突触后密度蛋白95在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白95(PSD-95)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况。方法:使用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用实时定量PCR和Western印迹法测定损伤后各时间段PSD-95 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫荧光双标方法显示PSD-95在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变。结果:PSD-95 mRNA及其蛋白水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,mRNA在5 d降到最低水平,蛋白水平在7 d最低。PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)在SCI后8 h存在着共定位关系,但在SCI后7d,PSD-95除与nNOS部分共定位之外,还高表达于损伤局部活化中性粒细胞和巨噬细胞。结论:SCI后PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且损伤后高表达在活化的炎症细胞,提示PSD-95参与了脊髓继发性损伤过程。     

突触后密度蛋白-95在大鼠脊髓发育过程中的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在大鼠脊髓发育过程中的表达变化以及细胞定位。方法:采用实时定量PCR(Real-Time PCR)和Western blot测定发育不同时期PSD-95 mRNA及蛋白水平的表达变化。采用免疫荧光染色显示PSD-95在发育脊髓中的细胞定位。结果:大鼠脊髓发育过程中PSD-95 mRNA及其蛋白水平从生后1d开始逐渐升高,在生后1周达高锋,成年后维持在一定的生理水平。免疫荧光双标证实PSD-95在生后发育早期主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN和突触的标记物synapsin存在共定位;成年后广泛分布于脊髓前角、后角以及白质,分别与NeuN和synapsin以及小胶质细胞的标记物OX-42共定位。结论:大鼠脊髓发育过程中PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,在生后发育早期主要表达在前角运动神经元和后角感觉神经元,提示PSD-95参与了神经元的发育和成熟。     

突触内与突触外NMDA受体在β-淀粉样蛋白减少海马神经元突触后密度蛋白-95表达中的作用

目的 研究可溶性Aβ寡聚体在海马神经元中对突触蛋白表达的影响.方法 用免疫细胞化学方法检测在NMDA拮抗剂与激动剂作用下,Aβ25～35对突触后密度蛋白(PSD-95)表达的影响.结果 Aβ25～35引起的PSD-95减少具有时间、剂量依赖性.PSD-95的减少可被非特异性NMDA受体拮抗剂(MK801)缓解;突触外NMDA受体被阻断时,也可显著缓解;而在突触内NMDA受体被阻断时,无显著性改变.结论 Aβ引起的PSD-95减少依赖NMDA受体活性,突触外NMDA受体可能参与Aβ诱导突触蛋白降解.     

突触后密度蛋白-93在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的 探讨突触后密度蛋白-93(PSD-93)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况.方法 使用改良Allen法制备大鼠急性脊髓损伤模型,致大鼠脊髓(T9、T10)重度撞击伤.采用实时定量PCR(Real-time PCR)和Western blotting测定损伤后各时间段PSD-93 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化.采用免疫荧光双标方法检测PSD-93在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变.结果 PSD-93 mRNA水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,在3d降到最低水平;蛋白水平则在SCI后显著上调,于1d达高峰.免疫荧光双标显示,PSD-93在SCI后除与神经型一氧化氮合酶(nNOS)存在着共定位之外,还高表达于损伤局部活化的小胶质细胞和星形胶质细胞.结论 脊髓损伤后PSD-93在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与nNOS、活化的胶质细胞存在共定位,提示PSD-93参与了脊髓继发性损伤过程.     

大鼠坐骨神经损伤后诱导型一氧化氮合酶表达的变化

为了探讨大鼠坐骨神经损伤后再生过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化及意义,本研究采用大鼠坐骨神经切断缝合模型,分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远端的神经,采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测损伤神经远端iNOSmRNA及其蛋白的表达水平。结果显示:假手术对照组坐骨神经中未见明显的iNOS阳性产物,iNOSmRNA表达极低。实验组神经损伤后iNOSmRNA及其蛋白的表达水平均明显增高(P<0.01),iNOS阳性产物的吸光度(A)值在术后7d达高峰。iNOSmRNA表达在术后1、3、7d维持较高水平,此后则明显下降。上述结果说明大鼠坐骨神经损伤后神经纤维中iNOS的表达增加,iNOS可能在周围神经损伤后的再生过程中起着一定的作用。     

糖尿病大鼠视网膜突触后致密物蛋白质95的蛋白表达及突触超微结构的改变

目的 观察糖尿病不同时期视网膜突触后致密物蛋白质95（PSD95）的蛋白表达水平以及视网膜突触超微结构的变化。方法 雄性3月龄SD大鼠56只,随机分为模型组和对照组,分别腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）和0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液,于4、8、12周取眼球,入4%多聚甲醛后固定2h,冷冻切片厚20μm,采用免疫组织化学检测PSD95蛋白表达的变化,显微镜观察视网膜全层并     

周围神经65KD蛋白在损伤性大鼠坐骨神经中的表达

目的：研究周围神经６５ＫＤ蛋白在损伤性大鼠坐骨神经中的分布与表达。方法：取损伤１５ｄ后的大鼠坐骨神经近侧端及远侧端,冰冻切片,与抗６５ＫＤ蛋白单克隆抗体与切片孵育后,加羊抗小鼠ＩｇＧＨＲＰ,ＤＡＢ反应成色。结果：大鼠坐骨神经远侧端及近侧端中均有６５ＫＤ蛋白阳性免疫反应产物,阳性免疫反应产物位于雪旺氏细胞。阳性免疫反应产物的密度及强度在神经的远侧端大于近侧端。结论：神经诱向因子６５ＫＤ蛋白由雪旺氏细胞产生。在损伤后神经近、远侧端都存在６５ＫＤ蛋白,远侧端的强度大于近侧端,这一浓度梯度可能是诱导再生的神经纤维定向生长过程中的一个重要因素。     

生长相关蛋白及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达

为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白 (GAP-4 3 )及其 m RNA的表达 ,采用正常 SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型 ,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织 ,以 Western Blot和 RT-PCR法检测 GAP-4 3及其 m RNA的表达。RT-PCR法检测结果显示 ,正常大鼠坐骨神经组织中 GAP-4 3 m RNA表达量较低 ,而损伤坐骨神经的远侧段 GAP-4 3 m RNA的表达量明显增加 ,于损伤第 2周时达高峰。用抗 GAP-4 3抗体进行 Western Blot检测 ,结果表明 ,正常坐骨神经 43 k Da处出现弱阳性反应的蛋白区带 ,而损伤后坐骨神经远侧段 43 k Da处阳性反应条带着色明显加深 ,损伤后第 3周时阳性反应着色最强。本研究结果提示 ,GAP-4 3及其 m RNA在大鼠损伤坐骨神经远侧段组织中表达增强 ,其 m RNA表达上调高峰在神经损伤后的第 2周 ;而其蛋白合成增加最为明显的时间是在神经损伤后的第 3周。     

大鼠脑缺血后突触体素与突触密度的关系

目的：观察脑缺血后,大脑顶叶皮质突触体素的表达与突触密度的关系,为脑缺血后监测突触密度的变化提供了一个间接方法。方法：采用大鼠脑缺血模型,用免疫组化及电镜方法。结果：脑缺血后,随缺血时间的延长,突触体素的表达逐渐减少;神经毡内突触数目逐渐减少。结论：脑缺血后,随缺血时间延长,突触体素表达减少,神经毡内突触数目逐渐减少,二者之间呈正相关,说明突触体素可作为监测突触密度的间接指标。     

去卵巢后雌性大鼠下丘脑视前区NOS阳性神经元形态学和突触素表达的变化

目的：为解释围绝经期的精神、神经症状提供实验依据。方法：采用免疫细胞化学方法显示去卵巢雌性大鼠下丘脑视前内侧区(MPA)和视前外侧区(LPA)内NOS阳性神经元,形态学改变以及突触素表达。结果：(1)去卵巢组和对照组大鼠的视前内、外区内可见大量NOS阳性神经元;(2)去卵巢动物的下丘脑内NOS阳性神经元突起长度比对照组的明显变短,分支明显变少;(3)去卵巢组动物下丘脑内突触素表达比对照组的明显减少。结论：大鼠去卵巢后,由于雌激素分泌减少,导致了NOS阳性神经元的突起减少和突触减少,结果NO介导的神经元信号传导失常,这些变化可能是引发围绝经期的精神、神经症状的原因之一。     

生后不同时期大鼠坐骨神经NGF基因的表达

采用 RT-PCR方法半定量分析生后 1、15、3 0、60、12 0和 3 60 d大鼠坐骨神经中 NGF m RNA表达的变化。结果表明 ,大鼠生后 1d坐骨神经中即有 NGF m RNA的表达 ;随着生后发育过程 ,NGF m RNA的表达量逐步增加 ,并呈严格单调上升的趋势。开始时增加速度较慢 ,但随鼠龄的增加而逐渐加快 ,至 49d时达到最快 ,然后逐渐减慢 ,到 12 0 d时已接近生后稳定表达水平。     

大鼠坐骨神经及其胞体信号传导子和转录激活子3和磷酸化酪氨酸的表达

目的：研究脊神经及其胞体中信号传导子和转录激活子３（ＳＴＡＴ３）的表达及其活化程度。方法；用免疫组化ＡＢＣ法显示成年大鼠坐骨神经，Ｌ４－５段脊髓和Ｌ５脊髓神经节中ＳＴＡＴ３和磷酸化酪氨酸，结果；坐骨神经轴突，脊髓前角外侧核神经元，脊神经节神经元胞体中ＳＴＡＴ３的含理较多。磷酸化酪氨酸的含昨很少。结论；脊神经及其胞体中存在一类酪氨酸激酶－信号传导子和转录激活子途径，但活化程度较低。     

大鼠坐骨神经局部缺血后其神经元胞体超微结构的病理变化

采用结扎大鼠一侧髂总动脉致该侧坐骨神经局部缺血的方法，研究了其相关神经元胞体超微结构的病理变化。结扎髂总动脉的实验动物分别存活４，８，１０，１４天后，经升主动脉灌流杀死，取出腰髓第５节段和第５腰脊神经节，透射电镜下观察了腰髓前角细胞和仍神经节细胞超微结构的变化。     

CDK11P58和Cyclin D3在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化

为了探讨大鼠坐骨神经损伤对CDKll^p58和Cyclin D3表达的影响，本实验将成年SD大鼠随机分为假手术组和夹伤组，运用Western blot结合免疫荧光组织化学双标技术，观察了坐骨神经损伤后坐骨神经夹伤段、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内CDKll^P58和Cyclin D3的表达变化。结果显示：（1）坐骨神经夹伤后，坐骨神经夹伤段及脊髓腰膨大前角、伤侧腓肠肌中的CDKll^58蛋白的表达先逐渐下降，后又逐渐上升；而Cyclin D3的表达无明显变化；（2）在假手术组的坐骨神经、脊髓腰嘭大前角和腓肠肌内都可观察到CDKll^P58和Cyclin D3的表达；而坐骨神经夹伤后，在上述部位可检测到CDKll^P58的表达强度明显减弱，但Cyclin D3无明显变化；（3）免疫荧光双标结果显示CDKll^P58和Cyclin D3在假手术组的坐骨神经、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内都有共存；而在坐骨神经损伤后这种共存强度明显降低。以上结果提示，坐骨神经损伤可影响坐骨神经及脊髓腰膨大、伤侧腓肠肌内CDKll^P58的表达，但对Cyclin D3无明显影响，表明CDKll^P58可能在周围神经损伤和修复中发挥重要作用。     

大鼠坐骨神经局部缺血对其轴浆运输的影响

目的：探讨周围神经局部缺血对其轴浆运输的影响。方法：采用Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只，用游离实验侧有神经的方法，制成周围神经缺血模型。于双侧腓总神经干注入３０％ＨＲＰ水溶５μｌ，动物分别存活１６、１８、２０、２、２４、４８ｈ后，经升主动脉灌流杀以腰髓４－６节段和腰４－６背根节，冰冻连切片，ＢＤＨＣ法成色。结果：实验侧在腰髓４、５节前角最早出现标记细胞的时间是２４，（对照侧是１８ｈ，实验则ＨＲＰ轴浆运输速     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化

为了观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase-I,β-1,4-GalT-I)在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化,本研究采用RT-PCR方法,从小鼠坐骨神经中特异性地扩增β-1,4-GalT-I cDNA片段并将其克隆到pGEM-T载体。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针。通过原位杂交和图像分析的方法,观察β-1,4-GalT-I mRNA在正常和夹伤大鼠坐骨神经中的表达及其变化。结果表明:β-1,4-GalT-I mRNA在大鼠坐骨神经的髓鞘中表达,在夹伤坐骨神经后1~2d,β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经的表达最高,于夹伤后1周开始下降,在夹伤后1个月恢复至正常水平。上述结果提示坐骨神经夹伤后β-1,4-GalT-I mRNA的表达发生变化,并且主要表达在坐骨神经的Schwann细胞。本研究结果为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定了基础。