TGF-β1/Smads和ERK表达异常在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用

目的: 研究转化生长因子β₁(TGF-β₁)/Smads和细胞外信号调节激酶(ERK)表达在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用及替米沙坦的干预效应。方法: 雄性 Wistar大鼠随机分为正常盐对照组(C组),8%高盐模型组和8%高盐+替米沙坦干预组(T组),每2周测量尾动脉压1次,根据尾动脉压又将8%高盐模型组分为模型高血压组(MH组)和模型正常血压组(MN组),喂养共24周。HE染色和Masson染色观察主动脉和肠系膜动脉重构。通过 real-time PCR测定主动脉中膜TGF-β₁、Smad2和Smad3和Smad7 mRNA表达,同时免疫组化法检测主动脉和肠系膜动脉中膜增殖细胞核抗原(PCNA)、TGF-β₁、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Smad7的蛋白表达和分布。结果: 与C组相比,MH组大鼠血压升高(P<0.05), MH组和MN组主动脉和肠系膜动脉中膜胶原容积分数(CVF)和中膜厚度(MT)显著增加(P<0.01),主动脉TGF-β₁、Smad2 和Smad7 mRNA表达增高(P<0.05),主动脉和肠系膜动脉中膜PCNA、TGF-β₁、p-Smad2/3和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05),Smad7表达明显降低(P<0.05);经替米沙坦干预后,主动脉和肠系膜动脉中膜CVF和MT减小(P<0.01),PCNA、TGF-β₁、p-Smad2/3和p-ERK1/2表达减少(P<0.05),Smad7 表达上升(P<0.05)。结论: TGF-β₁/Smads 和ERK表达异常共同参与高盐饮食致主动脉和肠系膜动脉重构的机制;替米沙坦抗动脉重构的作用可能部分是通过阻断血管紧张素Ⅱ1型(AT₁)受体影响TGF-β₁ /Smads 和ERK表达实现的。     

ERK和Smad通路在TGF-β1抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨ERK通路是否参与TGF-β/Smad 通路诱导的血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组：(1)对照组;(2)TGF-β1组;(3)ERK阻断剂(PD98059)组;(4)TGF-β1+ ERK阻断剂(PD98059)组。MTT法测细胞的增殖活性,Western blotting法检测VSMCs中细胞内核增殖抗原(PCNA)、Smad2/3、ERK1/2、Smad7蛋白表达及相关磷酸化蛋白含量,RT-PCR方法测VSMCs中Smad2、3、7mRNA的表达。结果: (1)各组PCNA蛋白表达和MTT法测得A值均低于对照组 (P＜0.05),TGF-β1+ ERK阻断剂组与TGF-β1组相比无显著差异。（2）与对照组相比,TGF-β1组p-Smad2/3、p-ERK1/2蛋白含量和Smad7蛋白表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组则明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组降低 (P<0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无显著差异。(3)与对照组相比,TGF-β1组Smad7 mRNA表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组和TGF-β1+ERK阻断剂组降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组表达降低(P<0.05)。各组内VSMCs 的Smad2、Smad3 mRNA表达无显著差异。结论: (1)TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但对TGF-β1的抑制平滑肌细胞增殖的作用无影响,可能有其它信号通路参与此过程。(2)ERK通路可通过蛋白和mRNA水平促进Smad7表达,反过来其又可促进ERK通路激活。(3)ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA水平无影响。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及bFGF与ERK1/2表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMC,MTT法测定细胞增殖活力;Western blot法检测bFGF与ERK1/2蛋白的表达.结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P＜0.05).与对照组比较,低、中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达均显著降低(P＜0.05),高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达进一步降低(P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达均无统计学意义(P＞0.05),高剂量组则显著降低(P＜0.05);高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达又较中剂量组显著降低(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论:辛伐他汀能抑制平滑肌细胞增殖,该作用是通过抑制bFGF及其相应信号通路ERK1/2蛋白的表达来实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一.     

虎杖苷抑制TGF-β/Smad/ERK信号通路挽救急性心肌梗死大鼠心肌纤维化

探讨虎杖苷(polydatin, PD)抑制TGF-β/Smad/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase, ERK)通路对挽救急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)大鼠心肌纤维化的影响。随机将大鼠分为对照(control, Ct)组、模型(Model)组、低剂量PD组(PD-L, 40 mg/kg)、高剂量PD组(PD-H, 100 mg/kg)、卡托普利治疗组(captopril, CTP, 20 mg/kg,阳性对照)及PD-H+TGF-β激动剂SRI-011381组(100 mg/kg+30 mg/kg)。除Ct组外其余各组均用左冠状动脉前降支结扎法构建AMI模型。通过小型动物心脏超声及Masson染色观察PD对大鼠心脏结构及功能的挽救效果;免疫组化法检测心肌组织中胶原蛋白的沉积情况;ELISA试剂盒检测血清中促炎细胞因子IL-6及TNF-α的分泌水平;Western blotting检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1、p-Smad2/3及p-ERK1/2蛋白的表达情况。结果显示,...     

睾酮诱导大鼠心肌细胞肥大反应并上调ERK1/2蛋白表达

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在睾酮对大鼠心肌肥大中的作用。方法用差速贴壁法分离及纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,IBAS图像分析心肌细胞表面积,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平。结果生理浓度的T作用于大鼠心肌细胞24 h后,细胞蛋白质含量3、H-Leu掺入和细胞表面积均增加,其中以10-8mol/L作用最强。雄激素受体拮抗剂氟他胺(Flu)10-5mol/L预处理2 h可抑制T诱导的心肌细胞蛋白质含量的增加,而Flu单独作用对心肌细胞蛋白质含量无影响。ERK1/2信号通路的特异性抑制剂PD98059 50μmol/L预处理2 h,可抑制T诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的增加;10-8mol/L T作用24 h使心肌细胞的ERK1/2的蛋白表达显著增加;10-5mol/L Flu预处理2 h可逆转T诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达的增加。结论生理浓度的T可以诱导心肌细胞肥大反应,该作用可能由ERK1/2信号通路介导。T通过雄激素受体(AR)上调ERK1/2蛋白表达。     

Caveolin-1蛋白及ERK1/2信号转导途径在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 研究caveolin-1蛋白及细胞外信号调节激酶（ERK1/2）在17β-雌二醇（E2）抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖中的作用。方法：在培养的VSMCs上,采用［3H］-TdR掺入法、Western blotting观察E2预处理前后血清（FCS）对VSMCs DNA合成及caveolin-1、MKP-1、磷酸化ERK1/2蛋白表达的影响,同时采用RT-PCR技术观察caveolin-1 mRNA的变化。结果：E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。RT-PCR及Western blotting结果显示,FCS可抑制caveolin-1 mRNA及蛋白表达,而E2预处理可增加其表达。同时,Western blotting结果还提示,E2预处理可增加MKP-1蛋白表达,抑制ERK1/2蛋白表达。结论：E2可通过增加caveolin-1及MKP-1蛋白表达,抑制磷酸化ERK1/2活性,促进其降解,来抑制VSMCs增殖。     

黏着斑激酶在2型糖尿病大鼠肾组织中的表达变化及意义

 目的：观察黏着斑激酶（FAK）在2型糖尿病（T2DM）大鼠肾组织中的动态变化,探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：复制T2DM模型,随机分为糖尿病8、12和16周(DM8、DM12和DM16)组,另设正常对照(NC)组和高脂高糖对照(HC)组。免疫组织化学检测肾组织中FAK、转化生长因子β1(TGF-β1)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2和纤维连接蛋白(FN)的表达;Western blotting检测FAK和p-FAK(Tyr397)蛋白水平;RT-PCR法检测肾皮质FAK mRNA的水平。结果：DM各组TGF-β1、p-ERK1/2和FN蛋白表达显著高于NC组及HC组(P<0.05);DM12和DM16组肾皮质FAK和p-FAK (Tyr397)表达均较NC组、HC组及DM8组显著增多(P< 0.05),且p-FAK(Tyr397)与总FAK蛋白表达趋势一致;FAK与TGF-β1、p-ERK1/2、FN呈显著正相关（P<0.01）。DM12和DM16组FAK mRNA比NC组、HC组及DM8周组表达明显增加(P< 0.05)。结论: 在2型糖尿病中,FAK可能作为TGF-β1的下游分子被活化,并通过活化ERK1/2使FN表达增多,从而参与了糖尿病肾病的发生发展。     

醛固酮及其受体拮抗剂对大鼠主动脉平滑肌TGF-β1表达的影响

目的 观察醛固酮及其受体拮抗剂对大鼠主动脉平滑肌转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,初步探讨原发性醛固酮增多症发生血管重构的可能机制.方法 采用皮下给药的方法建立醛固酮增多症模型,其中醛固酮组经微量渗透泵持续释放醛固酮(1 μg/h);拮抗组除给予等量醛固酮外,每日行螺内酯灌胃100 mg/(kg·d);对照组仅泵空白溶剂.尾套法检测大鼠血压,4周后处死所有大鼠,测定血钾、钠、醛固酮浓度及血浆肾素活性.分别采用RT-PCR、Western印迹检测主动脉平滑肌TGF-β1基因的表达.结果 ① 醛固酮组大鼠血压明显升高,血钾下降,血浆肾素活性降低,与对照组相比差异具统计学意义(P<0.01);② 醛固酮组主动脉平滑肌TGF-β1基因的表达水平明显高于对照组(P<0.01).螺内酯可抑制醛固酮的上述作用(P<0.01).结论 醛固酮及其受体拮抗剂螺内酯可能通过调节血管平滑肌TGF-β1的表达,从而影响血管重构的发生.     

TGF-β1激活的p38MAPK在TGF-β1上调人卵巢癌细胞PAI-1表达中的作用

目的:纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)在凝血、创伤修复、炎症和肿瘤转移中起重要作用。已有报道转化生长因子β1(TGF-β1)能通过Smad通路诱导PAI-1表达,但TGF-β1能否通过激活非Smad通路诱导PAI-1表达尚不清楚,因此本研究探讨了在卵巢癌细胞中TGF-β1激活的非Smad通路p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶(ERK)与TGF-β1上调PAI-1表达的关系。方法:用10μg/L TGF-β1处理卵巢癌SKOV3细胞和HO-8910细胞后,采用real-time PCR和Western blotting的方法检测PAI-1的表达,用磷酸化p38MAPK的抗体和磷酸化ERK的抗体检测p38 MAPK和ERK的激活情况,用p38 MAPK和ERK的特异性抑制剂SB203580和PD98059分别抑制其活性后,检测PAI-1的表达。结果:TGF-β1在卵巢癌细胞中可明显上调PAI-1mRNA和蛋白的表达,并可快速激活p38 MAPK和ERK。用p38 MAPK的抑制剂可以明显抑制TGF-β1上调PAI-1表达,但是抑制ERK活性对TGF-β1上调PAI-1表达没有明显影响。结论:TGF-β1激活的p38 MAPK通路参与了TGF-β1上调PAI-1的表达。     

转化生长因子β1及其受体和Smad2、Smad4蛋白在横纹肌肉瘤中的表达

转化生长因子—β1(transforming growth factor—β1，YGFβ1)是一种对各种细胞具有刺激或抑制作用的多功能细胞生长因子，其信号通路中某一成分缺失，抗增殖作用丧失而可诱发上皮性肿瘤。而在横纹肌肉瘤中，TGFβ1及其受体(TGFBR)的过表达或异常表达可能促进肿瘤的发展和演进。尚不清TGFβ1受体的下游分子Smads在横纹肌肉     

细胞外信号调节激酶1/2途径在血小板衍生生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原合成中的调节作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径调节大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原的合成。方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,流式细胞仪法检测细胞周期变化,免疫细胞化学法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变,Western印迹法检测ERK1/2及Phospho-ERK1/2表达的改变。结果:在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞代谢活性增强,细胞增殖指数(PI)增加,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,ERK1/2表达无明显改变,而Phospho-ERK1/2表达增强;25μmol/LPD98059预孵育1h抑制PDGF的以上刺激作用。结论:PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的增殖和胶原合成。     

转化生长因子-β_1在自发性高血压大鼠肾小管的表达及作用

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾小管的表达及其与肾小管间质纤维化的关系。方法:以同龄雄性正常血压大鼠(WKY)和SHR为研究对象,监测实验前后大鼠尾动脉血压、肾功能及β2-微球蛋白(β2-MG),并采用免疫组织化学方法检测TGF-β1在肾小管中的表达。结果:同WKY组比较,SHR大鼠组24周时β2-MG显著增高,尾动脉血压显著性增高,尿素氮和血肌酐的差异无显著性意义。TGF-β1在WKY组肾小管的表达无或极微量,而在SHR组肾小管的表达明显,且随高血压病程的进展显著性增加。结论:TGF-β1在SHR肾小管的表达显著增加,提示其可能是致肾问质纤维化的重要因素。     

重组鼠IL-1β和/或慢性缺氧刺激对大鼠颈动脉体中p-ERK1/2表达的影响

目的:观察慢性低压性缺氧和重组鼠白介素-1β(rmIL-1β)刺激对大鼠颈动脉体(carotid body,CB)中磷酸化细胞外信号调节蛋白激1/2(p-ERK1/2)表达的影响。方法:雄性SD大鼠分为8组,分别为缺氧刺激0、1、2、3周组和缺氧0、1、2、3周的同时伴rmIL-1β刺激组。对CB进行免疫组化染色,并用Western Blot法对p-ERK1/2进行半定量分析。结果:相对于缺氧0周组,缺氧2周和缺氧3周组大鼠CB中p-ERK1/2的含量明显增加。相对于单纯给予缺氧,缺氧同时给予rmIL-1β刺激后引起大鼠CB体中p-ERK1/2表达量的增加。结论:慢性缺氧和rmIL-1β刺激均可致颈动脉体p-ERK1/2上调;慢性缺氧伴rmIL-1β刺激比单纯缺氧或rmIL-1β刺激可引起p-ERK1/2更显著的增加。     

不同标本制备法对小鼠小肠组织中ERK1/2和pERK1/2免疫组织化学定位的影响

目的:本研究针对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员细胞外信号调节激酶(ERK1/2),以及磷酸化的ERK1/2(pERK1/2),探讨不给任何刺激时,用不同标本制备法检测ERK1/2在小鼠小肠组织中的免疫组织化学定位。方法:分别应用灌流固定脱水法(PF-DH),浸泡固定脱水法(IM-DH),快速冻结-冻结置换法(QF-FS)制备的标本,通过免疫组织化学显色检测ERK1/2和pERK1/2在肠上皮中的定位。结果:应用PF-DH法,ERK1/2位于几乎所有上皮细胞的核中,而pERK1/2在上皮细胞中很难检测到。应用IM-DH法,ERK1/2位于所有上皮细胞的胞质和核内,pERK1/2仅位于小肠绒毛顶部的上皮细胞内,而不存在于肠隐窝区域的上皮细胞中。应用QF-FS法制备的标本中,ERK1/2定位于所有上皮细胞的胞质中,而pERK1/2主要存在于肠隐窝部位和肠绒毛顶部的上皮细胞中。结论:本研究结果提示,用不同的标本制备方法会影响ERK1/2的免疫组织化学定位。通过比较不同标本制备方法取材的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2的免疫组织化学定位,得出QF-FS法可能为最接近活体状态的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2定位的方法。     

PP60C-SRC/ERK1/2信号通路调节大鼠精原干细胞活性

目的 研究PP60C-SRC通过磷酸化的细胞外调节激酶1/2 (p-ERK1/2)调节体外培养的9日龄大鼠精原干细胞的活性。方法 用MTT观察反义C-SRC脱氧寡核苷酸(ODNs)及PD98059对精原干细胞活性的影响;用Western blot检测PP60C-SRC和p-ERK1/2的表达。结果 与空白对照组相比,10 ?mol/L反义C-SRC ODNs作用12 h后精原干细胞活性下降了8.1 % (P＜0.05),10 ?mol/L PD98059作用24 h后精原干细胞活性下降了9.4 %(P＜0.01)。反义C-SRC ODNs组PP60C-SRC、p-ERK1/2蛋白表达与空白对照组相比分别下降了33.8 %和45.3 % (均P<0.01);10 ?mol/L PD98059作用精原干细胞24 h后,p-ERK1/2蛋白表达下降了34.5 %。结论 PP60C-SRC可能通过p-ERK1/2蛋白而调节精原干细胞的活性。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚和转化生长因子β_1的影响

目的 :探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )在自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚中的作用及氯沙坦对左心室肥厚和TGFβ1 水平的影响。方法 :2 0只SHR随机分成氯沙坦治疗组和未治疗组 ,每组10只 ,用免疫组织化学法检测SHR心肌TGFβ1 的表达及氯沙坦治疗后的改变 ,同时观察心肌肥厚的变化 ,并与正常WKY组对照。结果 :正常组心肌细胞胞浆内TGFβ1 表达呈弱阳性 ,SHR对照组呈强阳性 ,氯沙坦治疗组呈阳性反应。用图像分析仪计算其平均吸光度分别为 17.46± 2 .3 8、15 6.81± 2 1.75、67.19± 7.2 4,并且SHR左心室质量指数 (LVWI)高于WKY组 ,氯沙坦治疗组LVWI低于对照组。结论 :TGFβ1 在自发性高血压大鼠心肌中表达增强 ,而氯沙坦治疗可抑制其表达 ,从而可能延缓SHR左心室肥厚的病理学进展。     

CCl4促进大鼠肝星状细胞增殖及TGF-β1基因表达

目的进一步阐明四氯化碳(CCl4)引起肝纤维化的分子机制。方法用RT-PCR方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在肝星状细胞(HSC)的表达,用Western blot检测TGF-β1蛋白表达。用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布。结果CCl4作用于HSC后,细胞的增殖能力增加,细胞周期分布显示G0/G1期细胞减少而G2/M期细胞增多。同时,TGF-β1蛋白及mRNA的表达量明显增加。结论一定浓度的CCl4能够促进HSC增殖,上调TGF-β1蛋白及mRNA的表达,这可能是CCl4导致肝纤维化的分子机制之一。     

Asp基因对急性心肌梗死小鼠心功能及Erk1/2表达的影响

目的 探讨促酰化蛋白(Asp)基因对急性心肌梗死(MI)模型小鼠心功能的影响。方法 将C57BL/6野生型小鼠及Asp^-/-小鼠各10只分为C57、Asp^-/-、C57+MI和Asp^-/-+MI组。结扎冠状动脉前降支24 h后行心脏B超检测心脏功能,留取心脏标本前测量小鼠空腹血糖及体质量。伊文思蓝-TTC染色观察存活心肌、缺血心肌和心梗心肌的面积。ELISA法测定白介素8(IL-8)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血脂谱的表达。Western blot测定细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)和磷酸化p-Erk1/2蛋白的表达。结果 Asp^-/-及Asp^-/-+MI组的空腹血糖及体质量均分别高于野生型组(P<0.05)。MI后Asp^-/-组小鼠的射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)较野生型MI组小鼠降低,左心室舒张末内径(LVEDd)及左心室收缩末内径(LVESd)增加(P<0.05)。Asp^-/-+MI组缺血区面...     

ERK1/2信号转导途径在低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL-8基因表达中的作用

血管内皮细胞位于血流和血管壁之间,除受化学因素的调节外还受力学因素的影响。切应力可通过刺激相应的力学感受系统来调节内皮细胞某些基因的表达,其中包括诱导内皮细胞表达IL- 8。为了阐明MAPK信号途径中的ERK1/ 2信号通路是否参与调控低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因表达,采用Western blot分析了低切应力(4.2 0 dyne/ cm2 )处理不同时间内皮细胞ERK1/ 2的磷酸化水平及TPK抑制剂Genistein,MEK抑制剂PD980 5 9对其磷酸化的影响;采用定量RT- PCR检测内皮细胞经低切应力刺激或给予阻断剂后再行切应力刺激等处理后IL- 8基因的表达。结果显示:(1)低切应力处理可引起内皮细胞ERK1/ 2蛋白磷酸化水平上调,其磷酸化水平与切应力作用时间有关,具有快速、双向性的特点(在刺激10 min时达到高峰,2 h左右降至未刺激水平) ,阻断剂Genistein和PD980 5 9处理后,ERK1/ 2磷酸化水平与低切应力刺激10 min比较明显降低;(2 )阻断剂Genistein,PD980 5 9可显著抑制低切应力所致的内皮细胞IL- 8m RNA上调。结果表明低切应力可通过ERK1/ 2信号途径上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因的表达。     

缝隙连接在TGF-β1 诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨缝隙连接是否参与转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组:对照组、TGF-β₁组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-GA)组和TGF-β₁+18α-GA组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,免疫荧光技术观察细胞中缝隙连接蛋白(Cx)43和Cx40蛋白表达及定位,Western blotting法检测细胞中Cx43和Cx40蛋白表达, 染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测细胞的缝隙连接功能。结果: (1)与对照组相比,TGF-β₁组MTT法测得A值及细胞周期S期比例增高 (P<0.05),细胞增殖活性增强。18α-GA组降低(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+ 18α-GA组A值及S值比例均降低(P<0.05),细胞增殖活性减弱。(2)免疫荧光技术检测细胞中Cx43与Cx40蛋白表达呈阳性,两者共定位于胞浆。(3)与对照组相比,TGF-β₁组Cx43蛋白表达增强(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05),18α-GA组Cx43和Cx40表达均减弱(P<0.05),与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05)。(4)与对照组相比,TGF-β₁组缝隙连接功能明显增强(P<0.05);18α-GA组缝隙连接功能明显减弱(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。结论: TGF-β₁主要通过上调SHR血管平滑肌细胞Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能增强,从而促进了SHR血管平滑肌细胞的增殖,而Cx40蛋白表达可能不起主要作用。