优点。对內牛胰中提取的糜蛋白酶或胰蛋白酶有     

从生产胰岛素后的猪胰残渣中提取制备胰酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的研究

在党的无产阶级教育方针指引下,从我国国民经济实际需要出发,我们在学校教学、科研、生产三结合基础上选择了胰脏综合利用这一研究课题,从生产胰岛素后的猪胰残渣中制备了胰酶、结晶胰蛋白酶、糜蛋白酶和具有高度专一性的胰蛋白酶抑制剂等多种生化药品,为扩大胰岛素和胰酶的生产开辟了一条新途径。通过调查了解,目前国内还没有一种较好的方法能从胰脏中同时大量制得胰岛素和各种酶类。几种产品不能同时兼得,造成互争原料,在一定程度上影响胰岛素的生产。国外曾报道从牛胰脏残渣中提取牛胰蛋白酶等,但因收率较低,方法繁杂,成本高,未见在生产中广泛     

~(60)Co-γ射线辐照对复方胰酶散质量影响的研究

目的探讨~(60)Co-γ射线辐照对复方胰酶散中乳酶生含量、杂菌数量、胰蛋白酶和淀粉酶活性的影响。方法检测辐照前后乳酶生含量、杂菌数量、胰蛋白酶和淀粉酶活性。结果经~(60)Co-γ射线辐照(3kGly,48 h;10 kGly,48 h),复方胰酶散中乳酶生含量、杂菌数量几乎为零,胰蛋白酶活性没有变化,淀粉酶活性平均下降34.9%(n=20)。结论 ~(60)Co-γ射线辐照不仅杀灭污染微生物,也使乳酶生含量几乎降为零,淀粉酶活性下降,影响复方胰酶散质量和疗效。复方胰酶散不能用~(60)Co-γ射线辐照。     

天龙粉酶解工艺中最佳用酶的研究

目的探索天龙粉经过4种蛋白酶酶解后对肺腺癌A549细胞株的抑制作用,筛选出最佳用酶。方法天龙粉分别经过胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶酶解,采用茚三酮比色法测定蛋白质的水解度,同时以天龙粉水提物作为对照组,用甲基噻唑蓝(MTT)法测定4种酶水解物对肺腺癌A549的抑制率。结果对照组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞无明显抑制作用;弹性蛋白酶、胰蛋白酶对天龙粉的水解度分别为77.50%、28.02%,给药组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞的抑制率明显高于对照组;胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶的水解度分别为34.63%、72.80%,给药组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞无明显抑制作用。结论天龙粉酶解工艺的最佳用酶是弹性蛋白酶,其次是胰蛋白酶。