补肾活血方对多囊卵巢大鼠卵巢MMP-2、9的表达干预研究

目的 观察补肾活血方对多囊卵巢(PCO)大鼠基质金属蛋白晦-2,9(MMP-2、9)表达的影响,探讨补肾活血方治疗PCO排卵障碍的机制.方法选用未成年24日龄SD雌性大鼠60只,随机分为模型对照组、西药对照组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组、正常对照组共5组.建立大鼠PCO病理模型,采用原位杂交法检潮各组卵巢组织中MMP-2、9基因的表达水平.结果 各组大鼠卵巢中卵泡的颗粒细胞和发育良好的卵泡膜细胞中均可检潮到MMP-2和MMP-9的杂交信号.模型组MMP-2与MMP-9表达强度明显超过正常组、补肾活血方高剂量组、低剂量组及西药对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);补肾活血方高剂量组MMP-2与MMP-9的表达接近正常组,差异无统计学意义(P>0.05);补肾活血方低剂量组、西药对照组与正常组相比,MMP-2与MMP-9的表达均较正常组高,差异具有统计学意义(P<0.05);补肾活血方低剂量组与西药对照组MMP-2与MMP-9的表达强度相似,但均超过补肾活血方高剂量组的表达强度,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 MMPs的过度表达可能是卵巢排卵障碍的关键因素,提示MMPs参与了卵巢排卵过程;大鼠PCO动物模型卵巢局部MMP-2、9异常高表达与PCO大鼠卵巢排卵障碍有关,补肾活血方通过抑制MMP-2、-9的异常高表达,从而发挥治疗多囊卵巢排卵障碍的作用,这可能是其促进卵巢排卵的机制之一.     

补肾活血方对PCOS大鼠模型卵巢中PAI-1mRNA表达的影响

目的探讨补肾活血方对大鼠PCOS模型卵巢局部纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI—1mRNA）表达的影响。方法选用未成年24d龄SD雌性大鼠60只,随机分为模型组、克罗米酚组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组、正常对照组5组。用Bogovich法建立大鼠多囊卵巢病理模型。以克罗米酚为对照。用原位杂交法观察补肾活血方对多囊卵巢大鼠局部PAI—1mRNA的影响。结果模型组卵巢局部PAI—1mRNA存在卵泡膜间质细胞显著增高,用补肾活血方高、低剂量与克罗米酚药后,卵巢局部PAI-1mRNA的表达明显降低．差异具有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。补肾活血方高剂量组与克罗米酚组比较,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）;低荆量组与克罗米酚组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,补肾活血方高、低剂量组比较,低剂量组卵泡膜间质细胞上PAI-1的基因表达增高更明显,但二者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PAI-1mRNA可能与多囊卵巢综合征的发病机制有关。以补肾活血立法的补肾活血方能降低多囊卵巢大鼠局部PAI—1mRNA的显著增高表达．降低PAI—1mRNA卵巢局部的作用。提示补肾活血方可能通过PAI—1mRNA途径促进卵巢排卵的机制。     

补肾活血方对多囊卵巢大鼠卵巢MMP-2，9的表达干预

目的观察补肾活血方对多囊卵巢（PCO）大鼠基质金属蛋白酶-2，9（MMP-2，9）表达的影响，探讨补肾活血方治疗PCO排卵障碍的机理。方法选用未成年24日龄SD雌性大鼠60只，随机分为模型对照组、西药对照组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组、正常对照组共5组，每组12只。建立大鼠PCO病理模型，采用原位杂交法检测各组卵巢组织中MMP-2，9基因的表达水平。结果经图象分析和统计处理，各组大鼠卵巢中卵泡的颗粒细胞和发育良好的卵泡膜细胞中均可检测到MMP-2和MMP-9的杂交信号。模型组MMP-2与MMP-9表达强度明显超过正常组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组及西药对照组（P〈0．05）；补肾活血方高剂量组MMP-2与MMP-9的表达接近正常组（P〉0．05）；补肾活血方低剂量组、，西药对照组与正常组相比，MMP-2与MMP-9的表达均较正常组高（P〈0．05）；补肾活血方低剂量组与西药对照组MMP-2与MMP-9的表达强度相似，但均超过补肾活血方高剂量组的表达强度（P〈0．01）。结论MMPs的过度表达可能是卵巢排卵障碍的关键因素，提示MMPs参与了卵巢排卵过程；大鼠PCO动物模型卵巢局部MMP-2，9异常高表达与PCO大鼠卵巢排卵障碍有关，补肾活血方通过抑制MMP-2，9的异常高表达，从而发挥治疗多囊卵巢排卵障碍的作用，这可能是其促进卵巢排卵的机制之-。     

补肾活血方对PCO大鼠卵巢COX-1mRNA表达的影响

目的探讨环氧化酶（COX—1）的表达在多囊卵巢卵泡破裂中的作用及补肾活血方治疗多囊卵巢排卵障碍的作用机制。方法选用未成年24d龄SD雌性大鼠60只。随机分为模型组、克罗米酚对照组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组、正常对照组5组,每组12只。用Bogovieh法建立大鼠多囊卵巢病理模型。以克罗米酚为对照,采用原位杂交法检测各组卵巢组织中环氧化酶COX-1基因的表达水平。结果模型组与正常组比较,卵泡内膜细胞COX—1 mRNA表达明显增加,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;补肾活血方高剂量组与正常组相比。差异无统计学意义（P〉0.05）。结论COX—1 mRNA在卵巢卵泡内膜细胞水平升高可能是PCOS发病的重要因素或环节。补肾活血方可能通过影响COX—1mRNA水平。从而发挥治疗多囊卵巢排卵障碍的作用．这可能是其促进卵巢排卵的作用机制之一。     

补肾活血方治疗大鼠糖尿病性勃起功能障碍的机理

目的研究补肾活血方对糖尿病(DM)性勃起功能障碍(ED)大鼠勃起功能的疗效及其作用机理。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、糖尿病模型组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方高剂量组,每组10只。糖尿病模型组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方高剂量组3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),构建糖尿病大鼠模型。正常组和糖尿病模型组进行生理盐水灌胃,补肾活血方低剂量组(3 g/kg)和高剂量组(6 g/kg)进行补肾活血方灌胃,疗程8周,8周后取材测定阴茎脏器指数和一抗、二抗浓度,采用Biopack电生理仪检测阴茎海绵体内压(ICP),蛋白印迹法检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p AKT)表达,TUNEL法检测阴茎组织凋亡,Masson三色染色观察阴茎组织病理改变。结果与糖尿病模型组比较,补肾活血方低、高剂量组阴茎脏器指数无明显差异(P0.05),补肾活血方高剂量组ICP和ICP与平均动脉压(MAP)的比值明显升高(P0.05)。与糖尿病模型组比较,补肾活血方低、高剂量组p AKT、AKT表达显著增加(P0.05),并且阴茎海绵体平滑肌凋亡率均有所下降,但差异无显著性意义(P0.05)。补肾活血方低剂量组与糖尿病模型组相比,胶原纤维比例显著下降(P0.05)。结论补肾活血方可增加糖尿病大鼠阴茎ICP,其机理与提高p AKT表达、抑制阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡、降低胶原纤维的生成有关。     

自拟补肾化痰方与补肾活血方对PCO大鼠性激素和P450arom及PAI-1的影响

目的观察自拟补肾化痰方与补肾活血方对多囊卵巢（PCO）大鼠血清性激素水平及卵巢局部因子P450arom和PAI-1表达的影响，探讨其对PCO模型大鼠的不同治疗作用并分析可能的作用机制。方法采用胰岛素联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）造模法制备PCO模型大鼠。随机分为PCO模型组、补肾化痰组、补肾活血组、西药组（二甲双胍）和对照组。运用放射免疫法测定血清性激素、胰岛素（INS）水平；免疫组化法测定卵巢组织中P450amm和PAI-1的表达。结果补肾化痰方可以降低PCO模型大鼠血清睾酮（T）水平，升高E2、FSH水平。可上调P450arom的表达，而补肾活血方可以降低PCO模型大鼠血清T、LH和胰岛素（INS）水平，可下调PAI-1的表达。结论卵巢局部因子P450arom和PAI-1在多囊卵巢的发生、发展中起重要作用，自拟补肾化痰方与补肾活血方从不同途径调整内分泌和卵巢局部因子的表达，从而促进卵泡的发育、成熟及排卵。     

补肾健脾活血方对大鼠悬尾试验性骨质疏松和肌萎缩影响的实验研究

目的:探讨补肾活血健脾方对悬尾大鼠骨密度和肌萎缩的影响。方法:采用SPF级健康SD大鼠48只,随机平均分为健脾活血方高剂量组,低剂量组,造模组和空白对照组,每组12只。除空白对照组外,其余各组均选用大鼠悬尾实验作为废用性骨质疏松和肌萎缩模型的建立动物模型造模共计28 d,造模期间,补肾健脾活血方高剂量组给予补肾健脾活血方提取物2.50 g/(kg·d)灌胃,补肾健脾活血方低剂量组给予补肾健脾活血方提取物1.25 g/(kg·d)灌胃,造模组和空白对照组给予等剂量饮用水灌胃,每天1次。28 d后,全部大鼠腹腔采血后处死,取右侧股骨以及L1~4椎骨和完整分离左右侧比目鱼肌。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清成骨标记物血清骨形成蛋白2(BMP-2)、骨钙素(OCN)及破骨标记物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)进行测定,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠股骨成骨相关基因OCN,Runx-2的表达,双能X线检测各组椎体和股骨骨密度的表达,并测量比目鱼肌湿重与横截面积测量。结果:与造模组相比,健脾活血方高剂量组大鼠右侧股骨和椎体BMD显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组血清TRAP呈显著性降低(P<0.01,P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组大鼠股骨OCN和Runx-2 mRNA的表达显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组和低剂量组左侧和右侧比目鱼肌平均湿重显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型和II型纤维横截面积显著性增高(P<0.05),健脾活血方低剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型纤维横截面积相比造模组呈显著性增高(P<0.05)。结论:补肾活血健脾方可以防止失重引起的骨密度降低和肌萎缩,为临床用于治疗废用性骨质疏松和肌萎缩奠定了理论基础。     

补肾活血组方对大鼠卵巢颗粒细胞的作用

目的探讨补肾活血组方对雷公藤致卵巢储备功能下降大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关基因Bcl-2及Bax表达的影响。方法 12周龄SD雌性大鼠60只,随机分6组：补肾活血组方低、中、高剂量组,六味地黄药组,正常组,雷公藤组。观察大鼠卵巢组织病理形态、卵巢颗粒细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax的表达。结果补肾活血组方中、高剂量组卵巢组织的颗粒细胞层厚度和闭锁卵泡/生长卵泡的比值与雷公藤组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）。补肾活血组方中、高剂量组的卵巢抑制凋亡基因Bcl-2表达增强、促凋亡基因Bax表达减弱,与雷公藤组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）。结论补肾活血组方中、高剂量组能促进卵泡成熟,延缓颗粒细胞衰老,提高卵巢的储备功能。     

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达的影响

目的观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响。方法运用补肾化瘀方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达。结果模型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);补肾化瘀方中、高、低剂量组及妈富隆组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);其中补肾化瘀方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果最佳。结论补肾化瘀方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高雄血症,逆转卵泡的发育异常,使排卵成功。     

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响

目的 通过观察补肾化瘀方对大鼠卵巢颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白的表达,探讨中药对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢局部的影响及作用机制.方法 应用补肾化瘀方作用于以丙酸睾酮联合HCG诱导PCOS大鼠模型,采用免疫组化法,检测PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠卵巢体质量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,补肾化瘀方组卵巢形态接近正常组.补肾化瘀方能明显提高PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,补肾化瘀方各剂量组与模型组和妈富隆阳性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01),而中剂量组与正常对照组比较,差异均无统计学意义.结论 补肾化瘀方能提高PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,可能与补肾化瘀方具有促进卵泡发育和排出的作用机制有关.     

芪黄汤对高脂血症大鼠血脂影响的实验研究

目的观察芪黄汤对高脂血症大鼠血脂的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为正常组、高脂血症模型组、芪黄汤小、中、大剂量组及多烯康组。测定各组大鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)。结果经芪黄汤小、中、大剂量治疗的高脂血症大鼠的TC、TG和LDL-C均非常显著降低(P<0.01)。结论芪黄汤可有效地降低高脂血症大鼠的TC、TG和LDL-C的含量。     

加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响

[目的]探讨加减抵当汤对IR大鼠肝脏InRmRNA表达的影响。[方法]造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、文迪雅组,用RT-PCR方法检测加减抵当汤对IR大鼠肝脏InRmRNA表达的影响。[结果]加减抵当汤高、中剂量组能明显上调IR大鼠肝脏InRmRNA的表达（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]加减抵当汤能上调InRmRNA的表达,可能是其改善IR的机理之一。     

补肾活血汤在多囊卵巢综合征促排卵中的疗效

目的补肾活血汤在多囊卵巢综合征促排卵方案中的疗效。方法将120例多囊卵巢综合征不孕患者随机分为西药组和中药组各60例,西药组给予枸橼酸氯米芬促排卵治疗,中药组在西药组基础上加用补肾活血汤,监测两组治疗后卵泡大小、排卵率、妊娠率及流产率的变化。结果中药组治疗后卵泡增大、排卵率及妊娠率增高、流产率降低与西药组治疗后比较均有统计学意义(P﹤0.05)。结论补肾活血汤能较好地促进卵泡发育、软化卵巢包膜、诱发排卵。     

坤宁安对围绝经期模型大鼠性腺形态影响

目的：观察坤宁安对围绝经期模型大鼠性腺形态的影响,探讨坤宁安治疗围绝经期综合征的疗效及作用机制。方法：13~16月龄的Wistar大鼠40只,以自然老化法的方法建立围绝经大鼠模型,随机分为坤宁安高（n=10）、低剂量组（n=10）、西药对照组（n=10）与模型组（n=10）;另选3~5月龄的Wistar大鼠10只作为青年对照组。坤宁安高、低剂量组分别予以坤宁安3.75、0.94 g/kg日1次灌胃治疗,西药对照组予以倍美力0.065 mg/kg日1次灌胃治疗,模型组和青年对照组均予以等体积的生理盐水灌胃,连续4周。治疗结束后称取各组卵巢及子宫重量,苏木素-伊红（HE）染色法观察各组卵巢形态变化。结果：与青年对照组相比是显著降低的（P〈0.05）。卵巢HE染色显示与模型组相比,坤宁安高、低剂量组卵巢闭锁卵泡显著减少,黄体数量增多,其中高剂量组疗效优于低剂量组。结论：坤宁安可显著增加围绝经期综合征模型大鼠卵巢及子宫重量,减少闭锁卵泡的数量,增加黄体数量,改善卵巢功能,可用来防治围绝经综合征。     

滋阴固本方对急性EAE模型大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

目的 :观察滋阴固本方对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脊髓损伤后轴突生长抑制因子(Nogo-A)蛋白表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠72只,按随机数字表法分为6组,建立EAE模型。观察各组大鼠体质量、饮食量和神经行为学评分、脊髓组织的病理变化、脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达情况。结果:各组大鼠的行为学改变与模型组比较,各中药组发病率降低,临床症状改善、体质量下降(P0.01);神经功能评分中药低剂量组与高、中剂量组比较差异有统计学意义(P0.01)。各组大鼠Nogo-A免疫组织化学结果:模型组可见Nogo-A蛋白的表达呈强阳性,与之比较,激素组与中药高、中剂量Nogo-A蛋白的表达相对减少(P0.01),中药高、中剂量与低剂量比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:滋阴固本方在急性期对Nogo-A蛋白的表达有明显抑制作用,使受损的神经系统得到良好的修复。     

益髓理血饮减少二甲基苯蒽诱导的骨髓增生异常综合征大鼠骨髓细胞凋亡

目的：探索中药复方益髓理血饮对二甲基苯蒽诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS) 模型大鼠骨髓细胞凋亡的作用。方法：采用化学诱变剂二甲基苯蒽诱导建立大鼠MDS模型,并分为正常对照组、模 型+PBS组、模型+复方皂矾丸组、模型+益髓理血饮低剂量组和模型+益髓理血饮高剂量组,每组12 只。于造模第14 天开始分组连续给药30 d。观察各组大鼠一般情况,给药后的第31天将各组的大鼠处死,显微镜下观察骨髓细胞的病 理学改变,检测各组大鼠外周血细胞、免疫组织化学检测Bcl-2和Bax蛋白表达,流式细胞仪检测骨髓细胞凋亡情况。 结果：与正常对照组相比,模型+PBS组大鼠骨髓细胞病态造血,外周白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板下降明 显,促凋亡蛋白Bax明显增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P<0.01),与模型+PBS组相比,治疗各组大鼠外周白细 胞、红细胞、血红蛋白和血小板升高,促凋亡蛋白Bax明显减少,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加(P<0.05或P<0.01),尤 以模型+益髓理血饮高剂量组最为明显(P<0.01);与正常对照组相比,模型+PBS组骨髓细胞的总凋亡率、早期凋亡率 和晚期凋亡率均有所增加(P<0.01),治疗各组的凋亡率均有所下降(P<0.05或0.01),尤其总凋亡率和早期凋亡率下降更 为明显,仅有益髓理血饮对降低晚期凋亡率疗效明显(P<0.01),且高剂量组优于低剂量组。结论：中药复方益髓理血 饮治疗MDS能改善其外周血细胞情况,降低促凋亡蛋白Bax表达,升高抑凋亡蛋白Bcl-2表达,减少骨髓细胞凋亡。