良性家族性婴儿惊厥一家系遗传连锁分析和基因定位研究

目的：对1个良性家族性婴儿惊厥(benign familial infantile convulsions, BFIC)家系进行遗传连锁分析和基因定位,以探讨BFIC的分子发病机制。方法：调查一个4代BFIC家系。选择位于染色体19q12~q13.1的D19S245和D19S250,16p12~q12的D16S3131和D16S3133,2q24的D2S156和D2S286,20q13.3的D20S480和D20S481共8个短串连重复序列（short tandem repeat,STR）作为遗传标记,应用聚合酶链反应(PCR),变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 和银染技术,采用LINKAGE软件包中的MLINK程序计算LOD值,根据LOD值判断连锁关系。结果：当重组率在0.000至0.01之间,在染色体19q12~13.1、16p12~q12及2q24区域的遗传标记LOD值均小于-2.0;在20q13.3(D20S481)区域,当重组率为0.000时,LOD值为0.3,当重组率为0.01时,LOD值为0.25。结论：排除该家系与染色体19q12~13.1、16p12~q12及2q24区域的遗传标记存在连锁关系的可能;在20q13.3区域,虽然没有显著性意义,但不能排除与20q13.3区域连锁的可能。［中国当代儿科杂志,2010,12（2）：89-92］     

全面性癫痫伴高热惊厥附加症基因定位及GABRA6基因测序研究

目的 对全面癫痫伴高热惊厥附加症(GEFS^ )家系进行基因定位，并对候选基因进行测序研究。方法 用连锁分析的方法对GEFS^ 家系进行研究；设计GABRA6外显子-内含子交界处全部9对内含子引物，采用Sanger双脱氧链终止法，对GABRA6 PCR测序。结果 在5q34区域最大LOD值3．815。GABRA6基因测序显示外显子8有一C／G多态性。结论 GEFS^ 症致病基因在5q34区域取得了肯定的连锁关系。在该研究的两家系未发现GABRA6基因突变；所显示的单个碱基多态性对其他癫痫家系的连锁分析及其他癫痫综合征分子遗传学机制的研究均有意义。     

全面性癫癎伴高热惊厥附加症基因定位及GABRA6基因测序研究

目的　对全面癫伴高热惊厥附加症 (GEFS )家系进行基因定位 ,并对候选基因进行测序研究。方法　用连锁分析的方法对GEFS 家系进行研究 ;设计GABRA6外显子 内含子交界处全部 9对内含子引物 ,采用Sanger双脱氧链终止法 ,对GABRA6PCR测序。 结果　在 5 q34区域最大LOD值 3.815。GABRA6基因测序显示外显子 8有一C/G多态性。结论　GEFS 症致病基因在 5 q34区域取得了肯定的连锁关系。在该研究的两家系未发现GABRA6基因突变 ;所显示的单个碱基多态性对其他癫家系的连锁分析及其他癫综合征分子遗传学机制的研究均有意义     

全面性癫癎伴热性惊厥附加症家系GABRB2基因测序研究

目的对全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS )侯选基因GABRB2进行测序研究。方法设计GABRB2外显子-内含子交界处内含子引物,采用PCR直接测序法,对一GEFS 家系GABRB2编码区全部11个外显子进行测序分析。结果患儿GABRB2基因外显子2,mRNA第133个碱基发现一新的C/G多态性。结论该家系未发现GABRB2基因编码区的突变;所显示的mRNA的单个碱基多态性对以后其他癫家系的连锁分析及GABRB2 mRNA、基因功能研究均有重要意义。     

良性家族性婴儿惊厥基因的连锁分析研究

目的探讨良性家族性婴儿惊厥(benign familial infantile convulsions,BFIC)基因与染色体19q12-13．1,16p12-q12以及2q24区域的连锁关系。方法1个中国湖南地区4代BFIC家系,采集本家系中19名成员的血样,选择位于19q12—13．1、16p12一q12以及2q24的17个微卫星标记：D19S49、D19S250、D19S414、D19S416、D19s245、D16s3131、D16S3093、D16S401、D16S415、D16s517、D16s3120、D2S111、D2s399、D2$2345、D2s2330、D2S2380、D2s2195,应用聚合酶链式反应(PCR)得到扩增产物片断,采用ABl377全自动测序仪或StrategeneEagleEye11型图象分析仪测定PCR产物片段大小。根据相应微卫星标记的产物片断大小不同,得到每个样本的基因型。对基因型数据进行校对后,用连锁分析软件LINKAGE的MLINK程序计算每个标记的LOD值,根据两点问LOD值判断连锁关系。结果D16S3131、D16S517、D16S3120、D16S3093、D2S2380、D19S250、D19S414因不能进行基因分型、杂合度低或者不符合盂德尔遗传予以舍弃。连锁分析结果示其余位点的LOD值均小于0,D19S49、D19s416、D19s245、D16S401、D16s415、D2s399、D2S111、D2s2195、D2S2330、D2S2345处的LOD值在重组率为0．0时均小于-2,说明该BFIC家系与19q12-13．1、16p12-q12以及2q24区域没有紧密连锁关系。结论该BFIC家系的疾病基因与已报道的BFIC定位区域19q12-13．1、16p12一-12以及2q24区域没有连锁关系。     

家族性局灶节段性肾小球硬化3家系临床表型与相关基因连锁分析

目的 分析3个家族性局灶节段性肾小球硬化（FFSGS）家系的临床表型,并通过连锁分析方法进行已知基因的排除性定位研究。 方法 对3个家系中的所有患者进行临床检查。应用等位基因共享分析和两点连锁分析的方法，在已知的FFSGS 相关基因NPHS1、NPHS2、ACTN4、TRPC6、CD2AP和WT1基因的所在染色体区域，选取14个微卫星标记进行连锁分析研究。结果 3个FFSGS家系的遗传方式均为常染色体显性遗传，54名家系成员中有16例患者，其临床表型不同，2个家系的起病年龄相对较大，在青少年期发病，而家系A中有2个患者发病年龄偏小，最小者1岁发病，而家系中其他患者都是在25岁以后发病。3个家系中有4例因尿毒症病故，另2例尿毒症行肾移植治疗，还有2例出现肾功能不全。其中家系A的先证者14岁即出现了肌酐增高。应用D19S191、D19S220、D19S224、D1S215、D1S416、D1S466、D11S1391、D11S1986、D11S2000等微卫星标记（STR）对家系A进行NPHS1、NPHS2、ACTN4和TRPC6基因的两点连锁分析，测得各个标记位点在重组率θ= 0 时，最大的LOD 值为0.18（D11S1391）；在θ= 0.1 时，最大的LOD 值也为0.18（D11S1986）；在θ= 0.2 时，得到本组最大的LOD 值也只为0.47（D19S220），均不支持连锁。提示家系A与所检测的9个微卫星DNA 标记位点无共分离。用上述微卫星标记以及ACTN4基因内的微卫星标记D19S422、CD2AP基因所在位点的微卫星标记D6S936和D6S1566、WT1基因所在位点的微卫星标记D11S2370对家系A进行等位基因共享分析，结果该家系致病基因与ACTN4、NPHS1、NPHS2、TRPC6、CD2AP和 WT1等基因所在位点不连锁。应用D19S191、D19S220、D19S224、D19S422、D1S215、D1S416、D1S466、D11S1391、D11S1986、D11S2000、D6S936和D6S1566等微卫星标记（STR）对家系B和C进行等位基因共享分析，结果这2个家系的致病基因与ACTN4、NPHS1、NPHS2、 TRPC6和CD2AP等基因所在位点均不连锁。结论 3个中国人常染色体显性FFSGS家系，具有明显的临床异质性。已知基因NPHS1、NPHS2、ACTN4、TRPC6、CD2AP和WT1不是家系A的致病基因；NPHS1、NPHS2、ACTN4、TRPC6和CD2AP不是家系B和C的致病基因。     

遗传性长QT间期综合征KCNQ1基因的新突变

目的　研究遗传性长QT间期综合征 (longQTsyndrome ,LQTS)的临床特点并筛查KCNQ1基因突变。方法　首先按照国际公认的诊断标准 ,确立先证者 ,进行家系调查 ,共有 6个LQTS家系被纳入研究。另选 50名心电图正常且校正QT间期 (QTc)≤ 0 41s的健康人作为正常基因对照。分析先证者及家系成员的临床和心电图资料 ,采用聚合酶链反应 单链构像多态性 (polymerasechainreaction singlestrandconformationalpolymorphism ,PCR SSCP)方法 ,对KCNQ1基因编码区全部序列进行基因突变筛查。阳性结果行DNA测序以明确具体突变位点 ,并进行对照研究。结果　 6个家系中共有LQTS患儿 13例 ,男 5例 ,女 8例。其中 ,猝死 1例 ( 8% ) ;晕厥发作 10例 ( 77% ) ;无症状 2例 ( 15% ) ,分别在家系调查和基因筛查时被发现。共采集到 11例患儿的心电图 ,QT间期为 ( 0 460± 0 0 58)s ,QTc为 ( 0 516± 0 0 58)s。经基因检测发现KCNQ1基因上 2个新的致病性突变位点 3 56 3 57ΔQQ和 62 6 63 1ΔGSGGPP ,分别来自 2个家系。还发现 1个新的多态性位点P448R。此 3个位点均位于编码蛋白C 末端结构域。结论　该研究发现KCNQ1基因的 2个新缺失突变位点和 1个新的多态性位点 ,系国内外首次报道 ,丰富了LQTS离子通道突变的基因库资料     

全面性癫伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的收集2个全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点。并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点。方法对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集。另取20名健康体检儿童作为对照。对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序。将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析。结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性。结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异。     

良性家族性婴儿惊厥家系KCNQ2基因新突变

目的 分析电压门控钾离子通道基因KCNQ2与1个良性家族性婴儿惊厥（benign familial infantile convulsions,BFIC）家系的关系,探讨BFIC的分子遗传机制。方法 1个中国陕西地区4代BFIC家系,采集41名家系成员及家系外75名健康对照的血样,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行KCNQ2基因突变分析,采用多聚酶链反应-单链构象多态性进行基因型和表型共分离研究。结果 PCR—DNA直接测序在先证者第5号外显子发现KCNQ2基因杂合突变G812T,导致KCNQ2蛋白孔区一个甘氨酸被缬氨酸替代（G271V）,这个位置的甘氨酸在KCNQ家族进化上高度保守。此突变与以前发现的良性家族性新生儿惊厥（benign familial neonatal convulsion,BFNC）家系KCNQ3突变（G3IOV）是同一位置相同的氨基酸改变。家系中其他患儿均检出与先证者相同的突变,而家系内参加本研究的健康人和家系外75名健康对照未出现这种突变。结论 KCNQ2基因突变可能是部分BFIC的分子发病机制,KCNQ2基因G812T突变是国内外未曾报道过的新突变,进一步开展G812T突变的功能研究有助于理解BnC及其他原发件癫痫的分子发病机理．     

良性家族性婴儿惊厥基因定位研究

目的对一良队家族性婴儿癫痫家系进行基因定位研究。方法按文献报道,选取10对微卫量标记进行连锁分析,包括D165401,D16S420,D16S3060,D1653062,D1653068,D195226,D195249,D195875,D19S915及D195930。共采集到3家系32例成员的血样,包括全部15例患者。PCR总反应体积为10μl,γ－32PATP标记引物,6％聚丙稀眺按凝胶但功率100W电泳3～5h,上样体积2μl。－80℃冰箱放射自显影6～8h。LINKAG5．1软件包,计算两点间的连锁关系。结果最大LOD值在D195249为0．71,D195875为0．26,D1653068为0．27,D16S420为0．15。按LOD3．0为标准判断,未发现紧密连锁关系。结论中国BFIC家系与文献报道的意大利及法国BF－IC家系可能有不同的基因位点。     

中国人哮喘易感性与染色体5q31～33区连锁关系的初步研究

目的获得中国人相关位点的资料，确定中国人哮喘易感性与染色体５ｑ３１～３３区域的连锁关系。方法采集３２个哮喘家系共１９２份样品，并取３９个正常无关个体为对照；用同位素掺入的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增多态性遗传标记Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３，通过受累同胞配对法进行Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与哮喘和高血清总ＩｇＥ的连锁分析。结果正常对照分析：Ｄ５Ｓ４３６共获得９个等位片段，多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．８０３，杂合度（ＨＥＴ）为０．８２３，Ｄ５Ｓ３９３共有１１个等位片段，ＰＩＣ为０．８９２，ＨＥＴ为０．８９８，表明两个位点均属于高度多态性的遗传标记。连锁分析：Ｄ５Ｓ４３６与哮喘呈连锁状态（Ｐ＜０．０５），Ｄ５Ｓ３９３与哮喘没有连锁关系；Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与高血清总ＩｇＥ都没有显示连锁关系。结论染色体５ｑ３１～３３区可能存在与中国人哮喘易感基因相关的１个或多个位点，是进行中国人哮喘易感基因研究的重要候选区域之一。     

Infantile seizures and other epileptic phenotypes in a Chinese family with a missense mutation of KCNQ2

Introduction Benign familial infantile seizures (BFIS) is a form of idiopathic epilepsy characterized by clusters of afebrile seizures occurring around the sixth month of life and a favorable outcome. Linkage analysis has revealed that three chromosomal segments, 19q12-q13.1, 16p12-q12, and 2q23-31, are linked to this disorder.Subjects and methods We report here a large Chinese family in which all 17 affected members had had infantile seizures with onset at age 2–4 months, with two of these also manifesting seizures later in life accompanied with either choreoathetosis or myokymia. Linkage analysis in this family confirmed a previous report of genetic heterogeneity in BFIS – since linkage was excluded at the above-mentioned known BFIS loci – and suggested a possible linkage to the KCNQ2 gene, which is believed to be a voltage gated potassium channel gene responsible for benign familial neonatal seizures (BFNS).Results and discussion Sequencing of the KCNQ2 gene revealed that all 17 affected family members carried a heterozygous Gly-to-Val (G271V) mutation in the conserved pore region that resulted from a guanine-to-thymine transition in exon 5 of KCNQ2. The same mutation with a comparable localization in the KCNQ3 (G310V) gene has been found in BFNS patients. The same conserved amino acid was also found to be mutated in the KCNQ1 gene in a family with Long QT Syndrome.     

Molecular genetics of nocturnal enuresis: clinical and genetic heterogeneity

Forty-two children with nocturnal enuresis (27 with primary, 4 with secondary nocturnal enuresis and 11 with combined primary nocturnal enuresis and daytime wetting) were selected retrospectively from a study of 167 consecutive children with enuresis. The aim of the study was to collect formal genetic data, perform molecular genetic linkage-analyses with five microsatellite markers on chromosomes 13q, 12q or 8q and specify the associations between genetic findings and clinical, as well as psychiatric diagnoses. Positive linkage of nocturnal enuresis to one of the microsatellite markers was possible in 27 children from 23 families and was not possible in 15 children. Somatic findings in both the groups with and without possible assignment of nocturnal enuresis to a marker were heterogeneous. Psychiatrically, a low rate of behavioural problems was apparent. These findings support the hypothesis of genetic and phenotypical heterogeneity of nocturnal enuresis, without linkage of specific psychiatric and somatic phenotypes to certain chromosome markers.     

儿童失神癫癎的单体型相对风险和传递不平衡分析

目的　确认中国儿童失神癫 (childhoodabsenceepilepsy ,CAE)是否与染色体 8q2 4连锁。方法　选取染色体 8q2 4上 5个微卫星DNA标记 (D8S554、D8S53 4、D8S110 0、D8S1783、D8S1753 ) ,对3 0个CAE核心家系的患儿及其父母的单体型进行分析 ,另有 10个正常家系作为对照。从外周血白细胞中常规抽提基因组DNA ,应用PCR方法扩增各个微卫星片断 ,PCR产物用基因测序确定各个等位基因的长度。统计学方法选用基于单体型的单体型相对风险 (HHRR)和传递不平衡检验 (TDT)分析。结果　经HHRR分析显示 ,D8S5544χ2 =5 93 9(P <0 0 5)、D8S110 0 3 χ2 =5 0 81(P <0 0 5)、D8S1783 6χ2 =4 3 0 8,(P <0 0 5) ,差异有显著性 ;TDT显示D8S5544χ2 =4 46(P <0 0 5)、D8S1783 6 χ2 =4(P <0 0 5) ,差异有显著性。为了排除HHRR和TDT分析可能存在的假关联 ,我们对所有患儿家系作了详细的分析 ,结果发现只有在位点D8S1783提示与CAE致病基因存在传递不平衡 ,而另二个位点均为假关联。结论　①中国儿童失神癫可能与染色体 8q2 4连锁 ,与位点D8S1783存在传递不平衡 ;结合国外的结论 ,CAE致病基因可能存在于染色体 8q2 4上的ECA1区域内。②CAE基因在不同地区、不同种族的人群中可能存在遗传异质性。③对于核心家系 ,HHRR和     

Molecular Characterization of Tetralogy of Fallot Within DiGeorge Critical Region of the Chromosome 22

The purpose of this study was to determine whether the levels of heterozygosity and microdeletion of specific loci within the DiGeorge critical region (del22q11) are associated with different phenotypes of tetralogy of Fallot (TF). Examinations were conducted on 84 sporadic TF patients and their unaffected parents for del22q11, using the following 9 simple tandem repeat polymorphic microsatellite markers: D22S420, D22S427, D22S941, D22S944, D22S264, D22S311, D22S425, D22S303, D22S257. The microdeletions were confirmed using quantitative PCR with markers TUPLE1, exon 2 of the UFD1L gene, and D22S264; the boundaries of these microdeletions were estimated using genotypic analyses of the unaffected family members. The del22q11 was identified in 14 patients (16.6%). The boundary of the shortest region of deletion overlap (SRO) in these 14 TF patients was identified, proximally using D22S427 and distally using the TUPLE 1 gene. The deletion of exon 2 of the UFD1L gene and TUPLE1 gene was identified in 13 patients (13/14 cases; 93%). The SRO in TF patients with del22q11 was at or close to the ADU breakpoint and centromeric to the UFD1L gene. The level of heterozygosity for the marker D22S944 in TF patients without del22q11 (n= 70) was found to be significantly lower than expected. Overall, this study demonstrated the significantly low level of heterozygosity within DiGeorge critical region in TF patients with or without del22q11. Our results suggest that the genetic factors leading to DiGeorge/velocardiofacial syndrome might also be partly responsible for TF phenotypes.