蛇麻酮通过Fas/FasL途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的 探讨啤酒花 Humulus lupulus 中成分蛇麻酮 (lupulone, LP) 通过 Fas/FasL 途径诱导 HepG2 凋亡的机制。方法 体外培养人肝癌细胞株 HepG2 4、8、16 μg/mL 剂量的蛇麻酮作用 HepG2 细胞 24 h 后,采用活性检测试剂盒检测 caspase-8 相对活性,采用 Western blotting 技术检测 Fas、FasL、Caspase-3 蛋白表达情况。结果 LP 能显著提高 HepG2 细胞内 caspase-8 活性水平,并且具有剂量依赖性,其中 8、16 μg/mL LP 组与对照组比较有显著性差异 (P＜0.05)。此外,LP 能够上调 HepG2 细胞的 Fas/FasL 及 Caspase-3 蛋白表达水平,并且均具有剂量依赖性,其中 4 μg/mL 组与对照组比较均有显著性差异 (P＜0.05),8、16 μg/mL 组与对照组比较均有非常显著性差异 (P＜0.01)。结论 蛇麻酮可以通过激活 Fas/FasL,启动死亡受体途径诱导 HepG2 细胞凋亡。     

莱菔硫烷诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的 p38MAPK 途径研究

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡过程中,p38MAPK 途径的作用。方法：流式细胞仪检测 SFN 对 HepG-2 细胞凋亡率的影响,Western Blotting 方法检测细胞内 p38 及 p-p38 蛋白表达。结果：SFN可明显诱导 HepG-2 细胞凋亡,10、20、40 μmol/L SFN 作用 48 h 后,对 HepG-2 细胞的抑制率分别达到 27.42 %、46.53 %、58.92 %;10、20、40 μmol/L 的 SFN 可上调 HepG-2 细胞内 p-p38 蛋白的表达,而对 p38 的表达无明显影响。结论：SFN 可诱导 HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断 p38MAPK 途径有关。     

莱菔硫烷对人肝癌HepG-2细胞Bcl-2与Bax基因转录及蛋白表达的影响

目的：研究莱菔硫烷（Sulforaphane,SFN）在体外对HepG-2细胞Bcl-2、Bax基因转录和蛋白表达的影响,探讨SFN诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。方法：不同浓度SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48 h,采用SRB法测定SFN对HepG-2细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测SFN作用后的细胞凋亡率;Western blot法和RT-PCR法检测SFN在蛋白和mRNA水平上对Bcl-2和Bax表达的影响。结果：SFN对HepG-2细胞的GI50为9.40μmol/L,TGI为26.68μmol/L;10、20、40μmol/L的SFN作用于HepG-2细胞48 h后,激光共聚焦显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态,细胞凋亡率分别为（27.42±0.43）%、（46.53±0.35）%和（58.92±0.48）%（P〈0.01）;细胞内Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P〈0.01）,而20、40μmol/L的SFN作用后细胞内Bax蛋白和mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA均随SFN剂量的增加显著降低（P〈0.01）,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论：SFN能抑制HepG-2细胞的增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2、上调Bax的表达,这可能是SFN诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

莱菔硫烷诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

目的探讨莱菔硫烷对人脑胶质瘤细胞（U251）细胞生长的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法研究不同浓度的莱菔硫烷对U251细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度（IC50）;采用Westernblot研究莱菔硫烷对U251细胞内Cyt-c的表达情况。结果在较低剂量范围内（≤100μmol/L）,随着作用剂量的增加,莱菔硫烷对U251细胞的生长的抑制作用也明显增强。莱菔硫烷作用72h后的IC50值为（52.41±6.63）μmol/L;莱菔硫烷作用48h后胞浆内Cyt-c的表达量逐渐增多,呈剂量依赖关系。结论莱菔硫烷对U25l细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过诱发细胞内Cyt-c的释放,引发经线粒体途径的内源性凋亡来实现的。     

Fas／FasL诱导细胞凋亡

多细胞组织的内环境稳定性不仅受细胞增殖和分化调控，而且也受细胞衰亡的控制。细胞衰亡可分为两类：一类是坏死（necrosis），是由有害信号的极度刺激造成细胞损伤所引起的死亡，主要病理变化为核固缩、碎裂和溶解；另一类是凋亡（apoptosis），是由有害信号的温和刺激及某些生理刺激引起的细胞程序性死亡（Programmedcelldeath）。无论刺激信号是生理性的还是病理性的，任何诱导细胞自杀程序基因表达而致的细胞死亡均属凋亡。细胞凋亡的特征性形态改变有细胞团缩、染色质凝集及凋亡小体出现等。在细胞凋亡调控机制研究中，已证明某些原…     

Fas/FasL,Bcl-2与系统性红斑狼疮的细胞凋亡

系统性红斑狼疮（SLE）发病机制未明。近年研究发现，SLE患者外周血淋巴细胞凋亡率较正常人升高，且凋亡调控基因fas/fasL、bcl-2表达异常。故这两类基因可能通过异常的凋亡调控打破自身耐受而导致SLE发病。     

莱菔硫烷对小鼠肺癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的：研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对小鼠肺癌细胞系（Lewis lung cancer cells,LLC）细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法：CCK?8 法鉴定SFN对LLC细胞增殖率的影响;流式细胞术检测SFN对LLC细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH?DA探针检测SFN对LLC细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）表达的影响;Western blot检测SFN对LLC细胞Nrf2蛋白和ERK信号通路的影响。最后通过皮下注射建立C57BL/6J小鼠肺癌模型,建模后实验组及对照组分别给予SFN及PBS灌胃处理,检测SFN治疗对小鼠肿瘤的影响。结果：细胞实验证实SFN能显著抑制小鼠LLC细胞的增殖（P < 0.05）,促进LLC细胞的凋亡,随着SFN浓度的增加,LLC细胞晚期凋亡比例逐渐升高（P < 0.05）。细胞周期分析提示12.5 μmol/L和25.0 μmol/L的SFN处理可减少LLC细胞G1期比例（P < 0.05）,增加G2/M期的细胞比例（P < 0.01）,细胞周期相关基因CyclinD1、CDK4、CDK6、CyclinB1和CDK1的表达显著下降（P < 0.01）。Western blot提示SFN促进LLC细胞ERK磷酸化以及增加Nrf2表达（P < 0.05）。流式细胞术检测DCFH?DA探针显示SFN能显著提高LLC细胞内ROS水平。动物实验结果发现SFN处理组小鼠肿瘤显著小于对照组（P<0.05）。结论：体内及体外实验证实SFN触发LLC细胞内ERK磷酸化,使得细胞内Nrf2表达增加,细胞内ROS水平升高,阻滞细胞周期,从而加速LLC细胞的凋亡。SFN可能会是一种安全且有效的抗癌药物。     

Fas/FasL调控细胞凋亡途径与血液恶性肿瘤

Fas抗原(又称Fas受体、CD95或Apo-1)及其配基(FasL)分别隶属于肿瘤坏死因子(TNF)受体和TNF超家族成员。由Fas与FasL结合启动的凋亡信号传导是最终导致细胞凋亡和(或)细胞毒效应的重要途径。因此,对Fas/FasL途径的深入研究可为通过诱导细胞凋亡而治疗恶性肿瘤提供新的凋亡激发环节[1]。1　Fas/FasL途径的分子学特征Fas和FasL均主要以膜形式存在。Fas是富含胱氨酸的型跨膜糖蛋白,分子量约45Kd,不同程度地表达于各种组织细胞,其结构分为胞外、跨膜和胞内区。Fas胞外区与其配基特异性地以三聚体形式结合;胞内区为Fas传导凋亡信号所…     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位（△ψm）以及胞内活性氧（ROS）水平。结果SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变。SFN由0-50μmol／L作用24h,早期凋亡率明显升高（P〈0.01）;△ψm明显降低（P〈0.01）;ROS有不同程度的升高。结论SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,弓I发经线粒体途径的内源性凋亡。     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。     

凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2在自身免疫性甲状腺病中的表达及意义

目的:探讨HT(桥本氏甲状腺炎)及DTG(弥漫性毒性甲状腺肿)细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2的表达及其意义.方法:采用免疫组化S-P法检测HT及DTG中凋亡相关蛋白的表达,并分析凋亡相关蛋白的表达与两种甲状腺疾病病理发生发展的关系.结果:HT及DTG滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为40%和60%,并且在靠近淋巴细胞浸润区的甲状腺滤泡细胞阳性反应较强,正常甲状腺组织滤泡细胞则未见表达.HT及DTG分别与正常甲状腺组织相比有显著差异P＜0.01.在正常甲状腺组织,HT及DTG中均有滤泡细胞表达FasL和BcL-2,而FasL的表达三者相比均无显著差异.BcL-2的表达在正常甲状腺组织和DTG中较强,而在HT中的表达较弱,与正常甲状腺组织和DTG相比有显著差异P＜0.01.结论:结果提示在HT中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,经过Fas与FasL的作用导致部分滤泡细胞凋亡,并通过BcL-2表达的减弱,降低了抗凋亡的作用.在DTG中由于滤泡细胞通过增强BcL-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱.本研究结果显示凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用.     

Fas／FasL系统介导的细胞凋亡与卵泡闭锁及稽留流产的关系

Fas／FasL是细胞表面的两种跨膜蛋白。目前研究认为FasL是死亡因子,Fas则是其受体。当一个细胞的FasL与另一个细胞的Fas结合时,可以导致表达Fas的细胞凋亡。Fas又称Apo—l,即CD95分子。人Fas基因定位于10号染色体q23,基因长度约25Kb。人FasL基因定位于1号染色体q23,基因长度约8Kb。Fas／FasL系统与卵泡闭锁生理过程、自身免疫疾病、肿瘤发生、移植物耐受等均有密切关系。近年来细胞凋亡因素导致稽留流产的发生受到人们的关注,而其中Fas／FasL系统在促进绒毛组织细胞凋亡方面占据重要的地位。     

Fas/FasL及增殖细胞核抗原表达与人黑素瘤恶性程度

目的 探讨Fas和Fas配体(Fas/FasL)及增殖细胞核抗原(PCNA)在人黑素瘤中表达情况及其与黑素瘤恶性程度的关系.方法 按不同病理分级,将标本分为恶性黑素瘤(MM)组、黑素细胞痣组和正常皮肤对照组,应用免疫组化SP法,检测Fas/FasL及PCNA在各组标本中表达情况.结果 Fas、FasL及PCNA在三组中表达强度差异有统计学意义(P＜0.01);MM组PCNA阳性细胞指数(PI)(55.0%±14.8%)明显高于正常皮肤组(4.0%±2.0%)和黑素细胞痣组(6.2%±3.0%)(P＜0.01),而后二者间差异则无统计学意义(P＞0.05).随着PI增加MM浸润深度增加、伴有淋巴结转移可能性明显增加、肿瘤细胞分化程度越差、恶性度越高(P＜0.01);但是PI与MM病理分型之间没有直接量效关系(P＞0.05).结论 Fas/FasL及PCNA表达情况反映人黑素瘤恶性程度,PCNA表达越强,恶性度越高;Fas/FasL及PCNA表达与黑素瘤发展过程密切联系.     

Fas/FasL表达与人黑色素瘤恶性程度及细胞凋亡关系的研究

目的 探讨Fas和Fas配体(Fas/FasL)在人黑色素瘤中的表达及其与黑色素瘤恶性程度和细胞凋亡的关系.方法 按不同病理分级,将标本分为恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)伴淋巴结转移组(A组)、MM无转移组(B组)、良性黑素细胞痣组(C组)和良性黑素细胞痣旁正常组织对照组(D组),应用免疫组化SP法,检测Fas/FasL在4组标本中的表达情况;用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测其细胞凋亡指数(AI).结果 Fas/FasL在不同组织中的表达强度有明显差异,Fas在A、B、C、D 4组中表达率分别为31.25%、57.89%、76.19%、92.85%(P＜0.01),而FasL在上述组织中表达率分别为75.0%、52.63%、19.04%、3.57%(P＜0.01).AI比较:C组明显高于D组(t=3.054,P＜0.01),B组高于D组(t=2.018,P＜0.05),同时C组高于A组(t=2.051,P＜0.05).结论 Fas/FasL表达情况反映黑色素瘤恶性程度,细胞凋亡的异常与黑色素瘤发展等过程有密切联系.     

Fas/FasL与皮肤肿瘤的相关性研究进展

Fas/FasL均是细胞表面受体。Fas与FasL结合后可以导致细胞凋亡,当机体发生肿瘤时,肿瘤细胞表面Fas表达下调,有时甚至出现FasL的表达,不但削弱了阳性淋巴细胞的攻击能力,而且赋予了肿瘤细胞杀伤免疫细胞的能力,即肿瘤免疫逃逸。这一机制在皮肤肿瘤的发生发展中也有相当重要的作用。     

氟美松对急性肝损伤大鼠肝细胞Fas/Fas配体表达和细胞凋亡的影响

目的 :观察内毒素急性肝损伤后肝细胞凋亡和Fas/Fas配体 (FasL)表达的变化 ,以及氟美松对其影响 ,探讨急性肝损伤早期作用机制 .方法 :采用免疫组化和原位杂交技术检测各时相点肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达 ;应用原位末端标记技术对各时相点肝细胞凋亡进行检测 .结果 :内毒素急性肝损伤各时相点大鼠肝细胞Fas/FasL蛋白和mR NA的表达较对照组明显上调 (P <0 .0 5 ) ,且与肝细胞凋亡的增加相一致 ;氟美松可明显减轻炎症反应 ,抑制脂多糖 (LPS)诱导的肝细胞凋亡 ,并使肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达明显下调 (P <0 .0 5 ) .结论 :肝细胞凋亡和Fas/FasL系统活化可能参与内毒素急性肝损伤早期的发病机制 ,而且加重早期肝损伤 ;氟美松可抑制Fas/FasL系统活化 ,阻断和调控凋亡 ,从而减轻肝组织损伤     

大鼠肝脏癌前病变肝细胞凋亡及Fas/FasL的表达

目的探讨肝脏癌前病变过程中肝细胞凋亡的变化及Fas和FasL的表达,以期为肝脏疾病防治提供实验依据。方法将大鼠随机分为对照组和模型组,模型组采用腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)制备大鼠肝脏癌前病变模型,生化检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)。光镜下观察肝脏组织病理学改变;使用DNA电泳法检测肝细胞的凋亡情况;应用免疫组织化学法检测Fas和FasL的表达与分布。结果对照组大鼠光镜下肝组织结构正常,模型组大鼠肝细胞肿胀,肝小叶内可见灶性坏死伴炎性细胞浸润,同时逐渐出现纤维组织增生及肝细胞再生。模型组1～8周和9～12周大鼠血清ALT、AST、γ-GT和AFU活性均高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01);模型组9～12周大鼠血清ALT、AST、γ-GT和AFU活性高于1～8周,差别有统计学意义(P<0.05),2组AFP和CEA均正常。对照组无细胞凋亡,模型组大鼠肝脏细胞呈明显的DNA梯状条带。对照组大鼠肝组织中未见Fas和FasL表达,模型组Fas和FasL主要表达在肝脏细胞胞浆。结论大鼠肝脏癌前病变时,肝细胞凋亡增加可能与凋亡相关基因Fas和FasL表达增加有关。肝脏癌前病变大鼠肝细胞凋亡增加,可能是肝损伤加重的原因。     

非小细胞肺癌组织中Survivin与Fas/FasL的表达及其临床意义

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Survivin、Fas/FasL的表达.方法 采用免疫组织化学法检测16例正常肺组织、48例肺鳞癌组织、38例肺腺癌组织中Survivin、Fas/FasL的表达.结果 正常肺组织中Survivin的阳性表达率为0,而在肺鳞癌和肺腺癌组织中Survivin的阳性表达率分别为79.17%和70.05%,与正常肺组织相比二者差异均有统计学意义(P<0.01);正常肺组织中Fas的阳性表达率为81.25%,与肺鳞癌(41.67%)和肺腺癌(43.37%)相比,差异均有统计学意义(P<0.05);Fas的表达与性别、组织学类型、TNM分期及有无淋巴结转移均无相关性.正常肺组织中FasL的阳性表达率为18.75%,低于肺鳞癌(72.92%)和肺腺癌(68.42%),P<0.05.NSCLC组织中FasL的表达与性别及组织学类型无关,与TNM分期和淋巴结转移有关.结论 Survivin基因异常表达而引起的细胞凋亡抑制在NSCLC的发生中起一定的作用,其过度表达提示NSCLC预后不良;NSCLC Fas低表达在其发病中可能有一定的作用;Fas/FasL可能参与了NSCLC凋亡的调节,在NSCLC逃逸机体免疫监控方面起重要作用,因此检测FasL的表达可能为临床判断肺癌淋巴结转移提供依据. Abstract： Objective To detect the expression of Survivin, Fas/FasL in non-small cell lung cancer(NSCLC) tissue. Methods We used immunohistochemistry to detect the expression of Survivin, Fas/FasL in 16 cases of normal lung, 48 cases of squamous carcinoma of lung tissue, 38 cases of adenocarcinoma of lung tissue. Results The positive rate of Survivin in normal lung tissue, squamous carcinoma and adenocarcinoma of lung were 0, 79.17% and 70.05% respectively, and there was significant difference between the normal and the two NSCLC groups(P<0.01). The positive rate of Fas in normal lung tissue(81.25%) was significantly higher than that in squamous carcinoma of lung(41.76%) and adenocarcinoma of lung(43.37%),P<0.05. The positive of FasL in normal lung tissue(18.75%) was significantly lower than that in SqCa(72.92%) and adenocarcinoma of lung(68.42%)(P<0.05). No relation was found between the expression of FasL and clinicopathologic factors including sex, histoclassification. And there was a relation between lymphnode metastasis and TNM stage of NSCLC. Conclusions Apoptosis inhibitition caused by abnormal survivin expression may participate in the onset and progression of NSCLC. The over-expression survivin suggests the bad prognosis in NSCLC. The expression of Fas protein in NSCLC was low, and might play a role in carcinogenesis of lung carcinoma. The expression of Fas/FasL in NSCLC may play an important role in the escape of tumor cells from immune function. The expression of FasL might be used as an objective indicator of metastasis potency of local lymph node.     

Investigation on etretin effects on expression of Fas／FasL ligand and apoptosis in cultured human keratinocytes

Objective: To further illuminate a possibme mechanism of Fas/FasL in the treatment of psoriasis, the expression of it and apoptosis of KC were investigated. Methods: With cell culmre,immunocytochemistly, the expression of Fas/FasL protein after the treatment with etretin was observed in cultured human normal keratinocytes. Then, the state of apoptosis in cultured keratinocyte after stimulation with etretin was detected with FACS(Fluorescence Activited Cell Sortor). Results:(1) There was no expression of Fas/FasL protein in the cultured normal human KC. (2)After the treatment with etretin, the strongest expression of FasL protein appeared after 16h, so did Fas after 4Oh. (3) The higher the concentration of etretin, the stronger the expression of Fas/FasL protien. Under the same condition, the expression of Fas is stronger than that of FasL. (4) Keratinocytes‘ apoptosis occurred after stimulation with etretin. Conclusion: Fas/FasL system wasn‘ t involved in apoptosis in cultured normol human keratinocytes. But during limited period, the apoptosis of KC could be induced by etretin, thus it can antagonize benign proliferate of keratinocytes. Our data showed up-regulation of the expression of Fas/FasL and apoptosis in cultured human keratinocytes stimulated by etretin, and its function may be involved in the therapeutic machanism of psoriasis.