空肠弯曲菌cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体的构建与表达

目的以空肠弯曲菌(CJ)细胞扩张毒素(cytolethal distending toxi,CDT)cdtA、cdtB及cdtC为目的基因,构建CJ-cdtA、cdtB及cdtC基因的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA,pcDNA3.1(+)-cdtB,pcDNA3.1(+)-cdtC,为CJ核酸疫苗的研制提供实验材料。方法用Primer5.0软件分析GenBank中空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA、cdtB及cdtC基因序列,设计合成相应特异性引物,引入EcoRI、BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC;通过酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果扩增出特异的cdtA、cdtB及cdtC基因片段,大小约为807bp、798bp、570bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了CJ真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC。结论 PCR扩增得到了大小约为807bp、798bp、570bp的CJ-cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段;并成功构建了pcDNA3.1(+)-cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体。     

空肠弯曲菌cdtA及其高抗原肽段的原核重组质粒的构建和表达

目的空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA及其高抗原肽段蛋白人工表达。方法使用PCR方法获得cdtA、cdtA1、cdtA2编码的基因,经确证后将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-5X-1-cdtA、cdtA1、cdtA2表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了相应表达。结果 pGEX-cdtA、cdtA1、cdtA2重组菌株具有明显的表达带,其分子量与预期的结果相同。结论成功构建了cdtA及其高抗原肽段的原核表达重组质粒,并表达出相应蛋白为其免疫原性分析及研制疫苗奠定了基础。     

吉兰-巴雷综合征相关空肠弯曲菌waaF基因序列对比研究

目的了解吉兰-巴雷综合征(GBS)相关空肠弯曲菌(C.jejuni)waaF基因核酸及氨基酸序列特征,分析其遗传进化关系。方法选取3株致GBS C.jejuni菌株,提取其基因组测序。应用生物信息学软件,以NCTC11168序列为参照进行比对,分析waaF基因碱基及相应氨基酸突变、二级结构变化,计算遗传距离。结果 3株致GBS C.jejuni waaF基因均由960个碱基构成,相同碱基突变位点有5个,1081462位zhanxingT→A,lulei、qiaoyuntaoT→G导致相同氨基酸改变:185位D→E,该位点导致α螺旋结构的改变。3株致GBS C.jejuni waaF基因遗传距离较小。结论 GBS相关C.jejuni菌株waaF基因序列存在相同碱基及氨基酸突变及二级结构变化,这可能与C.jejuni致GBS能力的改变相关。河北地区致GBS的C.jejuni在进化上存在聚类现象。     

格林-巴利综合征患者的空肠弯曲菌抗体及其发病机理

目的 用纯化的脂多糖抗原(CJ—LPS)和全茵抗原(CJ—T)检测格林一巴利综合征(GBS)患血清的空肠弯曲茵(CJ)抗体,并用两种抗原检测到的抗体阳性率和阳性病例的符合率的差别来推测CJ的LPS是否为诱发CJ抗体的抗原表位。方法 选取包括GBS患分离的CJ左内的15株不同Penner血清型的CJ,用酚-水法提取的CJ—LPS抗原,以热稳定成分为CJ—T抗原,用ELISA间接法检测81例GBS患、34例其他神经疾病对照和63例正常对照的血清U抗体。结果 CJ—LPS为抗原,CJ近期感染阳性率(IgM或IgA型抗体至少一种阳性)为51．9％,CJ—T检测的阳性率为56．8％,与其他神经疾病对照和正常对照的差异均有显性。两种抗原检测得到的阳性率之间差异没有显性,阳性病例的符合率之间差异没有显性。结论 进一步验证我国GBS患的CJ近期感染阳性率较高,CJ的LPS确实为引起GBS的一类抗原表位。     

生物信息学预测GPIIb/IIIa抗体CTL、Th的混合表位

背景：GPIIb/IIIa是特发性血小板减少性紫癜患者最常见的血小板糖蛋白,已证实该蛋白独特型抗体结合血小板后会激活补体,破坏血小板。 目的：以GPIIb/IIIa抗体为靶抗原,应用生物信息学软件对其CTL、Th细胞表位进行多参数预测。 设计、时间及地点：开放性实验,于2008-03/08在珠江医院血液科实验室完成。 材料：GPIIb/IIIa抗体的氨基酸序列由GENBANK公司提供。 方法：分别应用SYFPEITHI,RANKPEP,BIMAS,SVMHC,PREDEP,MHCPRED,PROPRED软件对人和鼠源的血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体蛋白进行HLA-A*0201,HLA-A*1101,HLA-A*2401限制性表位预测,经去除能引起自身免疫的已发表的多肽,取前者覆盖后二者的多肽为混合CTL表位,再联合软件predTAP、TAPPred的TAP结合预测结果,以及NetChop、MAPPP、PAProC软件的蛋白酶切位点预测结果,取能包含二者的多肽为CTL修正表位。用基于肽MHC-Ⅱ结合的算法Syfpeithi,RANKPEP,Mhcpred,HLAPRED进行HLA-DR的Th表位预测,最后取Th表位覆盖CTL修正表位,得到CTL、Th细胞混合表位。 结果：从1 740条多肽中筛选出5条人源抗人血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPIIb/ IIIa-Human的第1-15,24-38,50-64,65-81,109-121位;筛选出5条鼠源抗人血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPIIb/IIIa-Mice的第1-15,26-40,46-60,68-82,93-107位。 结论：根据血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体预测的CTL、Th细胞优势抗原表位,可用于制备特异性抗体,可成为特发性血小板减少性紫癜新疫苗研究的靶点。     

中国人群人类白细胞抗原A、B和DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的鉴别

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中，当某些等位基因间的差异碱基位于测序范围外时，无法得到清晰的等位基因结果。 目的：分析中国人群人类白细胞抗原A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的分布规律，探讨其在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原 A、B、DRB1基因的测序分型中的解决方案。 设计、时间及地点：采用随机抽样方法对研究样本进行人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型，并对其中的模棱两可等位基因进行验证性实验，于2006-01/2008-06在深圳市血液中心完成。 材料：658名深圳骨髓库汉族供者乙二胺四乙酸盐抗凝血5 mL。 方法：采用聚合酶链式反应--测序分型方法对658名深圳骨髓库供者的人类白细胞抗原A、B和DRB1基因进行高分辨分型，并采用针对相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物方法对其中由于碱基差异位于检测区外而产生的模棱两可等位基因进行鉴别。 主要观察指标：模棱两可等位基因的分布及确认。 结果：658份标本中，人类白细胞抗原A、B和DRB1三个基因座的模棱两可等位基因分别为9个(2种)、140个(5种)、406个(8种)，占等位基因总数的14.06%(555/3 948)。高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物鉴定结果显示，中国报道的DRB1*1401被全部确认为DRB1*1454；12例B*0705/B*0706中，有1例被确认为B*0706，其他13种等位基因的鉴定结果分别为A*6801、A*7402、B*2705、B*3501、B*4402、B*5801、DRB1*0101、DRB1*0406 、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*1201、DRB1*1302 和DRB1*1502。 结论：在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原基因的测序分型中可以应用直接鉴别的方法区分模棱两可等位基因，但在临床移植前的高分辨确认试验中则需要采用实验方法进行精确分型。     

MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体的构建与鉴定

背景：疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用。研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC I类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应。 目的：构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。 材料：pcDNA3.1(-) Vector为BD公司产品,pINCY /MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存。 方法：设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3 和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,KpnⅠ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定。 主要观察指标：真核表达载体pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70的鉴定。 结果：测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致, 人热休克蛋白70有3处同义突变。 结论：成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体。     

空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因克隆与序列分析

目的克隆空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因,并分析其遗传进化关系。方法聚合酶链反应扩增空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因,构建pGEM-T-WaaF质粒,选择正确克隆质粒测序。自美国国家生物技术信息中心Nucleotide数据库下载5株吉兰-巴雷综合征相关菌株WaaF序列,1株非吉兰-巴雷综合征相关菌株WaaF序列,利用DNAstar v7.1软件建立进化树,分析不同菌株间WaaF基因遗传关系。结果完成了空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因的克隆,发现WaaF基因在吉兰-巴雷综合征相关菌株间存在聚类现象。结论空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因是807bp的片段,与Lichang株遗传进化关系最近。     

AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体AChR-IgG Fc/pAN1782并在CHOk1细胞中表达AChR-IgG Fc融合蛋白。方法以人烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)α1亚基全序列为模板,以PCR法扩增AChRα1亚基胞外段主要免疫区基因片段Hα1-121,将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞,建立稳定表达AChR-IgG Fc融合蛋白的CHOk1细胞株,以Western blot法检测AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结果 (1)Hα1-121经PCR法扩增后所获428 bp基因片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRα1亚基胞外段基因片段Hα1-121序列完全一致,未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确,载体构建成功。(2)Westernblot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结论成功构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体,且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达,为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步良好基础。     

广州地区HCMV临床病毒株UL144 ORF的序列变异研究

目的 研究广州地区先天性感染的人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离病毒株UL144基因序列的多态性,探讨UL144基因在HCMV致病中的作用.方法 对3株经多重PCR鉴定HCMV DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV UL144基因全序列PCR扩增,PCR产物克隆到pMD18-T载体上再测序,将其序列与GenBank中公布的其它10株临床分离株UL144基因一起进行分析.结果 本实验克隆并测序了HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株的UL144基因,提交GenBank,已被GenBank收录,序列号分别为DQ180368、DQ180382和DQ180355.HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株的UL144基因均全长531 bp.通过blast分析,从GenBank中找到了10株HCMV病毒株的UL144与D3、D2和D52的UL144基因具有较高的同源性,经过序列的比对,发现UL144基因DNA序列比较保守,只在4处有变异,且变异均为碱基替换,无插入或缺失,编码蛋白由176个氨基酸残基组成,氨基酸序列也比较保守,各分离株中变异率为1.1%;HCMV UL144编码蛋白翻译后修饰位点在所有分离株中均高度保守;所有分离株UL144蛋白的等电点均为8.97.结论 广州地区临床低传代分离株HCMV UL144基因DNA及其编码产物的氨基酸序列是比较保守的,但仍存在一定的多态性.提示UL144基因在先天性感染中可能具有重要作用.     

格林-巴利综合征患者的GM1抗体与空肠弯曲菌感染的关系

目的　检测GBS患者血清中的GM1抗体 ,并且观察其与CJ抗体的关系 ,以试图发现CJ是否是通过GM 1样结构致敏导致GBS的发生。方法　用间接ELISA法在 81例GBS患者、34例其他神经疾病患者 (OND)和 6 3例正常对照 (NC)的血清测定了CJ抗体和GM 1抗体。结果　GBS组IgM型抗体和IgG型抗体的阳性率分别为 30 .9%和 34.6 % ,与OND组和NC组差异均有显著性。在IgM型GM 1抗体阳性的GBS患者 6 8%有CJ近期感染 ,IgG型GM1抗体阳性的患者 5 3.6 %有CJ近期感染。IgM型GM 1抗体与IgM型CJ抗体和CJ近期感染有关 ,而IgG型GM1抗体与IgG型CJ抗体和CJ近期感染无关。结论　IgM型GM 1抗体与CJ近期感染有关 ,而IgG型GM 1抗体与CJ近期感染无关。CJ感染后可通过GM1样结构发生交叉反应导致神经组织结构和功能的改变 ,但并非所有GM1抗体均为CJ感染引起的     

Borderline personality disorder symptoms and criminal justice system involvement: The roles of emotion-driven difficulties controlling impulsive behaviors and physical Aggression

ObjectiveBorderline personality disorder (BPD) is associated with elevated risk for a variety of risky behaviors, including criminal behaviors. Yet, limited research has examined the relation of BPD to criminal justice (CJ) involvement, or the mechanisms underlying this relation.ProceduresThis study examined the role of two mechanisms, emotion-driven difficulties controlling impulsive behaviors and physical aggression, in the relation between BPD symptom severity and CJ involvement among 118 patients in residential substance abuse treatment (76% male; 62% African-American). Participants completed measures of BPD symptom severity, CJ contact, diversity of CJ charges, emotion-driven impulse control difficulties, physical aggression, and covariates (substance use severity and antisocial personality disorder symptoms).ResultsBPD symptom severity was associated with CJ contact through emotion-driven difficulties controlling impulsive behaviors, and with diversity of CJ charges through emotion-driven difficulties controlling impulsive behaviors and physical aggression; however, the indirect relations to diversity of CJ charges became non-significant when covariates were included.ConclusionsResults highlight the important role of emotion-driven difficulties controlling impulsive behaviors in criminal behaviors among individuals with BPD symptoms, as well as the potential clinical utility of targeting this mechanism to prevent CJ involvement and/or recidivism.     

空肠弯曲菌黏附蛋白(PEB1)基因工程疫苗外周神经安全性的实验研究

目的 以空肠弯曲菌(campylobacter jejuni，CJ)菌体全抗原为对照，以基因重组的该菌融合黏附蛋白(TrxA／PEB1)作为CJ疫苗免疫大鼠，并对其神经安全性进行实验性评价。方法分别以纯化的TrxA／PEB1和CJ Pen19菌体全抗原经全身免疫增强法免疫大鼠，初次免疫后第2、4、5周采用ELISA法动态观察抗体滴度，并分别于第3、5周分离坐骨神经原纤维及行甲苯胺蓝染色光镜观察。采用ELISA法检测第5周抗血清与GM1抗原的结合反应。神经外膜下注射抗TrxA／PEB1和抗CJ全菌抗原的特异性抗血清，观察其神经病理学改变。结果 (1)经两种抗原免疫后，大鼠均产生高滴度特异性IgG，且各自与两种抗原发生交叉反应I(2)以CJPen19全抗原免疫后抗血清可与GM1抗原结合，而TrxA／I)EBI免疫者则否，(3)CJPenl9免疫组有60％大鼠坐骨神经出现以轴索变性为主的免疫性损伤。而TrxA／PEB]融合蛋白免疫者则未发生；(4)CJ Pen19免疫血清神经外膜下注射后全部大鼠均发生轴索变性为主的病变。且75％为显著病变，而TrxA／PEB1免疫血清外膜下注射后却未引起明显病变。结论CJ Pen19全菌抗原和。TrxA／PEB1纯化蛋白作为免疫原均可激发大鼠有效体液免疫应答，但与CJ全菌抗原相比，TrxA／PEB1蛋白所产生的全身免疫反应未引起周围神经损伤，其抗血清不含针对GMl抗原的抗体，对外周神经元免疫损伤作用。据此可认为TrxA／PEB1作为CJ疫苗安全可靠。     

Use of the criminal justice system to leverage mental health treatment: effects on treatment adherence and satisfaction

In efforts to divert persons with mental illness from jails and prisons, the option of community mental health treatment in lieu of incarceration is sometimes offered. In addition, community treatment can be mandated, or "leveraged," as a condition of probation or parole. However, little is known about the characteristics and attitudes of persons who are and who are not leveraged into community mental health treatment via the criminal justice (CJ) system. In the present study, over 1,000 outpatients with mental disorders were queried about their experiences with CJ leverages, as well as their clinical and treatment histories. Persons who had experienced at least one form of CJ leverage were more likely to be younger and male and to have more hospitalizations than persons who had never experienced a CJ leverage. However, leverage experience was not associated with treatment compliance and satisfaction, or perceptions of coercion and mandate efficacy, particularly when demographic characteristics were considered.     

格林-巴利综合征患者的HLA基因分型

目的 观察格林－巴利综合征（ＧＢＳ）患者及其亚组的ＨＬＡ基因分布与正常对照的差异,以寻找ＧＢＳ的遗传易感性及其与ＧＢＳ自身免疫因素的关系。方法 采用参照Ｏｌｅｒｕｐ等的文献合成的序列特异酌情处理寡核苷酸引物,用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法对４７例ＧＢＳ患者、７例ＣＪ肠炎和５０例正常对照进行ＨＬＡ分型。结果 在整个ＧＢＳ组、ＣＪ组、有ＣＪ近期感染的ＧＢＳ组、ＩｇＧ型和ＩｇＭ型ＧＭ１抗体阳性的ＧＢＳ组,ＨＬＡ－     

Memory for what it is and memory for what it means: a single case of Korsakoff's amnesia.

A single case of Korsakoff's syndrome, showing classic circumscribed amnesia on traditional neuropsychological tests, performed a number of learning tasks previously used in primates to demonstrate the different anatomical basis of memory systems used to learn about the properties of objects or to learn about rules of responding. The patient (CJ) performed in a manner very similar to lesioned monkeys in that he could learn evaluative tasks (e.g. a red object is nice), but not rule based tasks (e.g. a red object means go left). In consequence CJ learned an object discrimination task in a manner qualitatively different from a group of non-amnesic controls. Although he could not learn rule based tasks, CJ could perform them once he had been given the rule. Detailed analysis of learning showed that CJ could choose the object he had chosen previously, but could not say where it had been or whether he had been rewarded. Furthermore he could recognise a word as familiar, while not remembering its source. We propose that he has a specific impairment in a memory system concerned with the representation of the signification of objects in particular contexts, while representation of the properties of objects remains intact.     

Retained ability to extract gist in childhood-acquired amnesia: Insights from a single case

ABSTRACT

This paper presents the performance of a young amnesic person (CJ) in the DRM task. CJ was found to be sensitive to the DRM manipulation at a level comparable to controls in recognition and at a level higher than controls in free recall. Detailed analyses of recall intrusions lent further support to the finding that CJ is able to extract gist on the basis of semantic associations. Results are discussed with reference to relevant theory as well as the potential role of an impaired and immature cognitive system in adopting a semantic gist strategy in the absence of episodic memory.