APP17肽对APP转基因小鼠突触相关蛋白表达的影响

目的研究APP17肽对APP转基因小鼠(APP V717 I)海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法将3 mon龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组(皮下注射0.16 mg.kg-1.d-1,每周3次),并以相同年龄和背景的C57BL/6 J小鼠做正常对照组。7 mon后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行PSD-95、Shank1蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于治疗组和正常对照组,且模型组小鼠大脑海马CA4区中的PSD-95、Shank1阳性反应神经元明显减少,染色浅;APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在突触后致密区蛋白表达异常,由此引起突触功能损害,进而导致记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过提高PSD-95、Shank1的表达,使突触的损伤接近恢复正常。并能改善小鼠的记忆、学习能力。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化模型小鼠海马超微结构的影响

目的　观察APP17肽 (App17p)对D 半乳糖 (D gal)脑老化模型小鼠海马超微结构的影响。方法　用D gal制造小鼠脑老化模型 ,并皮下注射APP17p ,8wk后取小鼠海马CA1区进行电镜观察。结果　①D gal组小鼠海马神经元轴索微管结构出现明显溶解 ;线粒体数量多于APP17p +D组 ,但差异无显著性 ;线粒体肿胀并有空泡变性 ,电子密度增高 ;核糖体及粗面内质网明显减少 ;神经毡中突触明显减少 ,与APP17p +D组相比 (P <0 0 5 ) ;海马神经元的结构未发现异常变化。②APP17p +D组小鼠海马神经元轴索中微管结构正常 ,微丝清晰 ;线粒体膜及结构正常 ,线粒体脊清晰 ;粗面内质网、核糖体丰富 ;神经毡中突触增多 ,突触内可见大量清亮突触小泡。结论　D gal能引起小鼠海马超微结构异常 ;APP17p对此有防治作用     

氯化锂降低氧化应激水平改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能的机制

目的锂(Li)对神经退行性疾病有潜在神经保护作用,但其分子作用机制尚不清楚。在阿尔茨海默病(AD)发病机制中,氧化应激(OS)水平升高及β-淀粉样肽(Aβ)产生过多是重要的导致患者智力低下的致病因素之一。本课题探讨经氯化锂(Li Cl)处理的APP/PS1双转基因小鼠是否能减少Aβ的生成,以及其是否能通过调控糖原合成激酶-3β(GSK3β)/核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧合酶1(HO-1)通路来减轻该小鼠脑组织OS损伤,并逆转APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力水平的降低。方法应用免疫组化方法检测各组小鼠脑组织中老年斑的数量;用PCR法扩增模板DNA进行双转基因突变鉴定,筛选APP/PS1双转基因小鼠;转基因及野生型小鼠随机分为4组,即野生型组、野生型+Li Cl处理组、转基因+Li Cl处理组、转基因组。野生型+Li Cl处理组及转基因+Li Cl处理组小鼠4月或8月龄时每天1次用Li Cl灌胃处理(100 mg·kg~(-1),为期2个月),野生型组及转基因组小鼠则用同等容量的生理盐水进行灌胃处理;蛋白印迹法检测动物脑组织中GSK3β,p-GSK3β(ser9),Nrf2及HO-1蛋白表达水平;用生物化学方法测定各组小鼠脑组织与血清中SOD和GSH-Px活性及MDA含量;ELISA法测定脑组织内不可溶性Aβ含量;尼氏染色检测各组小鼠脑组织神经元尼式小体密度;行为学实验检测各组小鼠学习记忆能力。结果与野生型小鼠相比,6月及10月龄APP/PS1双转基因小鼠脑组织内可见明显的老年斑,不可溶性Aβ含量较高,以10月龄小鼠尤为明显(P<0.05);同时GSK3β活性明显增加,Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低,脑组织及血清中SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量增加(P<0.05);且转基因小鼠脑组织神经元中尼式小体密度明显减少,其学习记忆能力降低。而对4月或者8月龄APP/PS1双转基因小鼠予以Li Cl进行灌胃处理2月后,与未经处理的同龄APP/PS1双转基因小鼠相比,其脑组织内可见老年斑、不可溶性Aβ含量下降(P<0.05);同时APP/PS1双转基因小鼠脑组织中GSK3β活性、Nrf2及HO-1蛋白表达水平的改变被逆转,转基因动物脑组织和血清OS水平降低(P<0.05),且尼式小体密度明显增加,小鼠空间学习记忆能力提升(P<0.05)。结论 APP/PS1转基因小鼠体内氧化应激水平升高伴随空间记忆力及学习能力下降及脑组织神经元中尼式小体密度减少;Li Cl能减少APP/PS1双转基因小鼠脑组织中Aβ含量,从而减少Aβ在AD发病中的毒性作用,同时Li Cl能预防及逆转APP/PS1双转基因小鼠脑组织中GSK3β/Nrf2/HO-1通路表达的下调,提高机体抗氧化应激能力,减少OS损伤,从而改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,增加尼式小体密度,发挥神经保护作用。     

APP17肽对谷氨酸引起神经毒作用的影响

目的　通过观察APP17肽和谷氨酸对人神经母细胞瘤株SY5Y生长及NT 3、NF表达的影响 ,初步证实APP17肽对谷氨酸引起的神经元毒性具有一定保护效应。方法　MTT代谢率、LDH漏出率测定、细胞计数 ,WesternBlot观察SY5YNT 3、NF表达。结果　谷氨酸可使MTT代谢率降低、细胞计数减少 ,LDH漏出率升高 ,NT 3、NF表达减少 ,加入APP17肽可使上述指标恢复或接近正常。结论　谷氨酸对神经元有毒性作用 ,而APP17肽可减轻这种损伤 ,对神经元产生保护作用。     

P13K特异性抑制剂Wortmannin对APP17肽信号传导通路的影响

目的：利用P13’K的特异性抑制剂Wortmannin阻断SY5Y细胞信号转导通路，观察APP17肽对SY5Y生长的影响，探讨APP17肽的作用机制。方法：体外培养SY5Y细胞，分为对照组、Wortmannin组（3μmol／L）、APP17肽组（30μmol／L）、APP17肽加Wortmannin组、11．5mmol／L葡萄糖组、葡萄糖加APP17肽组、葡萄糖加Wortmannin加APP17肽组，每组8～12孔。观察MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积，进行统计学分析。结果：1．APP17肽可使SYSY细胞MTT代谢率升高、LDH漏出率降低、SYSY细胞轴突长度和胞体面积增加，经Wortmannin作用后，其作用减弱。     

APP17肽地谷氨酸引起神经毒作用的影响

目的 通过观察ＡＰＰ１７肽和谷氨酸对人神经母细胞瘤株ＳＹ５Ｙ生长及ＮＴ－３、ＮＦ表达的影响,初步证实ＡＰＰ１７肽对谷氨酸引起的神经元毒性具有一定保护效应。方法 ＭＴＴ代谢率、ＬＤＨ漏出率测定、细胞计数,Ｗｅｓｔｎｅｒｎ Ｂｌｏｔ观察ＳＹ５ＹＮＴ－３,ＮＦ表达。结果 谷酸可使ＭＴＴ代率加入ＡＰＰ１７肽可使上述指标恢复或接近正常结论 谷氨酸对神经元有生作用,而ＡＰＰ１７肽可减轻这种损伤,对神经元产生保     

APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察心肺复苏术后大鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及APP17肽对NGF、BDNF表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术(cardiopulmonary re-suscitation,CPR)。♂性Wistar大鼠18只,随机分3组:手术对照组(A组)、心肺复苏组(B组)、心肺复苏+APP17肽组(C组),复苏至自主循环恢复(return of spontaneous circula-tion,ROSC)时静脉注射APP17肽10μg·(300g)-1。应用免疫组化方法观察各组大鼠复苏2h后海马神经元表达NGF、BDNF情况。结果与对照组(A组)相比心肺复苏组(B组)大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低(P<0.05);心肺复苏+APP17肽组(C组)NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组(P<0.01)。结论心肺复苏模型大鼠自主循环恢复2h海马神经元NGF、BDNF表达降低,APP17肽能恢复神经元NGF、BDNF的表达,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。     

2型糖尿病KKAy小鼠海马神经元存活信号转导途径的异常及APP17肽对其的改善作用

目的　观察APP17肽对 2型糖尿病KKAy小鼠大脑海马神经元一些信号转导蛋白表达的影响。方法　将KKAy小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP17肽治疗组 (DM +APP17P组 )。APP17肽皮下注射 ,每周 3次 ,每次 8μg·kg-1。 12wk后将 3组小鼠颈部离断 ,处死 ,冰浴中快速分离海马组织 ,匀浆后 ,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测 ,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果　DM组 pMAPK的表达低于C组和DM +APP17P ;CREB、pCREB、Bax、Bcl 2的表达 3组之间差异无显著性。结论　 2型糖尿病KKAy小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常 ,主要表现为Ras途径和PI3 K两条途径的异常。这种信号转导途径的异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善 ,不出现凋亡状态 ;App17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分 ,从而使存活信号转导通路恢复正常     

二苯乙烯苷对APP转基因小鼠学习记忆能力和脑内β-淀粉样肽表达的影响

目的:观察从中药何首乌提取的二苯乙烯苷(TSG)对APP转基因小鼠学习记忆能力、β-淀粉样肽(Aβ)和分泌酶的影响。方法:将APP转基因小鼠随机分为模型组,TSG 0．05和0．2 g·kg-1组,同月龄同背景C57BL／6J小鼠为对照组,各组小鼠从4月龄始连续灌胃给药6个月。用morris水迷宫观察小鼠学习记忆能力,用免疫组化法观察小鼠海马APP,Aβ,β位点剪切酶(BACE,即β-分泌酶)和代表γ-分泌酶的早老蛋白-1(PS-1)的表达。结果:10月龄转基因小鼠模型组与正常对照组相比,模型组学习记忆能力明显降低,海马APP,Aβ和PS-1的表达明显增强。TSG能显著改善模型小鼠学习记忆能力,降低脑内APP、Aβ的生成,抑制海马PS-1的表达。在正常对照组、模型组和TSG组之间,β-分泌酶表达没有明显差异。结论:TSG能减少脑内Aβ形成,改善学习记忆能力,作用机理可能与减少APP生成和抑制γ-分泌酶的表达有关。     

APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS和PI3K表达的影响

目的通过对胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)在海马表达的观察,研究APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元信号转导途径上游步骤的影响。方法小鼠随机分为3组,每组22只:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、APP17肽治疗组(D+P组)。D、D+P2组每日皮下注射半乳糖100mg·kg-1。D+P组每周一、二、五皮下给药APP17肽0·35μg/只。4个月后,小鼠灌注固定,行脑冰冻切片,用PI3K、IRS-1、IRS-2抗体进行免疫组化染色。Westernblot应用IRS-1抗体染色。结果免疫组织化学染色方法检测海马神经元胰岛素受体底物-1、胰岛素受体底物-2、PI3K的表达,结果显示3种抗体C组深染的阳性细胞排列整齐,染色深,突起深染,可见2~3级分支,细胞计数与D组差异有显著性;D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少,分别为正常对照的67·5%、63·68%和48·6%。APP17肽治疗组(D+P组)染色结果与C组相似,阳性细胞数目接近C组,与半乳糖老化组比较差异均有显著性,P<0·05,但阳性细胞突起少于C组,排列亦不如C组整齐。Westernblot结果亦显示D组海马表达IRS-1减少,应用17肽后IRS-1表达上调,但不如C组数值高。结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS-1、IRS-2、PI3K的表达明显下降;APP17肽能上调D-半乳糖老化小鼠海马IRS-1、IRS-2和PI3K的表达。     

APP17肽对Aβ25-35诱导神经细胞凋亡保护作用

目的通过形态学和生化学指标观察APP17肽对Aβ25-35诱发SH-SY5Y细胞凋亡是否有保护作用,并对其保护作用机制作进一步的探讨.方法选用细胞形态观察、半定量LM-PCR DNA ladder Assay和流式细胞仪定量测定细胞凋亡率的方法观察APP17肽是否对Aβ25-35诱发SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用;通过测定细胞MTT代谢率,共聚焦显微镜观察Aβ25-35和APP17肽对细胞内过氧化物含量、线粒体膜电位的影响以及Western Blotting 观察细胞内凋亡诱导因子AIF及核转录因子NF-κB的表达情况,探讨了APP17肽的保护作用机制. 结果 APP17肽可以明显改善Aβ25-35造成的细胞形态损伤,显著降低细胞凋亡比率;与Aβ25-35损伤组相比,APP17肽预孵育能明显提高细胞MTT代谢率,稳定线粒体膜电位,减少AIF的表达;有效降低Aβ25-35引起的细胞内过氧化物含量增高;并且使具有神经保护作用的核转录因子NF-κB表达增加. 结论 APP17肽可以稳定线粒体功能、降低细胞内过氧化物含量,激活NF-κB并使其持续表达,对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有比较明显的保护作用.     

APP17肽对Aβ25—35诱导神经细胞凋亡保护作用

目的：通过形态学和生化学指标观察APP17肽对Aβ25－35诱发SH－SY5Y细胞凋亡是否有保护作用。并对其保护作用机制作进一步的探讨。方法：选用细胞形态观察，半定量LM－PCR DNA ladder Assay和流式细胞仪定量测定细胞凋亡率的方法观察APP17肽是否对Aβ25－35诱发SH－SY5Y细胞凋亡有保护作用；通过测定细胞MTT代谢率，共聚焦显微镜观察Aβ25－35和APP17肽对细胞内过氧化物含量，线粒体膜电位的影响以及Western Blotting观察细胞内凋亡诱导因子AIF及核转录因子NF－κB的表达情况，探讨了APP17肽的保护作用机制。结果：APP17肽可以明显改善Aβ25－35造成的细胞形态损伤，显著降低细胞凋亡比率；与Aβ25－35损伤组相比，APP17肽预孵育能明显提高细胞MTT代谢率，稳定线粒体膜电位，减少AIF的表达；有效降低Aβ25－35引起的细胞内过氧化物含量增高；并且使具有神经保护作用的核转录因子NF－κB表达增加。结论：APP17肽可以稳定线粒体功能，降低细胞内过氧化物含量，激活NF－κB并使其持续表达，对Aβ25－35诱导的SH－SY5Y细胞亡有比较明显的保护作用。     

参乌胶囊及二苯乙烯苷对APP转基因小鼠模型的药理作用

目的：为进一步探讨阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease，AD）的发病机制和病理过程，以及有效中药参鸟胶囊及其有效成分二苯乙烯苷防治AD的药理机制，我们系统观察了不同时程APP转基因动物与AD相关的一系列病理改变，以及药物干预的效果。方法：拟AD动物模型为4到16月龄APP695V7171转基因小鼠。4月龄起灌胃给予参乌胶囊（0．4g/kg／d，1．2g／kg／d），二苯乙烯苷（TSG，0．05g／kg／d，0．1g／kg／d，0．2g／kg／d），阳性对照药安理申6个月。未处理的APP转基因小鼠饲养至10月龄开始灌胃给予TSG（0．05g／kg／d，0．1g／kg／d）6个月。同背景同月龄C57BL／6J小鼠为正常对照组。行为学检测应用Morris水迷宫实验和物体识别实验。提取皮层、海马RNA，应用表达谱基因芯片、RT—PCR方法检测mRNA的改变；Western Blotting、免疫组化法检测蛋白表达的改变；图像分析使用Image—pro软件。结果：不同时程APP转基因模型存在多种类似AD的异常变化，包括：早期4月龄APP转基因小鼠即出现学习记忆能力障碍，随增龄至10月龄不断加重，但晚期至16月龄由于对照组的老化，虽然模型组与对照相比仍表现明显的学习记忆能力障碍，但差距缩小；早期即出现老年斑非Ap主要成分-asynuclein（α-syn）在基因和蛋白表达水平显上调，随增龄不断加重，16月龄形成α-syn蛋白异常聚集；MAPKs信号转导通路的多个成分（ERK、PKC、p70S6K）异常，与老年斑主要成分α-syn和AB的改变相关。参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷作用于APP转基因模型病理改变的多个环节：对老年斑两种主要成分α—syn和Aβ的抑制作用，有效减少淀粉样斑块的形成；可直接改善α—syn和Aβ导致的神经元毒性损伤和功能障碍；也可通过改善MAPKs信号转导通路的异常，维持神经元的存活和正常功能、抑制病理改变的发生；不仅早期4月龄给药能预防AD病理性改变的发生，对10月龄已出现病理变化的模型鼠也有较好的逆转和治疗作用。结论：APP转基因模型出现多种类似AD的异常变化，它们之间相互联系、相互影响，共同导致模型的病理改变。     

胆碱乙酰基转移酶对老年性痴呆模型小鼠学习记忆的影响

早老性痴呆（阿尔茨默氏病，Alzheimer＇sdisease．AD）是一种以认知障碍和记忆力损害为特征的胆碱能神经进行性退行性疾病。从源头上补充胆碱能神经递质乙酰胆碱的合成酶胆碱乙酰基转移酶（choline—O—acetyltransferase，ChAT），应能增强胆碱能神经功能。首先人源性重组ChAT融合蛋白基因进行构建、克隆及表达，重组ChAT静脉注射给小鼠后能穿越血脑屏障并在中枢催化合成乙酰胆碱。重组ChAT静脉给予自然衰老认知障碍模型小鼠后，能显地改善痴呆症状。     

LW-AFC及其活性组分通过调节肠道菌群改善APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力

目的探究LW-AFC及其活性组分是否通过肠道菌群发挥改善阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的学习记忆能力。方法以APP/PS1转基因小鼠为AD模型,以野生型C57小鼠为对照,使用LW-AFC及其活性组分给药以及给药后的粪菌处理受试小鼠,持续5个月。使用Morris水迷宫、新物体识别实验和穿梭箱实验分别评价小鼠空间记忆能力、物体识别记忆能力和主动回避能力。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠的空间学习记忆能力、物体识别记忆能力及主动回避能力显著下降。向模型组小鼠移植来自于对照组小鼠的粪菌后,模型组小鼠的空间学习记忆能力和物体识别记忆能力得到显著改善;而向对照组移植来自于模型组小鼠的粪菌后,对照组小鼠仅空间学习记忆能力出现显著下降。LW-AFC及其活性组分CA-30,LWB-b和LWD-b直接灌胃或灌胃后的粪菌再灌胃对模型组小鼠的空间学习记忆能力、主动回避能力物体识别记忆能力具有不同程度的改善作用,其中LW-AFC的作用最为显著。结论肠道菌群与学习记忆能力具有密切联系,LW-AFC具有显著的改善学习记忆能力的作用,而肠道菌群可能是其发挥改善学习记忆能力作用的重要途径之一。     

隐丹参酮对APP/PS1双转基因模型小鼠学习记忆和抗氧化能力的影响

目的 本实验利用APP/PS1双转基因模型小鼠,观察隐丹参酮对小鼠行为学习及抗氧化能力的影响。方法 选用APP/PS1双转基因模型小鼠,将其随机为5组,另取同窝阴性小鼠作为正常对照组,每组10只,3个月龄后开始给药。给药4个月后,通过行为学实验测试小鼠学习记忆能力的变化;采用分光光度法测定血清和脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量。结果 Morris水迷宫实验显示,APP/PS1双转基因模型小鼠逃避潜伏期较正常组明显延长,原象限停留时间明显缩短。隐丹参酮组小鼠逃避潜伏期较模型组明显缩短,原象限停留时间明显延长。APP/PS1双转基因模型小鼠血清和脑组织GSH-Px、SOD活力下降,MDA含量明显增多;隐丹参酮治疗组学习和记忆能力升高,血清和脑组织GSH-Px、SOD活力升高,MDA含量减少,与阿尔茨海默病模型组比较有显著性差异。结论 APP/PS1双转基因模型小鼠7个月后发展有明显学习记忆功能障碍伴有抗氧化能力的下降,隐丹参酮对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆障碍具有明显改善作用并且可剂量依赖性的显著改善阿尔茨海默病模型小鼠的抗氧化能力。     

荨麻总黄酮对记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响

目的 研究荨麻总黄酮(TUF)对记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响.方法 预防性给予小鼠TUF后,用不同方法模拟小鼠记忆获得障碍模型,行八臂迷宫试验;通过小鼠体重变化、负重游泳试验及血清和脑中总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化,评估TUF的抗衰老、抗氧化作用.结果 TUF可显著改善东莨菪碱、氯霉素、40％乙醇对小鼠记忆行为能力的影响;增强D-半乳糖致衰老模型小鼠的记忆力,维持正常增重及延长负重游泳时间,还可显著提高衰老小鼠的抗氧化能力.结论 TUF可有效改善记忆障碍模型小鼠的记忆力,这可能与其抗氧化能力有关.     

二苯乙烯苷对APP转基因拟痴呆模型ERK蛋白表达及磷酸化的影响

目的：为探讨细胞信号转导异常在阿尔茨海默病（Alzheimer’Sdisease，AD）的作用，以及中药有效成分二苯乙烯苷（TSG）防治AD的药理机制，观察APP转基因拟痴呆模型ERK蛋白的表达和磷酸化改变，以及药物的干预。方法：拟AD动物模型为4到16月龄APP695V717I转基因小鼠。4月龄起灌胃给予TSG6个月。