胃癌及乳癌对化疗药物敏感性的测定

目的探讨胃癌、乳癌对常用化疗药物的反应性,筛选针对个体的化疗药物,为临床用药提供依据。②方法采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法,对肿瘤组织进行５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、顺铂（ＤＤＰ）、氨甲喋呤（ＭＴＸ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、长春新碱（ＶＣＲ）、平阳霉素（ＰＹＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）敏感性测定。③结果７种化疗药物对胃癌、乳癌抑制率不同,其中ＤＤＰ,５－ＦＵ,ＰＹＭ,ＶＣＲ,ＭＭＣ对胃癌抑制率较高;５－ＦＵ,ＰＹＭ,ＤＤＰ对乳癌抑制率较高。不同个体对化疗药物敏感性差异较大,胃癌病人对ＤＤＰ,５－ＦＵ,ＰＹＭ敏感者居多;乳癌病人对５－ＦＵ,ＰＹＭ敏感者居多。④结论不同肿瘤及同一肿瘤不同个体对化疗药物敏感性有显著差异。     

可作为人类骨癌药物筛选的突变鼠

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2008／7／2）报道，美国哈佛大学（Harvard University）及霍华休斯医学院（Howard Hughes Medical Institute，HHMI）的研究人员，设计了一个突变鼠模式，以作为模拟人类骨癌研究的平台，此研究发表于6月16日的《基因与发育》（Genes＆Development）期刊，由研究员Stuart H．Orkin主导研究。     

MTT法对膀胱肿瘤化疗药物敏感性的预测

①目的研究人膀胱肿瘤对化疗药物反应性，筛选对个体敏感的化疗药物。②方法采用四氮唑蓝（ＭＴＴ）法对手术切除的２７例膀胱肿瘤新鲜标本进行顺铂（ＤＤＰ）、保尔佳（ｐｏｌｙｅｒｇａ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、噻替哌（ＴＨＴ）、阿霉素（ＡＤＭ）和足叶乙甙（ＶＰ－１６）的抗癌药物敏感试验。③结果２７例中对３种药物敏感者１０例，占３７．０％；敏感药物顺序依次为：ＤＤＰ，ｐｏｌｙｅｒｇａ，ＭＭＣ，ＴＨＴ，ＡＤＭ和ＶＰ－１６，与临床治疗结果大致相符。④结论ＭＴＴ法可以作为化疗药物敏感试验的检测方法，为临床科学合理地选择用药提供依据。     

肿瘤体外化疗药物敏感性检测方法的研究

研究结果表明，人喉癌ＨＥ＿ｐ－２细胞接种数与克隆形成数、ＭＴＴ法ＯＤ值呈正相关、与空白对照相比，２．５×１０－４ｍｇ／ｍｌ丝裂霉素（ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＣ，ＭＭＣ）引起克隆形成率、ＯＤ值和拒染活细胞数减少（Ｐ＜０．０１），细胞生长抑制率分别为９６．８０％、８９．５８％和７５．５１％．ＭＭＣ的抑制作用具有时间依赖关系（ｒ＝０．９９９５．Ｐ＜０．０５）。ＭＭＣ造成细胞有丝分裂指数和多核率明显低于对照（Ｐ＜０．０１）．提示ＭＭＣ对ＨＥ＿ｐ－２细胞有较强的毒性作用。本文对体外肿瘤化疗药物敏感试验的方法学进行了探讨，为进一步临床应用奠定了基础。     

SX1小鼠对移植性S180、H22、EAC的敏感性研究

目的观察SX1近交系小鼠对不同途径接种移植性肉瘤S180、肝癌H22、腹水癌EAC的敏感性，为应用该品系小鼠建立肿瘤动物模型提供实验依据。方法分别以1×10^6、1×10^5、1×10^4、1×10^3/鼠细胞量腹腔接种受试动物，观察荷瘤动物的成瘤率及生存时间；分别以1×10^6、1×10^5、1×10^4/鼠细胞量皮下接种动物，观察成瘤率及肿瘤的体积变化。结果腹腔接种时，SX1小鼠对H22、EAC高度敏感，1×10^3细胞量即可100%成瘤，且随着接种量的增加生存时间明显减少。对S180在接种量为1×10^3/鼠成瘤为80%，1×10^4以上时为100%。皮下接种时，只有接种量达到1×10^6时，三株肿瘤均可100%成瘤，肿瘤生长迅速，当接种量小于1×10^5时，肿瘤生长不良。结论SX1小鼠对S180、H22、EAC三株肿瘤细胞均表现出高度敏感性，可以用作建立相应的荷瘤动物模型，腹腔接种时可以根据实验要求，选择1×10^5细胞量以上接种，皮下接种时，接种量应大于1×10^6/鼠，以确保成瘤率。     

双部位吸收药物的矩分析研究

矩分析与经典的室分析一样，已在药物动力学研究中被广泛采用。关于双部位吸收的药物，我们已提出其室分析方法，本文报道的是对其作矩分析的结果。我们导出了口服给药的平均滞留时间ＭＲＴｐｏ和平均吸收时间ＭＡＴ的计算公式，并利用文献报道的血药浓度数据，验证了这些公式的正确性。     

多靶点药物的研究及筛选策略的提出

临床实践表明,对于复杂疾病单一靶点的药物通常很难达到良好的治疗效果,甚至会出现严重的不良反应。系统生物学从整体的角度出发,揭示生命的本质和疾病的发生发展过程,为研发防治复杂疾病的药物提供了新思路和有力工具,由此产生的多靶点药物是针对复杂疾病的有效治疗手段。本文将基于“药效团”模型法提出多靶点药物的筛选策略,并对抗HIV多靶点药物的研究做简要介绍。     

以PRDM1基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立研究

目的 以PRDM1基因启动子为靶点构建双荧光素酶报告基因载体,建立体外药物筛选细胞模型,并对中草药小分子化舍物进行筛选.方法 将人PRDM1基因启动子序列(267、1 257 bp)克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,构建重组质粒pGL3-PRDM1并与内参质粒pRL-TK瞬时共转染工具细胞,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化反映PRDM1基因启动子的启动转录活性,并对共转染质粒比例、工具细胞选择等条件进行探索和优化,相关药物处理进行验证.结果 成功构建了荧光素酶报告载体pGL3-PRDM1.用0.5、1、2、4μmol/L的5-Aza-CdR处理重组的U266细胞筛选模型,与0μmol/L 5-Aza-CdR相比,增加5-Aza-CdR的刺激,荧光强度及PRDM1基因启动子的活性呈剂量依赖性增强.与0μmol/L相比,青蒿琥酯从5 μmol/L浓度开始对PRDM1基因启动子活性呈明显降低(P＜0.05),在20 μmol/L浓度时降到最低;白芍总苷呈现小剂量促进PRDM1启动子活性,高剂量抑制PRDM1基因启动子活性.青蒿琥酯对细胞生长增殖影响较小,白芍总苷对细胞生长增殖的影响较复杂.结论 成功建立了以PRDM1基因启动子为靶点的药物筛选模型,并筛选出青蒿琥酯能抑制PRDM1基因启动子活性.     

化疗药物对人胃癌细胞体外生长抑制作用的初步研究

目的:探讨5种常用化疗药物对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:选用不同浓度的化疗药物采用体外短期培养法,结合H3-TdR掺入技术测定其对新鲜人胃癌标本细胞生长的抑制率。结果:5种化疗药物对19例胃癌细胞的抑制率从高到低顺序为:5-FU、VP-16、MTX、MMC、ADM。其抑制率有随药物浓度提高而增高的趋势,各个体间的抑制率不同。药物中浓度对分化不良型(低分化及印戒细胞癌)的敏感性明显高于分化良好型(高,中分化型)。结论:化疗药物对不同个体胃癌细胞体外抑制率有显著差异,体外检测化疗药物的敏感性可为临床化疗提供指导。     

FGF21[Tyr20]突变体的克隆、表达及纯化

目的：将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法：以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物（SUMO）融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21［Tyr²⁰］,克隆至BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,Sephadex G-50除盐。结果：通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21［Tyr²⁰］经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符。经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21［Tyr²⁰］突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21［Tyr²⁰］突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应。结论：成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21［Tyr²⁰］的突变体基因,获得FGF21［Tyr²⁰］蛋白。     

多肽mPEG-SC20k-HM-3联合奥沙利铂对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用

mPEG-SC_20k-HM-3是具有整合素亲和性的一种新型高效血管生成抑制多肽,为探索其与传统化疗药物联用的抗肿瘤活性,建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,选用奥沙利铂为化疗药物,根据临床前抗肿瘤药效学方法评价联合用药的抑瘤作用,并用金氏公式判断两种药物的联合作用。结果显示,与单独用药相比,联合用药组的抑瘤效果更好,且均具有显著差异(P<0.05)。其中,奥沙利铂(7.5 mg/kg)联合mPEG-SC_20k-HM-3(73.4 mg/kg)的肿瘤抑制率为84.6%,抑制作用比单用奥沙利铂(7.5 mg/kg)和单用mPEG-SC_20k-HM-3(73.4 mg/kg)均有显著提高。根据金氏公式计算,其Q值为1.164(>1.15),可判定该组的用药组合表现出协同作用。结果表明,mPEG-SC_20k-HM-3与奥沙利铂单独给药均能抑制肿瘤生长,两者联用对肝细胞癌具有协同作用。     

高龄孕妇无创性唐氏综合征筛查模型及评分系统的建立

 目的  建立高龄孕妇 (advanced maternal age,AMA)无创性唐氏综合征 (Down′s syndrome,DS)的筛查模型及评分系统。方法  收集2009年1月至2014年1月期间在复旦大学附属妇产科医院建卡产检并分娩且病历资料及随访结果完整的AMA (分娩年龄≥35周岁)1 192例。记录孕妇年龄、有无不良孕产史、有无孕早期药物等不良因素暴露史、孕早期妊娠相关的血浆蛋白A (pregnancy-associated plasma protein A,PAPP-A)和人绒毛膜促性腺激素β-亚单位 (β-human chorionic gonadotropin, β-HCG)检测及超声测定颈项透明层 (nuchal translucency,NT)厚度、孕中期唐氏三联血清学筛查及孕中期遗传学超声检查结果,并随访妊娠结局。通过Logistic单因素及多因素回归分析得出对AMA唐氏阳性有影响的因素,据此建立AMA无创性DS产前筛查模型及评分系统。应用受试者工作特征曲线 (ROC曲线)及其曲线下面积 (AUC)显示自建模型预测唐氏风险的准确性。结果  1 192例AMA中唐氏患儿有6例。对1 192例AMA进行单因素及多因素Logistic回归分析,筛选出7个对DS疾病预测有意义的指标:孕妇年龄、孕早期药物等不良因素暴露史、胎儿侧脑室增宽、颈后皮肤皱褶（nuchal fold,NF）增厚、股骨短小、肱骨短小、心脏畸形。自建模型:Logit (P)=-24.595+0.474×年龄+3.045×孕早期药物等不良因素暴露史+2.864×胎儿侧脑室增宽+1.081×NF增厚+2.823×股骨短小-0.602×肱骨短小+3.654×心脏畸形（P:患病风险）。自建模型对AMA唐氏风险预测的AUC达到了0.8以上,显示出自建模型对AMA唐氏风险预测有较好的价值。结论  自建模型对AMA唐氏风险有一定的预测价值。