X—连锁的淋巴细胞异常增生症（XLP）

X－连锁的淋巴细胞异常增生症（X-linked lymphoproliferative disease,XLP）为6种X－连锁的免疫缺陷病之一,由于Xq25突变使患对EB病毒感染不能产生有效的免疫应答能力,而引起淋巴细胞增生。XLP的临床表现形式多样,包括暴发性IM、丙种球蛋白异常、恶性淋巴瘤、再生障碍性贫血等,造血干细胞移植或骨髓移植是目前唯一能治疗XLP的方法,目前已克隆出一个与XLP相关的基因SH2DIA（DSHP）,其编码的蛋白质SAP能与SLAM（CDw150）相互作用而调节B细胞增殖,推测XLP的发病机制是由于遗传缺陷导致EBV感染后TH1和TH2免疫应答失衡所致。     

SH2A 基因对细胞信号转导的影响及其亚细胞定位

目的 研究Src同源域2(src homology 2，SH2)A基因在细胞信号转导中的作用并进行亚细胞定位。方法 通过RT—PCR方法扩增SH2A cDNA编码序列，构建真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A，利用脂质体转染肝癌Bel7402细胞、COS7细胞，检测蛋白酶C(protein kinaseC，PKC)、酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase，TPK)、丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)活性的改变；另构建pEGEP—SH2A，转染同前，荧光显微镜观察荧光定位。结果 测序结果显示真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A及pEGFP—SH2A中均含有SH2AcDNA编码序列；肝癌Bel7402细胞、COS7细胞转染pcDNA3．1-SH2A后，胞浆PKC的活性下降了40％左右，MAPK和TPK活性未见明显改变。荧光显微镜观察发现SH2A基因在细胞质中表达。结论 SH2A基因编码蛋白在PKC信号转导通路中起抑制作用；SH2A基因编码蛋白定位于细胞质。     

SH2B3基因标签单核苷酸多态性与汉族原发性高血压的关系

目的探讨SH2B衔接蛋白3(SH2B3)基因标签单核苷酸多态(SNPs)与汉族原发性高血压(EH)的关系。方法用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),对1 020例汉族人(EH患者和对照者各510例)SH2B3基因6个标签SNPs(rs7309325、rs11065898、rs10849947、rs2239196、rs2238154和rs739496)的多态性进行检测,运用遗传模型分析该基因与汉族EH的相关性。结果 rs2239196位点基因型和等位基因在EH组和对照组间的频率分布均具有显著性差异(Bonfferoni校正P0.05),Logistic回归分析结果显示T等位基因携带者的患病风险显著升高(OR=2.59,95%CI 1.36~4.96,Bonfferoni校正P0.05)。结论 SH2B3基因rs2239196位点T等位基因可能是汉族EH发生的危险因子。     

SH3GL2基因在人脑胶质瘤中表达的研究

目的研究SH3GL2基因的表达改变与人脑胶质瘤之间的相关性。方法选择42例人脑胶质瘤和26例正常人脑组织标本,应用荧光定量PCR和Western blot方法检测标本中SH3GL2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常脑组织标本相比,SH3GL2基因在人脑胶质瘤组织标本中的mRNA和蛋白的表达存在明显下调,结果具有统计学差异(0.05)。结论SH3GL2基因的表达改变与人脑胶质瘤相关,是一个新的候选的肿瘤抑制基因。P     

左侧视网膜剥夺鸽右视盖差异表达基因的克隆与鉴定

采用抑制消减杂交技术构建左侧视网膜剥夺后右视盖基因差异表达的文库 ,研究在无光刺激的条件下视盖发育受阻的分子机制。随机测序 2 1个序列 ,6个序列经反 Northern证实为真阳性 ,3个序列未发现明确的同源序列 ,另外 3个分别与 homosapiens SH3 GL2、G.domesticaus、 transthyretin有较高的同源性。 2 1个序列中 ,11个基因片段被分配序列号。这些结果为深入研究视觉发育提供了有益的线索     

人SH3GL2真核表达载体的构建及其对内皮细胞体外成管能力的影响

目的构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响。方法提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体p IRES2-EGFP。测序正确后,将重组质粒转染至人脑微血管内皮细胞,采用matrigel三维血管生成实验检测对内皮细胞成管能力变化。结果人SH3GL2基因克隆至表达载体pIRES2-EGFP,重组质粒双酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳验证片段大小为1058bp。将重组质粒转染人脑微血管内皮细胞,和对照组相比,pIRES2-EGFP-SH3GL2转染组内皮细胞成管能力显著降低(0.05)。结论成功构建人SH3GL2真核表达载体,人脑微血管内皮细胞过表达SH3GL2能够抑制内皮细胞的成管能力。     

Apelin在大鼠心肌缺血/再灌注损伤及缺血预处理中的作用

目的： 观察大鼠心肌缺血/再灌注损伤及预处理中新的小分子活性肽-apelin的变化，探讨其在该病理过程中可能的作用。方法: SD大鼠45只随机分成3组：缺血/再灌注(IR)组、预处理(IP)组和假手术（SH）组；心电图评估心律失常得分；放免法测定血浆及心肌apelin-36蛋白含量；免疫组化法观察心肌apelin-36的表达。结果: （1）心律失常得分：IP组（2.1±0.5）仅为IR组（3.6±0.8）的58.3%（P<0.01）。（2）血浆和心肌apelin-36浓度：IR组分别比SH组低36.1%和45.6%(均P<0.01)；IP组比IR组分别高18.9%和38.5% (均P<0.05)，但IP组仍分别比SH组低23.8%和24.7%(均P<0.01)。（3）免疫组化染色平均吸光度值：IR组比SH组低 65.1％(P<0.01)，IP组比IR组高80.8％(P<0.05)，但比SH组低36.8％(P<0.05)。（4）心率失常得分与心肌组织中apelin-36蛋白含量呈显著负相关(r= 0.847,P<0.01)。结论: 在心肌缺血/再灌注损伤及预处理过程中，大鼠血浆及心肌组织apelin表达下调，提示apelin在该病理生理过程中可能有重要作用。     

人源脂肪细胞SH2B1β基因的克隆表达

目的获取人源脂肪细胞SH2B1β基因序列,构建SH2B1β-pET28a（＋）重组表达质粒,在大肠杆菌中对其进行表达。方法利用RT—PCR方法从人源分化成熟的脂肪细胞RNA中扩增出SH2B1β的cDNA片段．并插入pET28a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达带6xHis标签的融合蛋白。结果PCR和酶切电泳鉴定结果显示SH2B1β基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与GenBank中的人源SH2B1β序列相符,SDS—PAGE电泳结果表明获得相对分子质量约75000的目的蛋白。结论成功获取了人源脂肪细胞的SH2B1β基因,并在BL21（DE3）中高效表达目的蛋白,为下一步表达纯化SH2B1β重组蛋白及蛋白的初步功能研究奠定基础。     

酪氨酸蛋白激酶Src家族研究进展

Src家族成员都是由原痛基因编码的,位于细胞质的非受体型酪氨酸蛋白激酶,参与细胞内多条信号传递途径。本文综述了Src家族膜定位机理、活性调节机制以及SH2和SH3功能域的结构和功能与Src家族的正常生理功能。     

cblN/Zap嵌合分子的构建及其对Jurkat细胞TCRζ的下调

目的:构建cblN/Zap嵌合分子,稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响。方法:提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA,以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段。以含有人全长cblcDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N端(cblN),并在其N末端带上含24bp的flag标签。用重叠延伸PCR法,在cblN基因内部的SH2两端引入BamHI和EcoRV酶切位点并克隆入pcDNA3.1( )中。再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2,即成为pcDNA3.1( )cblN/Zap。酶切鉴定及测序正确后,采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞,用RTPCR和Westernblot鉴定flagcblN/Zap的表达,用Westernblot检测其对细胞TCRζ表达的影响。结果:重组质粒pcDNA3.1( )flagcblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段。且测序证实其序列正确。脂质体法稳定转染Jurkat细胞后,检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达。表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。结论:重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。     

肠型胃癌不同发展阶段基因表达谱分析

目的研究肠型胃癌不同发展阶段基因表达谱的改变。方法应用基因芯片技术对3例肠型胃癌不同发展阶段基因表达特征进行检测分析。基因芯片包括576个cDNA克隆，其中包括506个靶克隆，51个是本课题组前期工作经消减杂交得到的克隆，另外455个克隆则根据它们在肿瘤中的作用而选取。应用Cluster和TreeView软件进行聚类分析，研究各种基因与胃癌发生发展不同阶段的关系。结果经基因芯片技术分析得到了181个差异表达基因，至少在胃癌发生发展的一个阶段其Cy5：Cy3的比值大于2或者小于0．5。其中48个基因上调，133个基因下调。聚类分析将差异表达基因分成了5个特征性的组，反映了不同阶段的基因表达特征。同时发现一些重要的差异表达基因，SEC23IP、LIPF、EST（BQ291520）、SLC5A1、PG、CXCR4、DICER1、SH3GL2以及IGF2R等。结论认识并发现了胃癌差异基因表达特征以及一些重要基因，对肠型胃癌发生发展及转移的进一步研究将具有重要作用。     

X连锁淋巴组织增生征基因的克隆

Ｘ连锁淋巴细胞增生征（ＸＬＰ）基因已分别被两个研究小组定位克隆，分别命名为ＳＨ２Ｄ１Ａ和ＳＡＰ，证实该基因有四个外显子，编码一种１２８个氨基到的蛋白质，其中含有一个ＳＨ２区，它能特异地结合了信号蛋白磷酸化的酪氨酸处，该基因的突变是发生ＸＬＰ的原因。     

低密度脂蛋白受体相关蛋白5基因的基因组结构

目的 确定2低密度脂蛋白受体相关蛋白5（low density lipoprotein receptor related protein,5 LRP5）的基因组结构。方法 以LRP5基因的cDNA序列为线索，采用计算机杂交方法首先通过对比分析该基因的cDNA序列和基因组序列，初步确定LRP5基因的基因组结构，按分析得到的基因组结构设计引物，扩增并测定外显子序列和外显子内含子接头序列，确定该基因的基因组结构。结果 LRP5基因的基因组DNA全长为131.6kb，含4有23个外显子和22个内含子；在编码序列中检测到3个单核苷酸多态，即位于第2外显子的A459G，位于第10外显子的C2220T和位于第21外显子的G4416C；LRP5基因含有4个已知的短串联重复序列，即D11S1917，D11S4087，D11S1337和D11S4178，它们分别位于该基因的5'端和第1，4，13内含子内。结论 LRP5基因的基因组结构的确定，为分析该基因突变和功能研究奠定了基础。     

胰岛素受体底物家族中的两个新成员

胰岛素受体底物蛋白参与多种激素、细胞因子的信号转导,可联系下游台SH2结构域的蛋白。它是一种极为重要的信号传递中介分子。胰岛素受体底物家族有4个成员。本文从基因结构、蛋白质结构介绍新发现的两个成员(IRS-3、IRS-4)的一些基本特征。     

外源性Nurr1基因过表达对SK-N-SH细胞分化作用的研究

为研究外源性Nurr1基因过表达对转染细胞的作用,探讨Nurr1基因调控多巴胺能神经元分化的机制。本研究应用:(1)pBK- RSV -Nurr1质粒经脂质体法转染SK- N- SH细胞,G418筛选;用RT PCR和免疫细胞化学方法检测基因转染细胞Nurr1mRNA及Nurr1蛋白的表达; (2)all- trans- RA、9- cis- RA、forskolin诱导基因转染细胞,RT PCR及免疫荧光细胞化学方法检测基因转染细胞MAP2 和TH的表达。结果显示: (1)经RT -PCR检测,基因转染细胞表达Nurr1mRNA;免疫细胞化学染色结果显示基因转染细胞表达Nurr1蛋白,说明外源性Nurr1基因在转染细胞内过表达;基因转染细胞形态与正常细胞相比没有明显变化,生长速度略有降低并表达成熟神经元的特异性标识物MAP2,但不表达多巴胺能神经元的特异性标识物TH。(2)尽管RA、forskolin诱导可促进Nurr1基因转染的SK- N- SH细胞进一步向成熟神经元分化,但不能诱导基因转染细胞表达TH。结论:单纯的Nurr1过表达可以促进SK- N- SH细胞向成熟神经元方向分化,但不足以激活TH基因转录。TH基因的转录激活还需要除Nurr1以外的其它细胞(或神经元)的环境或因子的共同作用。     

抑癌基因Syk(L) 在乳腺癌中具有转录抑制因子功能

目的:研究移位到细胞核内抑癌基因Syk(L) 在乳腺癌中的生物学功能，探讨Syk(L) 抑制乳腺癌发展的可能机制。方法:将Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域按正确读框插入到含有Gal4基因DNA结合功能域（Gal4-DBD）的pFA载体中，并在HEK293细胞中表达；利用Gal4荧光素酶报告基因的方法检测在乳腺癌细胞中Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域对基因转录的影响。结果:在乳腺癌细胞MB231和MB435中，与Gal4-DBD结合的Syk(L)可以下调启动子上含有Gal4结合位点的萤光素酶基因的表达，这种调节与Syk(L)的激酶活性无关，是通过Syk(L)的SH2功能域和KD功能域完成的。结论:在乳腺癌中，Syk(L)具有转录抑制功能，该功能与Syk(L)的激酶活性无关，是通过Syk(L)的SH2功能域和激酶功能域实现的。Syk(L)在乳腺癌中的抑癌作用可能与其转录抑制功能有关。     

信号传导的负性调节因子家族SOCS

细胞因子和相应受体结合 ,引发细胞内信号分子级联反应 ,而SOCS蛋白负性调节细胞因子的JAK STATs信号传导途径 ,且SOCS蛋白作用的直接靶点不同。另一方面STATs可以和SOCS基因的调控序列结合 ,调节SOCS基因的表达。小鼠SOCS基因敲除实验显示 ,该信号负反馈途径有助于调节细胞适度应答。结构上 ,SOCS中间为SH2结构域 ,C 末端是保守的SOCS盒 ,因N 末端差异较大而将SOCS家族分为 5组     

转接蛋白是免疫信号转导中的重要调节子

转接蛋白(Adaptor)通常被定义为具有蛋白-蛋白或蛋白-脂质相互作用结构域，而不具备酶活性的分子，这些结构域通常指Src同源结构域2(SH2)、Src同源结构域3(SH3)和PH(Pleckstrin Homology)等。但许多酶也可被认为是转接蛋白分子，因为它们除具有酶活性外，也含有蛋白或脂质的结合域，如SI℃家族蛋白酪氨酸激酶(PTL)中的LYN既具有酶活性，也具有一个SH2和SH3结构域。     

SH2-B抗体对肝癌细胞脂肪沉积的影响

目的探讨SH2-B抗体对肝癌HepG2细胞内脂肪沉积的影响。方法实验分为对照组、高脂(HF)组、HF+SH2-B抗体组。将人肝癌细胞(HepG2)培养于DMEM培养基中,培养48h后用油红O染色法定性观察细胞内脂肪沉积,测定各组OD值,Western blot检测各组SH2-B蛋白表达,并用RT-PCR法检测各组JAK2mRNA表达。结果与对照组比较,HF组和HF+SH2-B抗体组肝癌细胞内脂肪含量增加(0.05),但HF组明显高于HF+SH2-B抗体组(0.05)。SH2-B蛋白和JAK2 mRNA表达在HF组明显高于HF+SH2-B抗体组和正常组(0.0 5)。结论 SH2-B蛋白及其下游分子JAK2在高脂状态下的肝细胞内表达上调,SH2-B抗体减轻肝细胞脂肪沉积可能与降低SH2-B和JAK2活性相关。