乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好：200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4．5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3．4％～7．8％,6．9％-8.4％;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

IMMULITE Ⅰ型全自动分析系统使用初评

本文通过测定血清中T3,T4含量为例,介绍IMMULITE Ⅰ型酶放大化学发光免疫分析仪及化学发光法与放射免疫分析法(RIA)的比较.IMMULITE Ⅰ型分析仪测得血清中T3,T4重复性良好,批内变异和批间变异均小于5%.在对T3值是432ng/dL和377ng/dL的血清样品作回收实验,回收率为103.2%-116.9%.两种方法测得T3结果呈相关,相关系数 0.91,回归方程为Y=1.06X+0.159.IMMULITE Ⅰ型分析仪测量,在25min后出第一个样品结果,以后每35sec出另一个结果,而RIA通常需要几小时或更长时间,才能出结果.因此IMMULITE Ⅰ型分析仪操作简便,其采用的化学发光法可与RIA媲美,是一种功能全,运行平稳的化学发光分析仪,值得进一步推广使用.     

雅培全自动化学发光免疫分析仪i2000SR故障维修一例

0 引言 全自动化学发光免疫分析仪是医院检验科常用设备之一,大连大学附属中山医院使用的是美国雅培公司i2000SR全自动化学发光免疫分析仪,可同时检测25个项目,每小时能完成200个测试,具有较高的工作效率及准确性和灵敏度. 化学发光免疫分析(chemilumineseent immunoassay,CLIA)是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物直接标志抗体或抗原的数量,进而对抗体或抗原进行特定量检测的一类免疫分析法.检测技术中检测小分子抗原使用竞争法,检测大分子抗原用夹心法.i2000SR全自动免疫发光分析仪中肝炎检测项目优势明显,在肝炎定量检测方面属于全球金标准测试,其中的HbsAg和HbsAb为全定量检测,HbeAg、HbeAb、HBcAb为半定量检测.i2000SR全自动免疫发光分析仪对甲状腺的检测项目中促甲状腺素(thyroid Stimulating Hormone,TSH)具有最优灵敏度.     

高灵敏电化学发光法特异性测定人血清抗甲状腺球蛋白抗体

目的 通过竞争法一步法原理,建立一种检测人血清抗甲状腺球蛋白抗体(anti-TgAb)的电化学发光免疫分析(ELICA)方法.方法 将样本、三联吡啶钌标记抗体和生物素标记甲状腺结合球蛋白(thyroglobulin,Tg)抗原三者共同孵育形成抗体-抗原复合体,再加入链霉亲和素包被的磁微粒与该复合物共同孵育形成钌标记抗体-生物素抗原-链霉亲和素磁颗粒复合物,通过磁场固定洗涤去除游离物质;然后加入三丙胺得到相对光子强度(relative light units,RLU).检测该方法的灵敏度、线性范围、精密度、准确度及稳定性,并与罗氏公司的anti-TgAb检测试剂盒进行对比.结果 anti-TgAb的最低检测限为5 IU/mL,线性范围为10～1000 IU/mL,准确度为0.900～1.100,批内变异和批间变异均小于5％.与罗氏公司anti-TgAb检测试剂盒的相关系数r=0.996(n=50),稳定性测试(37℃,8d)中,各项性能指标变异程度均符合标准[线性相关系数r=0.9998,准确度低值0.94,准确度高值0.93,批内精密度(CV)高值3.77％,低值4.34％].结论 该方法各项性能指标(灵敏度、精密度、准确度、稳定性等)均能达到临床检测要求,可供临床检测使用.     

血清铁蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 血清铁蛋白(sFER)时间分辨荧光免疫(TRFIA)分析试剂盒的研制.方法 采用双抗体夹心法建立sFER-TRFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的线性测量范围为2.2～1 070 ng/mL,灵敏度为0.22 ng/mL,批内、批间的精密度分别为4.6%～7.2%、5.4%～8.9%,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和人白蛋白无交叉反应.86份血清样本用本试剂盒与国外其他试剂盒同时检测,其相关系数为0.994.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析法的建立

研制检测人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)快速检测试剂盒。采用受体微球用一株NSE单克隆抗体包被,用生物素标记一株单克隆抗体,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果显示:自制NSE试剂盒灵敏度为0.149 ng/ml,线性范围为0.149~600ng/ml,分析内、分析间的精密度分别为3.7%~4.3%、3.9%~5.2%,与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、非神经元性烯醇化酶(NNE)均无交叉反应,154份临床血清样本用本试剂盒与罗氏化学发光试剂盒检测,其相关系数为0.979。发现自制NSE-AlphaLISA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本NSE浓度的测定。     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立

目的以特异性单克隆抗体为基础建立丙型肝炎病毒(HCV)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探索从血浆或血清中检测HCV抗原的可能性.方法利用我们制备的抗-HCV核心及NS3区单克隆抗体(McAbs),进行多种交叉组合模式的分析,确立实验室模式,并测定348份义务献血员血样,确定此方法的Cutofff值,并分析146份抗-HCV阳性及225份抗-HCV阴性血浆,阳性结果用套式PCR试剂盒确证.结果构建了以抗-HCV核心区单抗C39及NS3区单抗C7-6为包被抗体,以C39及NS3区C7-57为标记抗体的夹心ELISA检测模型,以C7为抗原,其检出灵敏度为5ng/ml,其Cutoff值为阴性对照均值±0.25.146份抗-HCV阳性样本中,11份为抗原反应阳性,225份抗-HCV阴性样本中,16份为抗原阳性,这些阳性样本经PCR检测后,23份为HCVRNA阳性.结论用单抗构建的HCV抗原检测方法分别从抗-HCV阳性及阴性样本中检测出HCV抗原反应阳性样本,并经PCR确证,表明直接从血浆样本中检测HCV抗原是可能的,这将对于HCV和基础研究及控制HCV的传播有重要意义.     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

促甲状腺素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立一种定量检测人血清促甲状腺素(TSH)的方法.方法 根据双抗体夹心法实验原理,分别用吖啶酯和生物素标记两株不同的单克隆抗体,链霉亲和素包被微粒,通过链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测.结果 本方法的最低检测限为0.01 μIU/mL,线性范围0.3～60μIU/mL,批内变异为1.9％ ～2.3％,总变异为6.4％ ～8.6％,与ROCHE公司的促甲状腺素检测试剂盒(电化学发光法)比对,相关系数r=0.9935.结果 本方法的各项指标均能满足临床检测的要求,可以临床推广应用.     

人血清PCT直接化学发光免疫分析方法的建立及性能评价北大核心CSCD

目的:建立人血清PCT直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法:根据双抗夹心法原理制备磁微粒试剂、吖啶酯-抗体试剂与生物素化抗体试剂,3种试剂与血清PCT抗原反应后形成双抗夹心免疫复合物。利用磁场清洗复合物后,加入预激发液与激发液,化学发光免疫分析仪检测反应的发光强度,方程拟合后计算出样本中PCT浓度,并对线性范围、准确度、精密度、特异性及与干式免疫法试剂盒相关性进行性能评估。结果:本方法空白限为0.01 ng/ml,线性范围为0.02~100.00 ng/ml,准确度为95.65%,批内精密度为5.06%~5.35%,批间精密度为5.44%~5.69%,特异性均在可接受范围内,与干式免疫法试剂盒具有良好的相关性。结论:本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与临床使用的干式免疫法试剂盒具有良好的相关性,有望实现临床转化应用。     

六西格玛质量管理在临床肿瘤标志物检验质量控制中的应用

目的 应用六西格玛(6σ)质量管理理论分析评价本实验室肿瘤标志物检测的方法性能,提供合适的质量控制方案,进一步提高实验室的检测能力.方法 统计首都医科大学附属北京中医医院检验科2020年10月至2021年6月甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(TPSA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原15-3(CA15-3)、糖类抗原19-9(CA19-9)、铁蛋白(Ferritin)、总β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、糖类抗原72-4 (CA72-4)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和鳞状细胞癌抗原(SCCA)12个检验项目的 室内质量控制数据,结合国家卫生健康委员会临床检验中心(NCCL)室间质量评价结果,根据不精密度(CV)、偏倚(Bias)、允许总误差(TEa)计算σ值,对于未达到6σ水平的检验项目,计算其质量目标指数(QGI),查找原因,进行改进.结果 12个肿瘤标志物检验项目的 平均σ值为3.67,其中,CA72-4、CYFRA21-1、NSE、TPSA和Ferr项目4≤σ＜5;SCC、AFP、CA15-3、CA125和β-HCG项目3≤σ＜4;CEA和CA19-9项目σ＜3.CYFRA21-1项目的 QCI处于0.8～1.2,其余11个项目QCI＜0.8.在未达6σ的12个检验项目中,91.67％的项目需要优先改进精密度,有8.33％的项目需要同时改进精密度和准确度.结论 6σ质量管理理论可以有效提高临床实验室肿瘤标志物检验质量.     

低浓度HBsAg人群血清乙肝HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb检测的临床意义

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)测定是判断乙型肝炎感染的重要依据之一,也是供血者和招工体检基本项目之一.由于HBsAg测定受试验方法、试剂盒灵敏度及操作误差、结果判断标准等影响,低浓度HBsAg在不同的实验室可能有不同检测结果.为此,我们收集了128例低浓度HBsAg感染者进行了乙肝病毒表面抗体(HBsAb),乙肝病毒e抗原(HBeAg)及e抗体(HBeAb),乙肝病毒核心抗体(HBcAb)检测,旨在探讨其临床意义.     

糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫测定方法.方法 一株抗CA72-4单克隆抗体经微孔板固相包被与另一株酶标单克隆抗体建立双夹心反应体系,检测样品中CA72-4抗原的含量.通过与国外权威试剂盒血样测值的对比,分析该方法临床应用的可行性.结果 该分析方法线性范围为0～ 160 U/mL,灵敏度为0.55U/mL.批内CV值为:5.49％,4.53％;批间CV值为:8.12％,7.81％;回收率为:99.74％ ～ 104.11％;与CEA,CA125,CA19-9无交叉反应;与法国Cisbio analysis公司所生产的CA72-4免放药盒血清测值对比分析后,发现两者相关性较高,并确定了本分析方法的正常范围.结论 该分析方法的测定结果与参比试剂盒结果有较高符合率,可用于临床血清中CA72-4的检测.     

石杉碱甲快速检测酶联免疫试剂盒的制备

目的:制备并鉴定石杉碱甲单克隆抗体,研制石杉碱甲间接竞争酶联免疫试剂盒。方法:以石杉碱甲人工抗原免疫BALB/c小鼠获得单克隆抗体,采用酶联免疫吸附法制备石杉碱甲试剂盒,对试剂盒各项指标进行评价。结果:试剂盒工作范围为5~2 500 ng/ml,检测限为6.242 ng/ml,与多种生物碱均无交叉反应,试剂盒可在4℃或-20℃下稳定贮存半年以上,石杉碱甲片回收率在94.2%~108.6%之间,变异系数在2.3%~4.8%之间。结论:石杉碱甲ELISA试剂盒快速、灵敏、稳定,可用于石杉碱甲的含量测定。     

新型优生4项快速检测试剂的制备与条件优化

技术检测是目前优生需要进行的4项测定,如能做到将此4种病原体抗体一次性快速检测将会为临床和病人带来方便.我们制备了一种新型优生4项快速检测试剂,在传统的免疫层析技术基础上,将弓形虫(Tox)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV Ⅱ)抗原分别在硝酸纤维素膜(NC膜)的不同位置交错包被成线,通过胶体金标记羊抗人IgM抗体显色,同时检测人血清中针对抗原的特异性IgM抗体.     

甲胎蛋白顺序饱和微量法适度过量抗体的简易选择

甲胎蛋白检测在临床上不仅常规用于原发性肝癌诊断。而且在产前异常胎儿的筛选上也具有重要地位。其检测方法以顺序饱和法最先进。 顺序饱和法的原理是基于用过量的抗体与抗原充分反应(第一反应)然后再用过量的标记抗原与未被抗原结合的多余抗体反应(第二反应)。在实践中,过量抗体及过量标记抗原量的选择将成为此方法的关键步骤。在我们过去经验的基础上摸索出一种简便易行的方法,此法不但决定了过量抗体应     

负载肝癌抗原的人树突状细胞生物学特性的研究

目的　探讨负载肝癌抗原的树突状细胞 (DC)对自身CIK细胞的诱导增殖能力和杀伤能力 .方法　从人外周血分离获得单核细胞 ,体外经重组细胞因子 (GM -CSF)、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )、肿瘤坏死因子α(TNF -α)培养获得DC ,电镜观察其形态 ,流式细胞仪检测其表面抗原 ,混合淋巴细胞反应检测负载肝癌抗原DC诱导CIK细胞增殖活性 ,检测激活的CIK对肝癌细胞的杀伤作用 .结果　经体外培养 ,从外周血分离获得的大量成熟DC ,检测表明高表达DC的抗原标志 ,负载抗原的DC具有很强的激发同种CIK增殖的能力 ,激活的CIK对肝癌细胞系具有很强的杀伤作用.结论　实验结果为肝癌的临床免疫治疗提供了理论基础 .     

乙肝病毒前S1抗原与传统二对半及HBV-DNA-PCR的相关性探讨

目的检测前S1抗原与传统二对半中HBsAg、HBeAg及HBV-DNA-PCR的相关性,进一步推论前S1抗原在乙型肝炎的诊断与治疗中的临床作用.方法对本院2003年10月至2003年12月的门诊及住院病人所有乙肝六项(二对半和前S1抗原)检测结果进行分析,对其中所有HBsAg阳性者1170例按二对半结果模式进行分类,计算前S1抗原在各类模式中的阳性率,以及前S1抗原与HBsAg、HBeAg的相关性,另外留取30份HBV-DNA-PCR阳性标本,检测其前S1抗原及HBeAg结果,研究此三项指标的相关性.结果前S1抗原在不同模式中的阳性表达率各不相同,与HBsAg阳性相关率为63%,与HBeAg阳性相关率为88.6%,HBV-DNA-PCR阳性者的前S1抗原阳性率为90% ,HBeAg阳性率为73%.结论前S1抗原与两对半结果有很好的相关性,与HBV-DNA-PCR高度相关,优于HBeAg,能准确客观地反应乙肝病毒感染与复制,是乙型肝炎诊断和治疗的一种敏感有效的指标.     

比较4种真空采血管对常规生化检测结果的影响

目的 探讨4种真空采血管对常规生化检测结果的影响.方法 选择2021年1月至6月于佳木斯传染病院的100例健康志愿者作为研究对象,利用常规血清分离胶真空采血管以及分别添加肝素锂、乙二胺四乙酸钾和枸橼酸钠的抗凝真空采血管于清晨空腹收集志愿者血液标本.采用全自动生化分析仪对生化项目检测,检测项目包括三酰甘油、白蛋白、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、肌酸激酶、葡萄糖、尿素,对检测结果进行统计学分析与比较.结果 与血清生化检测值比较,肝素锂抗凝血浆的葡萄糖(glucose,Glu)水平明显升高(P＜0.05);乙二胺四乙酸钾抗凝血浆的天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平明显降低(P＜0.05);枸橼酸钠抗凝血浆的尿素(urea anhydride,UREA)、AST、肌酸激酶(creatine kinase,CK)和白蛋白(albumin,Alb)水平均明显降低(P＜0.05).结论 含有不同抗凝剂的真空采血管对生化检测结果有一定影响,应根据检测项目不同采用不同抗凝血浆代替血清,添加肝素锂抗凝剂的真空采血管在急诊生化检测中具有一定可行性.