豚鼠膀胱中ICCs样细胞与逼尿肌自主兴奋收缩性的关系探讨

目的:观察在体外环境中使用ICCs(Interstitial cells of Cajal,ICCs)样细胞表面c-kit受体抑制剂Glivec后,豚鼠逼尿肌自主收缩活动的变化,探讨逼尿肌中ICCs样细胞的作用。方法:制作豚鼠膀胱逼尿肌肌条,并在Kreb液中孵育,在体外环境中添加c-kit受体抑制剂Glivec,通过张力换能器输入生理记录仪记录逼尿肌肌条自主收缩活动的变化。结果:与对照组比较,不同剂量Glivec孵育逼尿肌肌条后,逼尿肌肌条收缩幅度明显下降(100μmol/L:547.87±43.00mg,p<0.01,n=15;300μmol/L:197.47±39.20mg,p<0.01,n=15),逼尿肌肌条收缩频率也明显下降(100μmol/L:2.44±0.16次/分,p<0.05,n=15;300μmol/L:1.11±0.17次/分,p<0.01,n=15)。结论:ICCs样细胞在逼尿肌自发收缩中可能充当起搏细胞的角色。     

ICC样细胞在正常豚鼠上尿路的分布及对平滑肌收缩的影响

目的 研究正常豚鼠上尿路不同部位起搏细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的分布及其对局部平滑肌收缩的影响.方法 取10只豚鼠分别取肾盂输尿管交界处、上、中、下段输尿管组织,经全层铺片处理后,行ICCs特异性标志物KIT免疫荧光染色,对各段组织进行细胞计数,单因素方差分析各段ICCs的分布及其差异;再于上述部位(除输尿管壁内段外)分别剪取2 mm×6 mm肌条进行张力测定实验,比较各部位肌条收缩频率及幅度的变化,分析其与ICCs密度变化的相关性.结果 KIT染色阳性、形态与胃肠道起搏细胞ICCs相似的细胞(ICCs样细胞)存在于豚鼠上尿路的各段中,上尿路ICC样细胞密度在肾盂肾盏交界处、输尿管上、中、下段分别为(5.20±0.98)、(3.90±0.98)、(3.03±0.98)、(2.50±0.81)个/视野;各部位肌条收缩频率及幅度不同,但肾盂输尿管交界处、输尿管上段的肌条收缩频率及幅度较输尿管中段和下段明显增大,差异显著(P<0.05),输尿管中段和下段之间没有显著区别(P>0.05);相关性分析结果表明局部平滑肌肌条收缩频率和幅度与ICCs密度呈显著正相关性(P<0.05).结论 豚鼠上尿路平滑肌中存在ICCs,肾盂输尿管各部位ICCs的分布有显著差异,其与上尿路平滑肌局部肌条收缩有密切关系.     

体外培养豚鼠膀胱ICCs细胞表达NSE及nNOS

目的 探讨体外培养豚鼠膀胱组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)神经元特异性烯醇酶(neurone specific enolase,NSE)及神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的表达.方法 胶原酶消化法进行豚鼠膀胱组织ICCs细胞的原代培养,对照组为原代培养的膀胱平滑肌细胞,免疫荧光法进行c-kit及平滑肌肌动蛋白(SMA)染色,RT-PCR和Western blot法进行细胞培养后1、3 d和5 d的NSE及nNOS转录水平及蛋白水平的检测.结果 豚鼠膀胱ICCs细胞c-kit染色阳性,SMA染色阴性.豚鼠膀胱ICCs细胞NSE及nNOS转录及蛋白水平较高,膀胱平滑肌细胞不表达NSE及nNOS.结论 豚鼠膀胱ICCs培养细胞表达神经细胞特异性物质,提示豚鼠膀胱ICCs细胞参与膀胱功能调控.     

豚鼠膀胱组织ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin 43表达意义

目的 探讨体外培养豚鼠膀胱组织ICCs细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)间隙连接蛋白Connexin 43的表达.方法 胶原酶消化法进行豚鼠膀胱组织ICCs细胞的原代培养, 对照为原代培养膀胱平滑肌细胞,免疫荧光法进行两种细胞的特征性蛋白c-kit及平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)染色观察,免疫荧光法及Western blot法进行培养细胞Connexin43的检测.结果 豚鼠膀胱ICCs细胞特征性蛋白c-kit染色阳性,SMA染色阴性.豚鼠膀胱ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin 43表达水平较高,显著高于膀胱平滑肌细胞.结论 豚鼠离体膀胱ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin43高表达可能是其信号传递的重要物质基础.     

胞外钙及胞内钙库钙在膀胱ICCs细胞自发性钙瞬变中的作用

目的 观察离体活膀胱肌条铺片中卡哈尔间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)自发性钙瞬变,并检测胞外钙及胞内钙库钙对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬,变产生的机制.方法 制作离体膀胱肌条铺片,生理液灌流保持肌条铺片活性.待肌条自发性收缩活动出现后,Fluo-4负载肌条铺片,激光共聚焦显微镜观察其中ICCs细胞自发性钙瞬变,随后观察尼莫地平(Nimodipine)、2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-aminoethoxydip henylborate,2-APB)、雷诺丁(Ryanodine)、毒胡萝卜素(Thapsigargin)及无钙、高钙生理液对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬变产生的机制.结果 可见离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞和ICCs细胞均产生节律性A发性钙瞬变,平滑肌细胞钙瞬变频率较快,而ICCs细胞钙瞬变频率相对较慢.尼莫地平能完全抑制平滑肌细胞的自发性钙瞬变,但对ICCs细胞的自发性钙瞬变无显著影响.2-APB、雷诺丁、毒胡萝卜素及无钙生理液均可完全抑制ICCs细胞的自发性钙瞬变,高钙生理液可显著增加ICCs细胞自发性钙瞬变的频率.结论 细胞外钙离子通过非L型钙离子通道入胞及细胞内钙库放钙均参与ICCs细胞自发性钙瞬变的产生.     

β肾上腺素受体在豚鼠输尿管ICC细胞上的表达及功能研究

目的 研究β肾上腺素受体在豚鼠输尿管ICC细胞上的表达及意义.方法 通过离体肌条实验,观察对照组(正常豚鼠肌条)和实验组(Glivec选择性阻断ICC细胞的肌条)在β肾上腺素激动剂作用下输尿管肌条的收缩幅度和频率的变化;采用免疫荧光双标技术检测豚鼠输尿管β肾上腺素受体亚型(β1、β2 和β3)在ICC细胞上的表达情况.结果 非选择性β肾上腺素激动剂(异丙肾上腺素)作用后,对照组的收缩幅度[(0.070±0.035) g]较实验组的幅度[(0.100±0.028)g]下降显著(P<0.05),频率[(2.480±1.210)/min]较实验组的频率[(7.200±3.580)/min]下降亦显著(P<0.01),实验组在异丙肾上腺素作用下的舒张效应不如对照组显著;免疫荧光双标显示,输尿管ICC细胞仅表达β3受体亚型;选择性β3肾上腺素激动剂(CGP12177)作用后,对照组的收缩幅度[(0.068±0.023)g]和频率[(3.870±0 474)/min]较实验组的幅度[(0.115±0.031)g]和频率[(6.410±1.895)/min]均下降显著(P<0.05),实验组在CGP12177作用下的舒张效应不如对照组显著.结论 去甲肾上腺素能神经可能通过激活ICC细胞上的肾上腺素β3受体来调节输尿管收缩与舒张.     

外源性干细胞因子对逼尿肌活动低下大鼠Cajal间质细胞数及逼尿肌收缩力的影响

目的 探讨干细胞因子(stem cell factor,scF)对活动低下逼尿肌中Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)数及逼尿肌收缩力的影响.方法 将SD大鼠分为3组:对照组、逼尿肌活动低下(detrusor underactive,DU)组以及DU+ SCF组.采用ELISA检测血清SCF水平,免疫荧光组织化学法检测ICCs细胞数目,RT-PCR以及Western blot检测c-kit以及SCF的组织水平表达;体外肌条实验检测逼尿肌收缩能力.结果 活动低下逼尿肌组织中ICCs数显著减少(P＜0.05),SCF及c-kit表达显著降低(P＜0.05),逼尿肌收缩频率及收缩幅度显著下降(P＜0.05);外源性SCF可以显著增加活动低下逼尿肌组织中ICCs数(P＜0.05),增加SCF及c-kit的表达(P＜0.05),显著提升逼尿肌收缩幅度和收缩频率(P＜0.05).结论 外源性SCF可以影响活动低下逼尿肌组织中ICCs数,进而改变逼尿肌收缩能力.     

胃肠道起搏细胞ICCs在豚鼠泌尿道分布研究

目的研究胃肠道起搏细胞-Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)在豚鼠泌尿道的分布情况.方法取8只豚鼠肾盂、输尿管、膀胱和尿道组织,经铺片处理后,行ICCs特异性标志物KIT免疫细胞化学染色.结果KIT染色阳性,形态与胃肠道起搏细胞ICCs相似的细胞(ICCs样细胞)存在于豚鼠全泌尿道的黏膜下层和肌层.结论在豚鼠全泌尿道存在有ICCs样细胞分布,豚鼠可作为研究人泌尿道ICCs样细胞功能的理想动物模型.     

Cajal样细胞缺失对豚鼠逼尿肌自主收缩的影响及机制探讨

目的:观察在体内阻断c-kit信号途径造成豚鼠膀胱Cajal样细胞缺失后,豚鼠逼尿肌自主收缩活动的变化,探讨逼尿肌中Cajal样细胞的作用。方法:选取新生豚鼠20只,随机分成实验组、对照组。实验组在出生24h内的豚鼠腹腔内隔天注射c-kit抗体(ACK2)100μg,共5次,对照组腹腔内注射生理盐水,于第10天取膀胱。然后将两组豚鼠膀胱制作冰冻切片行免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察。制作豚鼠膀胱逼尿肌肌条,记录逼尿肌肌条自主收缩活动的变化。结果:10d后实验组与对照组豚鼠逼尿肌中Cajal样细胞在激光共聚焦显微镜下比较:实验组膀胱逼尿肌中Cajal样细胞数量减少甚至消失(P<0.01)。与对照组比较,实验组逼尿肌肌条收缩幅度、收缩频率明显下降(P<0.01)。结论:Cajal样细胞与豚鼠逼尿肌自发收缩活动密切相关。     

不稳定逼尿肌中ICCs细胞与逼尿肌收缩的关系

目的 研究不稳定逼尿肌中ICCs细胞的数量、分布形式的变化及其功能改变对逼尿肌肌条收缩的影响,初步探讨ICCs细胞与逼尿肌不稳定的关系.方法 近端尿道结扎法建立大鼠不稳定膀胱模型.分别于正常及不稳定膀胱的相同部位剪取3 mm×4 mm逼尿肌组织进行免疫荧光组织化学法检测c-kit阳性细胞的表达及分布情况;再于相同部位剪取2 mm×7 mm肌条进行收缩特性测定实验,并检测c-kit受体阻断剂对收缩的影响.结果 不稳定逼尿肌中c-kit阳性细胞的数量较正常逼尿肌明显增多(P＜0.05);正常逼尿肌中c-kit阳性细胞以散在分布为主,不稳定逼尿肌中以细胞网络形式存在;不稳定逼尿肌肌条的收缩频率和收缩幅度显著高于正常膀胱(P＜0.05);加入Glevic后,不稳定逼尿肌肌条的收缩幅度显著减弱(P＜0.05),频率无显著差异(P＞0.05).结论 不稳定膀胱中ICCs细胞的数量明显增加,主要以细胞网络的形式存在;不稳定逼尿肌肌条收缩幅度和频率明显增高,但其收缩幅度可以被Glevic削弱,提示ICCs与逼尿肌不稳定的发生有密切关系.     

重型颅脑损伤对小鼠小肠平滑肌自主节律运动和Cajal间质细胞的影响

目的通过观察重型颅脑损伤(severe head injury,SHI)后小鼠离体小肠平滑肌自主节律运动和小肠肠肌丛Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)数量及功能的变化,探讨重型颅脑损伤后肠动力障碍的可能机制。方法选取36只6～8周龄清洁级健康雄性昆明小鼠,体质量(35±5)g。重型颅脑损伤组(n=18)参照Feeney自由落体法制作小鼠SHI模型,假伤对照组(n=18)只开颅骨不致颅脑伤。于伤后1、3、7 d取材检测离体末端回肠平滑肌肌条运动的模式、幅度、频率及末端回肠ICC数量变化。结果①SHI后平滑肌自主节律运动的幅度1 d[(0.16±0.04)gvs(0.31±0.05)g]、3 d[(0.16±0.04)gvs(0.23±0.06)g]、7 d[(0.22±0.07)gvs(0.27±0.05)g]均显著低于假伤对照组(P<0.05);平滑肌自主节律运动的频率1 d[(30.23±3.71)min-1vs(34.55±1.99)min-1]、7 d[(30.34±4.56)min-1vs(33.10±0.81)min-1]显著低于假伤对照组(P<0.05),2组3 d时差异无统计学意义[(31.46±4.64)min-1vs(33.39±2.17)min-1,P>0.05];肌条运动模式紊乱、不规律。②SHI后各时相点ICC细胞数量较假伤对照组显著减少[1 d:(189±41)/mm2vs(303±10)/mm2;3 d:(156±39)/mm2vs(305±9)/mm2;7 d:(215±28)/mm2vs(325±42)/mm2;P<0.05],网络明显受损变稀薄。结论小鼠SHI后存在严重的小肠ICC受损,平滑肌自主节律运动紊乱,从而导致胃肠动力障碍的发生。     

胃动素对Cajal间质细胞引起的大鼠胃平滑肌收缩的作用

目的 观察Cajal间质细胞（ICC）在胃平滑肌收缩的关键作用,以及胃动素及ICC引起胃平滑肌细胞收缩的影响。方法：（1）采用大鼠胃体上1/3起博区及胃窦环行肌条在恒温灌流Kreb液中,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动。（2）用美蓝 光照选择性损伤ICC对胃平滑肌收缩的影响 。（3）损伤ICC后胃动素对胃肌收缩的影响。结果：（1）带有ICC的胃体起搏区和胃窦肌条记录到稳定的收缩活动,胃窦收缩频率和振幅较胃体起搏区高。（2）损伤胃环肌层ICC后,导致胃体起搏区和胃窦平滑肌收缩频率与振幅下降80%-90%,运动几乎消失。（3）胃动素0.03-0.25μg/ml明显增加胃体起搏区和胃窦的收缩频率和振幅,呈剂量依赖性增加。损伤ICC后几乎完全取消胃动素对胃肌的收缩作用。抗胃动素血清和阿托品可阻断胃动素的作用。结论 ICC是胃平滑肌运动的起搏细胞。胃动素通过ICC对胃肌收缩进行调节。     

异丙酚对人离体妊娠子宫肌自发性收缩的影响

目的　观察异丙酚对人离体妊娠子宫肌自发性收缩的影响。方法　将 2 0例已建立自发性规律收缩的离体子宫肌肉条随机分为对照组和异丙酚组 ,观察不同剂量异丙酚对离体子宫肌自发性收缩的影响。结果　异丙酚剂量为 0 .5、2μg/ m l时 ,对人离体妊娠子宫肌的自发性收缩无影响 ,当剂量为 5、10μg/ ml时可抑制子宫肌的收缩 ;随着异丙酚剂量的增加 ,抑制收缩作用加强 ,(14 0± 5 0 )μU/ m l的催产素可拮抗其抑制作用。结论　异丙酚以剂量 -依赖的方式抑制人离体妊娠子宫平滑肌的自发性规律收缩 ,催产素可拮抗其作用     

单侧输尿管部分梗阻对大鼠肾盂平滑肌功能的影响

目的测定大鼠单侧输尿管部分梗阻后肾盂平滑肌功能的改变。方法 80只雄性Wistar大鼠,其中40只作为对照组,另外40只大鼠建立单侧输尿管部分梗阻的动物模型作为实验组。模型建立成功后,分别于8周和16周分离取出肾盂进行离体肌条实验,测定肌条的收缩频率和收缩力。结果与对照组比较,实验组在8周时肾盂平滑肌收缩频率和收缩力均高于同期对照组（P〈0.05）,16周时均低于同期对照组（P〈0.05）。对照组8周和16周比较差异无统计学意义（P〉0.05）。实验组8周高于16周（P〈0.05）。结论单侧输尿管部分梗阻早期可能由于代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均增加,但在晚期可能失去了代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均降低。     

神经降压素对离体空、回肠平滑肌收缩的影响及其机制

采用离体肠管灌流法,探讨了神经降压素(NT)对家兔离体空、回肠平滑肌收缩的影响及其可能机制.结果表明:①微量NT即可抑制家兔离体空、回肠平滑肌的收缩;在空肠,短暂的抑制期过后代之以收缩幅度增大,但基线不变;在回肠则为持续约1min的收缩抑制反应.NT对空、回肠平滑肌收缩的影响皆具有明显的量效依赖关系.②纳洛酮几乎完全消除NT引起的空肠平滑肌的抑制后收缩增强效应(P<0.01),但不影响NT对空、回肠平滑肌的收缩抑制效应(P>0.05).③河豚毒素(TTX)、酚妥拉明和心得安皆不影响NT对空、回肠平滑肌收缩的效应(P>0.05).结果提示NT可能直接作用于空、回肠平滑肌膜上的NT敏感受体;空肠平滑肌的抑制后收缩增强效应与阿片肽及其受体相关.     

五苓散含药血清对家兔离体输尿管平滑肌作用的实验研究

[目的]观察五苓散含药血清对正常家兔离体输尿管平滑肌活动的影响,并初步探讨其作用机制。[方法]应用Powerlab生物机能信号采集处理系统,观察不同浓度五苓散含药血清及不同受体阻滞剂对离体输尿管平滑肌的影响。[结果]空白血清组和不同浓度五苓散含药血清组均可增强正常家兔离体输尿管平滑肌的张力和活动力,与空白对照组相比,均有显著性差异(P<0.01)。阿托品组和酚妥拉明组可阻断中浓度血清对输尿管平滑肌的收缩作用(P<0.05)。[结论]五苓散含药血清在离体情况下对正常家兔输尿管平滑肌具有收缩作用,有利于尿液的输送。     

Cajal细胞调节豚鼠胆囊动力的实验研究

目的证实豚鼠胆囊Cajal间质细胞(ICC)是胆囊平滑肌动力的起搏细胞。方法采用在体记录和组织钳细胞内记录的方式,研究胆囊自发电活动。亚甲蓝+光照的方法破坏胆囊ICC。胶原酶分离方法分离胆囊平滑肌细胞,并对分离的单个细胞进行形态学分析,联合激光共聚焦显微镜检测c-kit蛋白表达的方法鉴定ICC。膜片钳用于证明胆囊ICC能产生具有起搏活性的自发去极化电流。结果豚鼠胆囊在体记录的慢波每分钟(58±3.2)次,细胞内记录时可记录到慢波和动作电位。采用亚甲蓝+光照的方法后,慢波和动作电位明显减弱或消失。豚鼠胆囊新鲜分离的细胞经过贴壁之后,可见少量具有典型ICC光镜特征的细胞,占细胞总数的(5±1.2)%(n=12),(21±4)%细胞的c-kit蛋白表达阳性。全细胞膜片钳记录胆囊ICC的自发去极化电流,发现豚鼠胆囊ICC自发去极化电流频率每分钟(58.4±3.5)次(n=21),幅度约-(72±3.5)pA。结论豚鼠胆囊平滑肌中存在ICC起搏细胞,参与起搏胆囊自发节律性电活动和自动节律性收缩活动。     

抑制Kit信号通路对豚鼠膀胱间质细胞增殖及自主节律性运动的影响

目的 探讨抑制Kit表达对豚鼠膀胱间质细胞（interstitial cells,ICs）增殖及自主节律性运动的影响。方法 成年豚鼠分别予伊马替尼灌胃20d和40d,免疫荧光、Western blot和体外灌流观察间质细胞形态和功能的变化。结果 正常豚鼠膀胱壁内可见较多的间质细胞,用药20d和40d后,细胞数量逐渐减少,Kit蛋白的表达逐渐降低,同时,膀胱的自主节律性运动受到抑制。结论 膀胱内含间质细胞,这些细胞可能是膀胱运动的起搏细胞,其细胞表面表达的Kit蛋白对间质细胞的存活和功能维持都具有重要的作用。