SOCS3及Eotaxin-2在变应性鼻炎中的表达及意义

目的研究SOCS3及Eotaxin-2在变态反应性鼻炎(AR)鼻黏膜中的表达及其相互关系和临床意义。方法取20例AR患者(AR组)和15例单纯鼻中隔偏曲患者(对照组)鼻黏膜为研究对象,应用免疫组织化学技术分别检测SOCS3及Eotaxin-2的表达,并分析SOCS3及Eotaxin-2表达的相关性。结果在AR患者鼻黏膜中,SOCS3及Eotaxin-2的表达上调,在鼻黏膜炎性细胞、上皮细胞、腺体细胞、血管内皮细胞均呈显著性表达。SOCS3的平均光密度值为0.2401±0.01463,Eotaxin-2为0.2398±0.01423,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均0.01)。AR患者鼻黏膜中SOCS3及Eotaxin-2的表达具有相关性(r(0.951,P0.01)。结论AR患者SOCS3及Eotaxin-2在鼻黏膜组织中表达增高,且二者呈正相关。     

白细胞介素23在变应性鼻炎患者鼻黏膜中的表达及意义

目的:探讨白细胞介素23(IL-23)在变应性鼻炎(AR)患者鼻黏膜中的表达及意义.方法:收集12例AR患者(AR组)下鼻甲黏膜及11例单纯性鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜(对照组),采用免疫组织化学方法和实时定量RT-PCR方法检测下鼻甲黏膜中IL-23的表达.结果:IL-23p19 mRNA在AR组中的表达水平较对照组明显增高(P<0.01).免疫组织化学显示IL-23蛋白主要表达于黏膜固有层的炎性浸润细胞,AR组鼻黏膜中IL-23阳性细咆数明显高于对照组(P<0.01).IL-23p19mRNA和蛋白表达水平与黏膜固有层总炎性细胞浸润程度及固有层胶原纤沉积程度成显著正相关(对于mRNA表达水平,相关系数分别为0.678和0.834;对于蛋白表达水平,相关系数分别0.644和0.721,均P<0.01).结论:IL-23可能参与了AR的慢性炎症和组织重塑.     

共刺激分子OX40/OX40L在小鼠变应性鼻炎发病机制中的作用

目的 探讨OX40/OX40L在小鼠变应性鼻炎发病机制中的可能作用。方法 精选30只清洁级小白鼠,随机分成对照组、模型组、干预组。通过免疫组织化学方法测定对照组和模型组小鼠鼻黏膜中OX40的表达,同时应用ILISA法测定各组中IL-4、IL-10、IFN -γ的水平。结果 OX40在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜上皮细胞、腺体细胞、血管内皮细胞、CD4+T细胞中均呈现高表达,OX40主要表达于细胞膜、细胞浆,在对照组中极少表达（P<0.05）。ILISA法测定IL-4、IL-10、IFN -γ在对照组与模型组间差异有统计学意义（P<0.05）,模型组和干预组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 OX40/OX40L在变应性鼻炎小鼠发病机制中起重要作用。     

程序性死亡受体1及其配体调控变应性鼻炎免疫偏移的实验研究

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)及其配体PD-L1、PD-L2在变应性鼻炎(AR)中的表达及其对AR免疫偏移的调控作用。方法收取2018年5月至2019年5月,因鼻腔高反应症状于武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科门诊就诊,或因鼻中隔偏曲住院行鼻中隔矫正手术的82例患者,男42例,女40例,年龄14~38岁。收集相应患者的临床资料、血液、下鼻甲黏膜标本。根据临床表现、皮肤点刺试验和血清特异性变应原筛查特异性IgE(sIgE)检测结果,将患者分为AR组和对照组。免疫组织化学法检测鼻黏膜中PD-1及配体的表达情况。流式细胞术检测外周血PD-1^+CD4^+T细胞、PD-L1^+髓样树突状细胞(mDCs)、PD-L2^+mDCs及Th2细胞比例。酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中总IgE、PD-1及配体分泌型(sPD-1、sPD-L1、sPD-L2)的表达水平。正态分布或经Ln转换后呈正态分布的计量资料组间比较采用t检验,相关性分析采用Spearman或Pearson相关,设P<0.05为差异有统计学意义。结果AR组鼻黏膜中免疫细胞表面PD-1及其配体的表达明显高于对照组。AR组外周血中PD-1^+CD4^+T细胞、PD-L1^+mDCs、Th2细胞比例明显高于对照组[(15.24±6.45)%比(8.71±5.33)%,(8.79±2.01)%比(5.74±2.90)%,(7.89±1.95)%比(2.52±1.34)%,P值均<0.05],两组PD-L2^+mDCs比例无明显差异。PD-1^+CD4^+T细胞比例与AR病情总体视觉模拟量表(VAS)评分、血清总IgE、sIgE浓度呈正相关(r值分别为0.501、0.541、0.608,P值均<0.05),PD-L1^+mDCs比例与AR病情总体VAS评分、sIgE浓度呈正相关(r值分别为0.604、0.563,P值均<0.05),Th2细胞比例与PD-L1^+mDCs、PD-1^+CD4^+T细胞比例呈正相关(r值分别为0.538、0.623,P值均<0.05)。AR组sPD-1、sPD-L1及总IgE表达水平较对照组明显升高[(4.40±1.01)pg/ml比(3.79±1.21)pg/ml、(3.88±0.25)pg/ml比(3.57±0.23)pg/ml、(6.34±1.38)ng/ml比(4.89±1.10)ng/ml,P值均<0.05],sPD-L2表达水平无明显差异。相关性分析发现sPD-L1与总IgE、sIgE浓度呈正相关(r值分别为0.32、0.45,P值均<0.05)。结论AR患者外周血及鼻黏膜组织中免疫细胞表面均高表达PD-1及PD-L1,AR患者外周血中sPD-1及sPD-L1表达水平升高,PD-1/PD-L1信号通路可通过诱导Th2型免疫反应促进AR炎性反应。     

变应性鼻炎大鼠中转录因子T-bet/GATA-3的表达与嗜酸粒细胞计数的关系

目的:探讨转录因子T-bet/GATA-3在变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜组织中的表达及其与嗜酸粒细胞(EOS)计数的关系。方法:采用卵清蛋白致敏方法建立AR大鼠模型;SD大鼠20只随机分为对照组和AR组,每组10只。苏木精-伊红染色计数各组大鼠鼻黏膜EOS;采用ELISA检测大鼠鼻腔盥洗液中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;RT-PCR测定法检测鼻黏膜组织中IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3mRNA的表达水平;Westernblot检测鼻黏膜组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果:AR大鼠鼻黏膜组织可见以EOS为主的炎症细胞浸润;鼻腔盥洗液中IL-4、IL-5和IFN-γ的含量明显高于对照组;AR大鼻黏膜组织中IFN-γ、T-bet mRNA表达及T-bet蛋白量明显高于对照组,而IL-4、IL-5和GATA-3mRNA表达及GATA-3蛋白量在对照组明显高于AR组;T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与EOS数、IL-4、IL-5呈负相关(P<0.01);与IFN-γ呈正相关(P<0.01)。结论:转录因子T-bet/GATA-3在AR大鼠鼻黏膜组织失衡表达,其表达水平与...     

一氧化碳对豚鼠变应性鼻炎动物模型中硫化氢体系的影响

目的 制备豚鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)动物模型,干预处理后研究内源性一氧化碳(CO)与硫化氢(H2S)在AR发病机制中的作用,并分析CO对AR模型中硫化氢体系的影响.方法 以卵清蛋白成功致敏豚鼠制备AR动物模型,分别以血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)诱导剂(氯化血红素)和抑制剂(锌原卟啉)干预处理致敏后豚鼠,同时以生理盐水处理豚鼠作为对照组,分别观察各组动物行为学改变,测定血清总IgE,鼻腔灌洗液中嗜酸细胞活化趋化因子含量,并测定血浆CO与H2S浓度,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定鼻黏膜中CO限速酶HO-1与H2S两种限速酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达.结果 豚鼠致敏后行为学计分、血清总IgE、鼻腔灌洗液嗜酸细胞活化趋化因子浓度及血浆CO含量明显增高(P值均<0.01),鼻黏膜中HO-1的表达量(x±s,下同)为(7.61±2.80)×10-3,较对照组[(2.32±1.14)×10-3]明显增高(P<0.05).诱导组各项指标与血CO含量、HO-1的表达[(14.00±5.73)×10-3]与致敏组相比进一步增高(P值均<0.05);抑制组则各指标明显降低(P值均<0.05),而血浆H2S浓度在AR组[(14.80±1.60)μmol/L]明显低于对照组[(18.90μ1.00)μmoL/L,P=0.002],鼻黏膜中CBS和CSE均有表达,其中CSE在AR中的表达明显减少(P<0.05),HO诱导组H2S浓度和CSE表达量进一步降低(P值均<0.05),抑制组则有所增加(P值均<0.05),而CBS的表达较弱,且各组间差异无统计学意义(P>0.05),提示鼻黏膜中H<,2>S浓度主要受CSE的调控,二种气体相关分析提示H2S浓度与CO含量呈负相关(r=-0.702,P<0.001).结论 内源性CO与H2S参与AR的炎症过程,其中CO含量主要受HO-1的调控,H2S主要与鼻黏膜中CSE的表达有关,H2S浓度的变化受CO影响.     

变应性鼻炎对小鼠鼻黏膜核因子-кB p65和糖皮质激素受体表达的影响

目的 探讨变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠鼻黏膜核因子-кB(nuclear factor kappa B,NF-кB)p65和糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达,进一步了解NF-кB p65和GR在AR发病机制中的作用.方法清洁级C57BL6/J小鼠20只,随机分为AR组和对照组,每组10只.AR组用10%卵清蛋白(ovalbumin,OVA)200μl腹腔注射,6%OVA鼻腔局部激发建立AR模型.取鼻面骨,石蜡包埋,连续切片,行HE染色.分别运用免疫组化SABC法和SP法染色,观察鼻黏膜中NF-кB p65和GR的表达情况.结果 AR组中10只动物均建模成功,鼻部AR典型症状明显;对照组无明显变化.①形态学改变:对照组鼻黏膜无明显炎症改变;AR组黏膜则显示不同程度水肿,黏膜下嗜酸粒细胞(eosinophils,Eos)、淋巴细胞和单核细胞浸润.②黏膜NF-кB p65表达:NF-кB p65主要表达于上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆,偶见胞核.AR组中上皮细胞染色平均光密度值(0.40+0.12)强于对照组(0.23±0.05;P<0.05).③GR表达:2组中均有GR表达,主要表达于鼻黏膜上皮、腺上皮及血管内皮细胞的胞核或胞质.AR组中GR的平均光密度值(0.20±0.04)低于对照组(0.36±0.11;P<0.05).结论 NF-кBp65在AR黏膜中表达增强,而GR的表达下降,提示两者的失衡在AR的发病中发挥重要作用.     

重组激活基因-1在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达及DNA测序研究

目的:探讨重组激活基因1(RAG1)在变应性鼻炎(AR)发病机制中的作用及其与IL4、IL10和IgE之间的关系及意义。方法:用卵清蛋白(OV)建立大鼠AR模型并用地塞米松(DEX)进行干预,用被动皮肤过敏原试验(PCA)测试皮肤反应并与正常对照组进行比较;用RTPCR技术检测各组鼻黏膜中RAG1基因mRNA的表达水平,并对RAG1基因的DNA进行测序;用ELISA法检测各组大鼠外周血清IL4、IL10和IgE的水平变化。结果:RAG1基因的mRNA在正常对照组鼻黏膜中未见表达,在AR组和DEX干预组均有明显表达;DNA测序未发现RAG1基因有突变发生;AR组血清IL4[(106.31±12.90)ng/L]和IgE[(38.67±4.13)ng/L]水平均显著高于正常对照组[(93.65±7.78)ng/L,(23.27±1.36)ng/L](均P<0.05),IL10[(38.15±4.89)ng/L]水平显著低于正常对照组[(48.74±3.49)ng/L](P<0.05);经DEX干预后,血清IL4[(92.67±16.40)ng/L]和IgE[(24.23±4.38)ng/L]水平均较AR组显著下降(均P<0.05),而IL10[(46.18±5.01)ng/L]水平较AR组显著升高(P<0.05);PCA试验在AR组90%呈阳性反应,在正常对照组和DEX干预组均呈阴性反应。结论:RAG1的高表达与AR的发病密切相关,并介导了IL4和IgE的分泌及抑制IL10的分泌。其DNA序列在AR鼻黏膜中具有保守性,糖皮质激素不影响RAG1基因的表达,推测在AR发病机制中,RAG1基因通过一个较高层面的免疫调节环节发生作用。     

局部应用糖皮质激素对鼻息肉组织中蛋白激酶C和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的:探讨局部应用糖皮质激素对鼻息肉组织中蛋白激酶C(PKC)、抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax蛋白表达的影响及意义.方法:应用免疫组织化学方法检测PKC、Bcl-2和Bax蛋白在16例鼻息肉患者(鼻息肉组)中的表达,并在鼻腔局部应用糖皮质激素治疗4周后观察其表达的变化;以同期手术的6例鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜组织作对照组.结果:糖皮质激素治疗前,鼻息肉组中PKC主要表达在嗜酸粒细胞(Eos)、血管内皮细胞及腺体细胞, Bcl-2及Bax蛋白主要表达于鼻黏膜腺体细胞、上皮层及Eos;与对照组相比,PKC、Bcl-2表达有明显差异(P<0.01),鼻息肉组PKC、Bcl-2在使用激素后,表达明显减低;Bax蛋白在使用激素后,表达明显增加.结论:鼻息肉组中PKC及细胞凋亡相关基因表达异常可能与鼻息肉的发生、发展有一定关系,糖皮质激素可能通过抑制鼻息肉组织中PKC的表达,调节相关凋亡基因的表达,减少Eos的浸润,达到治疗鼻息肉的效果.     

转录因子T-bet在变应性鼻炎患者鼻咽相关淋巴组织中的表达特征和意义

目的:探讨T-bet在变应性鼻炎(AR)和非变应性鼻炎(NAR)2组人群的鼻咽相关淋巴组s织(NALT)中的表达特征和意义。方法:分别用免疫组织化学单染色法检测AR患者和NAR人群扁桃体、腺样体和鼻黏膜中的T-bet阳性表达,用免疫组织化学双染色法检测CD4/T-bet表达。结果:在AR组扁桃体、腺样体和鼻黏膜组织中T-bet表达阳性率高于NAR组,差异有统计学意义(均P<0.05);AR组不同年龄之间扁桃体T-bet表达存在差异(P<0.05),其中主要是成年人T-bet表达低于儿童和青少年;在NAR组扁桃体组织T-bet表达没有年龄之间的差异。2组中扁桃体、腺样体和鼻黏膜中均有CD4和T-bet表达,大多数T-bet阳性表达位于CD4 T细胞中。结论:在AR患者NALT中T-bet的下调表达,与AR患者呼吸道局部黏膜免疫转录因子水平的Th1反应低下有关。NALT中的T-bet表达既与黏膜的变应性炎症有关,又与NALT的功能状态有关。