抗淋巴细胞血清联合他克莫司诱导大鼠肾脏移植免疫耐受实验研究

目的探讨抗淋巴细胞血清（ALS）联合他克莫司（FK506）在诱导大鼠肾脏移植免疫耐受中的作用。方法以SD大鼠作为供体,Wistar大鼠作为受体,建立大鼠肾移植模型。对照组（A组）仅行肾移植,术前术后未予免疫干预;ALS组（B组）术后当天腹腔注射ALS,连续应用至术后第10天;FK506组（C组）术后当天开始应用FK506,连续应用至术后第10天;联合组（D组）联合应用ALS与FK506。术后观测各组受者存活时间、移植肾功能、移植肾血供、免疫耐受状态等。结果D组平均存活时间为（37.0±5.3）d,与A组（7.4±1.6）d、B组（16.3±4.7）d及C组（17.5±5.3）d比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;手术后1周检查A组移植肾血供差,平均肾血管阻力指数0.80±0.06;B组和C组移植肾血供良好,平均阻力指数分别为0.62±0.07、0.63±0.08;D组移植肾血供良好,术后1周与术后20d平均阻力指数分别为0.61±0.04、0.62±0.03;D组与A组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论ALS联合FK506能够延长受者存活时间和促进免疫耐受的诱导。     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

糖尿病小鼠左肾被膜下胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型的建立

目的：建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型及探讨胰腺外分泌细胞对胰岛移植物的损伤作用.方法：（1）体内实验：采用胆总管内逆行灌注胶原酶联合淋巴细胞分离液的方法来分离纯化胰岛,人工挑取胰岛细胞并收集胰腺外分泌细胞.链脲佐菌素腹腔注射诱导BALB/C小鼠成为糖尿病小鼠.单纯移植组（n=10）每只小鼠于左肾被膜上极移植胰岛细胞250个,共同移植组（n =10）每只小鼠于左肾被膜上下极同时移植胰岛细胞250个和等体积的胰腺外分泌细胞,持续观测血糖及生命体征变化,1个月后切除左肾并继续检测血糖.（2）体外实验：利用双硫腙对胰岛进行特异性染色来计算胰岛产量及纯度,利用台盼蓝染色鉴定胰岛细胞的活性,以及用葡萄糖刺激胰岛素释放实验来检测胰岛功能.结果：（1）胰岛移植后,单纯移植组及共同移植组血糖均逐步降至正常,共同移植组较单纯移植组血糖恢复正常时间延迟,移植术后第2,3,4,5天,单纯移植组受鼠血糖低于共同移植组,差异有统计学意义（P＜0.05）.切除两组受鼠左肾3d后,两组受鼠血糖均＞21 mmol/L.（2）每只小鼠可获得150～200个高质量胰岛,纯度及活性均高于90％,葡萄糖刺激后胰岛素释放量明显增加（SI=2.90）.结论：（1）成功建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型.（2）胰腺外分泌细胞与胰岛细胞同时移植会延迟植入胰岛功能恢复正常的时间.     

移植部位对移植胰岛长期存活的影响

目的 观察移植部位对糖尿病小鼠移植胰岛长期存活的影响.方法 采用胶原酶P溶液胰管灌注和Ficoll-400不连续密度梯度纯化法获取供体小鼠胰岛.受体糖尿病小鼠分别接受同基因和异基因肾被膜下、小网膜囊和腋窝胰岛移植,监测受体移植后的血糖变化;根据血糖情况取移植胰岛排斥标本,观察不同部位移植胰岛的组织学变化.结果 成功分离、纯化供体小鼠胰岛,纯度为( 94±5)％或(90±5)％,存活率为(92±3)％.胰岛移植后均能使受体小鼠高血糖逆转至正常.同基因或异基因胰岛移植短期存活状态:肾被膜组与小网膜囊组的血糖降低值比较差异无统计学意义(P＞0.05),移植后肾被膜组血糖值显著低于小网膜囊组(P＜0.05);腋窝组血糖降低值和血糖值与肾被膜组和小网膜囊组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).同基因或异基因胰岛移植长期存活状态:肾被膜组与小网膜囊组血糖降低值比较差异有统计学意义(P＜0.05),且肾被膜组血糖值较低,移植胰岛存活率较高;腋窝组移植胰岛不能达到长期存活;在同一部位,同基因与异基因胰岛移植受体的血糖降低值比较,差异有统计学意义(P＜0.05).组织学检查发现:肾被膜组和小网膜组胰岛完整,有少量炎症细胞浸润;腋窝组胰岛细胞被破坏,大量炎症细胞浸润.结论 肾被膜下胰岛移植降血糖效果迅速、稳定,能达到长期存活的目的,可视为胰岛移植的理想部位.     

不同免疫抑制方案对移植肾早期功能的影响

目的探讨不同免疫抑制方案对移植肾术后早期功能的影响及安全性比较。方法将3种不同的免疫抑制方案分别用于肾移植患者。A组：CsA＋Aza＋Pred。B组：CSA＋MMF＋Pred、C组：FK506＋MMF＋Pred。根移植肾早期功能状态，统计A、B、C3组患者1年移植肾存活率，急性排斥发生率及移植肾功能恢复情况，药物副作用等。结果在3组患者中比较，B组和C组移植肾1年存活率高于A组；C组的急性排斥发生率均低于A组、B组（P〈0．05）。同时，C组的肝功能损害，肾毒性发生率明显低于A组、B组（P〈0．05）。结论通过临床不同免疫抑制方案的比较，认为应用MMF和FKS06组成的免疫抑制方案，具有更高的安全性，可减少急性排斥反应，药物毒副作用的发生率，提高肾移植的存活率，有利于移植肾早期功能的恢复。     

M2型巨噬细胞在糖尿病小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的：探讨腹膜腔来源的M2型巨噬细胞对糖尿病小鼠同种异体胰岛移植的抗排斥作用。方法：体外分 离诱导C57BL/6小鼠腹膜腔M2型和M0型细胞,流式细胞术鉴定巨噬细胞表型。链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导 C57BL/6雄性小鼠的糖尿病模型作为受体,分离BALB/c小鼠胰岛细胞移植于C57BL/6糖尿病小鼠左肾包膜下。将移植 后糖尿病小鼠随机分为3组,每组8只。于胰岛移植术后1,3,7 d分别经尾静脉输注PBS(islet+PBS组)、2.5×106个M0型 巨噬细胞(islet+M0组),2.5×106个M2型巨噬细胞(islet+M2组)。移植术后取尾静脉血监测受体血糖水平的变化,记录 胰岛存活时间,并于移植后10 d每组随机抽取2只小鼠处死取左肾做病理学检查,观察移植物形态结构和胰岛素表达 水平。结果：Islet+PBS组、islet+M0组和islet+M2组移植物的中位存活时间分别为6.5(4~10),7.5(4~10)和24(>15) d;与 islet+PBS组和islet+M0组比较,islet+M2组移植物调节血糖正常水平时间和中位存活时间明显延长(P<0.01)。病理学检 查结果显示islet+M2组胰岛移植10 d后移植物结构完整,胰岛素染色阳性;而islet+PBS组和islet+M0组胰岛移植物均被 排斥,胰岛素染色阴性,局部见大量淋巴细胞浸润。结论：腹膜腔来源的M2型巨噬细胞能减轻受体对胰岛移植物的 免疫排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间,从而提高受体对血糖的耐受能力。     

新鲜与短期培养胰岛细胞移植对移植胰岛存活的影响

目的 观察新鲜和短期培养后的小鼠胰岛细胞对移植后胰岛的再血管化及功能的影响.方法 C57小鼠作为胰腺供体,胆总管灌注胶原酶P溶液消化胰腺,Ficoll 400不连续梯度纯化获得胰岛细胞.接受不同胰岛细胞肾被膜下移植的受体糖尿病C57小鼠随机分成三组(n=10):A组接受新鲜胰岛细胞移植,B、C组分别接受培养1、3d的胰岛细胞移植.术后观察血糖变化并于移植后第14天取移植胰岛,分别进行HE染色和胰岛素、CD31免疫组织化学染色,并计算微血管密度.结果 胰岛细胞移植后3d内,三组小鼠的随机血糖浓度均＜11.0 mmol/L.A组小鼠在移植后第14天时的血糖浓度仍＜11.0 mmol/L,而B、C组小鼠血糖浓度在移植3d后呈现持续上升,此后各时间点的血糖浓度均显著高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学胰岛素染色结果显示:A组小鼠肾被膜下成团的细胞被染成棕褐色,B、C组类似细胞团仅有少量着色.免疫组织化学CD31染色发现,A组小鼠肾被膜下移植细胞团内部有大量细胞胞质被染成棕黄色,而B组和C组仅有少量细胞着色;A组肾被膜下胰岛内微血管密度显著高于B、C组(P＜0.05).结论 小鼠新鲜胰岛细胞移植较短期培养后胰岛细胞移植更有利于移植胰岛的再血管化及存活.     

多种免疫抑制药物在肾移植中应用的安全性比较

目的探讨不同免疫抑制方案对移植肾术后早期功能的影响及安全性比较。方法将三种不同的免疫抑制方案分别用于肾移植患者。A组：CsA＋Aza＋Pred、B组：CsA＋MMF＋Pred、C组：FK506＋MMF＋Pred。根移植肾早期功能状态，统计A、B、C三组患者1年移植肾存活率，急性排斥发生率及移植肾功能恢复情况．药物副作用等。结果在三组患者中比较．B组和C组移植肾1年存活率高于A组；C组的急性排斥发生率均低于A组、B组（P〈0．05）。同时，C组的肝功能损害．肾毒性发生率明显低于A组、B组（P〈O．05）。结论采用个体化免疫抑制方案较常规免疫抑制方案有更高的安全性，可减少急性排斥反应，药物毒副作用的发生率，提高肾移植的存活率．有利于移植肾早期功能的恢复。     

FK506和环孢霉素A在兔角膜缘移植术后抑制免疫排斥反应的疗效比较

目的研究FK506和环孢霉素A对同种异体兔角膜缘移植术后免疫排斥反应的抑制效应。方法将30只有角膜缘干细胞缺陷症的新西兰白兔随机分成3组：FK506治疗组、环孢霉素A治疗组和对照组，同种异体角膜缘移植术后分别给予0．5％FK506滴眼液、1％环孢霉素A滴眼液和生理盐水点眼，用药5周。术后持续观察11周，以角膜缘植片水肿、混浊程度、排斥反应发生时间和角膜新生血管作为眼表评估指标。结果观察期内，FK506组在抑制新生血管指数方面低于环孢霉素A组（P〈0．05），而两组在上皮排斥反应发生时间、移植排斥指数方面无显著性差异（P〉0．05）。结论同种异体角膜缘移植术后早期应用0．5％FK506和1％的环孢霉素A滴眼液均可有效抑制免疫排斥反应，在抑制角膜新生血管发生方面，FK506的作用强于环孢霉素A。     

胰腺干细胞和胰岛细胞在糖尿病 大鼠治疗中的疗效观察

目的 探讨大鼠胰腺干细胞与胰岛细胞移植在大鼠糖尿病治疗中的疗效。方法 通过链脲菌 素复制1 型糖尿病大鼠模型并随机分为胰岛细胞组和胰腺干细胞组。用胶原酶V 分别消化新生和成年大鼠 胰腺,Percoll 梯度离心分离胰岛细胞和胰腺干细胞。采用Bonner-Weir 法诱导胰腺干细胞分化,DTZ 染色 检测移植物纯度,AO/PI 检测移植物活性。分别记录手术前后大鼠血糖水平、胰岛素水平及移植物存活时 间;高糖刺激实验和腹腔糖耐量评价移植物功能;取各组大鼠移植部位标本行HE 染色和免疫组织化学染 色,观察组织形态学变化。结果 胰岛细胞组和胰腺干细胞组血糖分别在术后3 和5 d 恢复正常（P <0.05）, 两组大鼠术后不同时间点的血糖有差异（P <0.05）,胰腺干细胞组的降糖能力强于胰岛细胞组（P <0.05）。 两组大鼠移植后7 d 血清胰岛素水平均较术前升高（P <0.05）。高糖刺激实验表明,各组移植后15 和65 d 高糖刺激后的C 肽水平较刺激前升高（P <0.05）,胰岛细胞组移植后65 d 高糖刺激后C 肽水平低于胰腺 干细胞组（P <0.05）,胰岛素和C 肽水平监测结果表明胰腺干细胞组移植物胰岛素分泌维持时间长于胰岛 细胞组。移植后腹腔糖耐量实验结果表明移植物均功能良好。胰岛细胞组和胰腺干细胞组移植物的中位 存活时间分别为73 和88 d,Kaplan-Meier 曲线分析提示胰腺干细胞组移植物生存时间较胰岛细胞组延长 （P <0.05）。HE 染色提示肝脏门静脉移植区域可见新生血管包绕的胰岛细胞团,免疫组织化学染色证实细 胞团胰岛素阳性。结论 胰腺干细胞分化后经门静脉移植能安全有效地发挥降糖作用,疗效优于胰岛细胞 移植。     

一种简易高效的建立小鼠胰岛移植模型的方法

目的 探索一种简便高效的建立小鼠胰岛移植模型的方法。方法 摘取四只BALB/c小鼠的胰腺,0.25mmPenfine针对胰腺反复多点注射胶原酶P后静止消化20min;采用自制的推进式离心管,以单一密度梯度Ficoll液(1.088g/ml)纯化胰腺消化物,双硫腙对胰岛进行特异性染色,利用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能;纯化后的胰岛移植到实验性糖尿病C57小鼠的肾包囊下,术后观察其血糖变化。结果 纯化后共得到（789.6±26.4）个胰岛细胞当量（IEQ）,平均纯度为（77.12±3.23）％;胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时胰岛素的释放量为低糖时的2.35倍（P<0.01）。移植后可逆转糖尿病小鼠的高血糖平均达（16.3±2.9d）。结论 提供了快速获取小鼠胰岛细胞的方法,为胰岛移植的实验研究建立了一种简易高效的制作动物模型的方法。     

肾移植术后普乐可复应用的临床研究

目的研究肾移植术后应用普乐可复免疫抑制治疗的临床疗效和毒副作用。方法随机将62例肾移植受者分成两组：（1）FK506组（n=24）：应用FK506＋骁悉（MMF）＋强的松（Pred）治疗方案;（2）环孢素A（CsA）组（n=38）：应用CsA＋MMF＋Pred治疗方案。结果随访24个月,FK506组有2例（8.3%）、CsA组有9例（23.7%）发生急性排斥反应（P〈0.05）;两组肾功能恢复指标血清肌酐值无明显差异（P〉0.05）;FK506组和CsA组分别有3例（12.5%）和14例（36.8%）发生肝功能损害（P〈0.05）;分别有13例（54.2%）和22例（57.9%）血压升高（P〉0.05）;分别有4例（16.67%）和6例（15.79%）血糖升高（P〉0.05）。结论 FK506具有强效的免疫抑制作用,对于发生急性排斥反应、严重肝功能损害等肾移植术后患者由CsA切换成FK506治疗是安全有效的;应用时须根据血药浓度调整剂量,以减少不良反应的发生。     

The endothelial cells in islets of langerhans

The blood vessels of the pancreatic islets are of crucial importance for oxygen and metabolite supply, and dispersal of secreted hormones. In addition to this, endothelial cells have an important role in the revascularization process after islet transplantation. Studies have reported signs of poor engraftment of transplanted islets, presumably due to impaired revascularization. The aims of this study were to investigate islet endothelial cells and the revascularization process of transplanted islets. The lectin Bandeiraea simplicifolia was found to consistently stain endothelium of both endogenous and transplanted pancreatic islets. By using this marker, we investigated the vascular density of both endogenous and transplanted islets of C57BL/6 mice. One month post-transplantation, a time point when the implants are assumed to be completely revascularized, the graft vascular density was decreased at all investigated implantation sites when compared to endogenous islets. Furthermore, most of the blood vessels were located in the graft connective tissue stroma. Similar results were obtained six months post-transplantation and in cured diabetic animals after one month. In order to evaluate the function of intraportally transplanted islets, we developed a method to retrieve such islets. Enzymatic and mechanic treatment of the liver enabled us to re-isolate the transplanted islets for further in vitro studies. These islets had decreased insulin release, insulin content and glucose oxidation rate when compared to non-transplanted control islets. To understand the role of islet endothelium in the revascularization of transplanted islets we performed angiogenesis microarray studies on islet endothelial cells, from non-cultured, cultured and transplanted islets. We found that the islet endothelium expressed mRNA for both inhibitors and inducers of angiogenesis, and that this expression differed with time. In conclusion, these results provide a useful platform for further studies on the islet endothelium.     

Fas配体表达对同种胰岛移植的影响

目的探究睾丸细胞FasL表达能否对共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及胰岛细胞FasL基因转染对同种胰岛移植的影响。方法　将同种大鼠胰岛及睾丸细胞同时移植于糖尿病受体，重组腺病毒AdV-FasL感染胰岛细胞后移植，观察移植物存活情况、胰岛功能，并检测移植物内浸润淋巴细胞以及基因转染胰岛细胞凋亡情况。结果　单纯移植胰岛组平均存活期为(6.3±0.6)d。与胰岛细胞同时移植的睾丸细胞数增加至1×107时，存活期大于50d（P<0.05）。表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡。FasL基因转染组出现排斥加速，存活期缩短至(3.4±0.2)d。FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达，48h表达增强，移植后FasL转染胰岛细胞凋亡。结论　表达FasL的睾丸细胞与胰岛同时移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡，使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长，但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润，导致排斥加速。     

CD40LIg基因修饰骨髓间充质干细胞对异种胰岛移植排斥反应的抑制作用

 目的 探讨T细胞分化群40补体免疫球蛋白（CD40LIg）基因修饰骨髓间充质干细胞（MSCs）对异种胰岛移植排斥反应的抑制作用。方法 建立Wistar-SD大鼠异种胰岛移植模型,用携带CD40LIg基因的重组腺病毒感染的MSCs进行干预治疗,观察糖尿病大鼠胰岛移植后生存情况、血糖变化和移植物病理形态学改变,检测移植物CD40LIg和胰岛素的表达以及移植大鼠白细胞介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平变化。结果 (1)糖尿病大鼠血糖平均在移植后2天恢复正常,对照组血糖平均在移植后7天升高,单纯MSCs组和转染MSCs组血糖分别在20天和47天升高。(2)对照组、单纯MSCs组和转染MSCs组,移植物存活时间分别为（9±3.2）d、(25±5.3)d和(53±7.5) d,各组间比较具有显著差异(F =5.362, P < 0.05);移植糖尿病大鼠生存时间分别为（24±6.8）d、(51±7.9)d、(95±12.7)d,各组间比较差异具有显著性(F =6.821, P < 0.05)。(3)对照组在胰岛移植后7d内,IL-2和TNF-α的水平均急剧上升,显著高于移植前水平(P < 0.01)。(4) 两个治疗组移植物内均可见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,转染MSCs组移植物内可见CD40LIg和胰岛素的表达。结论 CD40LIg基因修饰骨髓间充质干细胞可以延长胰岛移植物的存活时间,抑制大鼠异种胰岛移植的排斥反应。     

大囊包被胰岛异种移植治疗糖尿病小鼠的实验研究

为防止胰岛异种移植后的排斥反应，根据免疫隔离原理，采用琼脂糖和胶原包被大鼠胰岛异种并将其植入糖尿病小鼠体内，观察受者的血糖变化。结果显示，接受大囊包被胰岛移植后，９２．３％的糖尿病小鼠血糖恢复正常，在不使用任何免疫抑制的飞速２下，受者正常血糖持续时间达１２５．８±５７．９天，而对照组正常血糖持续时间仅６．７５±２．９９天。受者耐糖曲线与正常对照组相似；