全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中泛素-蛋白酶体系统的表达变化

目的筛选在全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中,参与早幼粒细胞白血病-维甲酸α受体(PML-RARα)融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统相关基因。方法采用基因芯片技术检测泛素-蛋白酶体系统相关基因在ATRA诱导NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot方法在基因和蛋白水平对基因芯片部分结果进行验证,同时对这些基因在ATRA诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)初诊患者原代细胞分化时的表达情况进行检测。结果在ATRA诱导NB4细胞向粒系分化的过程中,发现许多泛素-蛋白酶体系统相关的基因主要在ATRA作用12h后表达上调,其中PSMB8和PSMB9这两个基因的芯片结果通过实时荧光定量RT-PCR和Western Blot得到验证。同时在ATRA作用于APL初诊患者原代细胞后,这些基因的变化情况也与作用于NB4细胞相似。结论在ATRA诱导APL细胞分化过程中筛选出一些受ATRA调控的参与PML-RARα融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统分子。     

蟾蜍灵增强全反式维甲酸对 NB4细胞的诱导分化作用

目的研究蟾蜍灵与全反式维甲酸(ATRA)联合对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞的诱导分化作用。方法细胞存活率测定采用锥虫蓝拒染法,诱导分化采用形态学分析、四唑氮蓝(NBT)还原试验及细胞分化抗原CD11b的流式细胞仪解析。结果蟾蜍灵5 nmol/L与ATRA30 nmol/L联合明显诱导NB4细胞向成熟粒细胞分化、联合应用较单独应用ATRA时NBT还原率增加了59.7%及CD11b表达增加了22.4%。结论蟾蜍灵与ATRA联合应用可显著增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用。     

NDRG1/c-kit在NB4细胞的表达

目的 观察NDRG1和c-kit在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的表达,探讨全反式维甲酸( ATRA)和三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞分化的作用机制.方法 采用1.0μmol/L ATRA、0.1μmol/L和1.0μmol/L As2 O3分别诱导NB4细胞.台盼蓝染色计算细胞生长率,吉姆萨染色观察细胞形态学变化,应用RT-PCR检测NDRG1和c-kit的表达.结果 ATRA明显上调了NDRG1mRNA的表达,同时使c-kit mRNA的表达下调.As2 O3也诱导了NDRG1在NB4的表达,但对c-kit没有作用.结论 ATRA和As2O3均可诱导NB4细胞分化,但其作用机制是通过调节不同的分子信号途径实现的.     

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制.方法应用基因表达谱芯片、RT PCR技术,检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化.结果基因表达谱芯片杂交显示,硫化砷作用于NB4细胞后,PNAS-2基因表达下调;RT PCR结果发现,NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调,并呈时间依赖性;APL原代细胞经硫化砷作用后,PNAS-2表达也呈下降趋势.结论硫化砷能够下调PNAS-2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达,推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一.     

LMO4的异位表达对NB4细胞增殖和分化的影响

目的 探讨LMO4 对急性早幼粒白血病细胞系NB4细胞增殖和分化的影响. 方法 利用 qRT-PCR和 Western blot法检测 NB4 中 LMO4 表达;利用慢病毒介导 LMO4 的cDNA感染NB4 细胞后,建立过量表达 LMO4 的 NB4 细胞株;采用MTT法检测细胞增殖;使用全反式维甲酸( ATRA)诱导NB4细胞分化0 ~48 h,瑞氏染色观察分化的细胞特性;流式细胞术分析NB4 细胞分化后产生CD11b阳性的细胞比例. 结果 qRT-PCR 和 Western blot 结果均提示 NB4中LMO4表达增加;ATRA诱导NB4分化时,LMO4的表达降低;MTT结果证实过量表达LMO4促进NB4增殖;瑞氏染色和流式细胞术结果均显示,过量表达LMO4能够促进ATRA诱导NB4细胞分化. 结论 LMO4参与调节NB4细胞的增殖,并能增加NB4细胞对ATRA的敏感性,促进其分化.     

TopoⅡβ在苦参碱诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用研究

[目的]探讨TopoⅡβ在苦参碱诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病(acute promye locyticleukemia,APL)细胞分化的作用.[方法]以全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)敏感的APL细胞系NB4及其ATRA耐药细胞株NB4-R1作为研究对象,选取对数生长期细胞,分为空白细胞对照组、ATRA组、苦参碱组、ATRA+苦参碱组.培养3d后,研究各组细胞形态的变化;用NBT还原实验分析细胞分化能力的变化;流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;免疫组化法检测拓扑异构酶TopoⅡβ亚型的表达变化.[结果]与ATRA组相比,0.1mmol·L-1苦参碱可协同1μmol· L-1维甲酸诱导NB4-R1细胞分化,使NBT还原阳性率明显增高(12％ VS 41.33％),并能诱导NB4-R1细胞表面分化抗原CD11b的表达百分率升高(32.776±6.610 VS 46.888±7.847)％;而对NB4细胞则无明显变化.单用苦参碱对NB4及NB4-R1细胞内TopoⅡβ均无明显作用;维甲酸联合苦参碱能降低耐药细胞株NB4-R1细胞内TopoⅡβ含量(P＜0.05).[结论]苦参碱体外能协同ATRA使NB4-R1细胞分化成熟,其作用机制可能与调控TopoⅡβ的表达有关.     

急性早幼粒细胞白血病应用全反式维甲酸治疗外周血及骨髓形态学的改变与预后关系

对38例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者经全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗后,观察外周血及骨髓细胞形态学的改变及其与预后的关系。方法:(1)对每例患者初诊及每次化疗前后外周血及骨髓细胞形态学进行观察;(2)治疗一般用ATRA60～80mg/d。结果完全缓解(CR)率73.6％;治疗中APL细胞有明显成熟分化表现者易达CR且不易复发;4例部分缓解(PR)病人及未缓解者成熟分化改变不明显,有一定判断预后意义;CR过程中外周血出现幼粒细胞提示有复发可能;经ATRA诱导2例见有骨髓抑制。     

全仅式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)对APL细胞组织因子表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞组织因子 (TF)表达的影响。方法　利用复钙时间测定、ELISA和RT PCR等方法 ,分别检测了ATRA和As2 O3 治疗前后APL患者骨髓单个核细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平 ,同时还检测了使用ATRA和As2 O3 处理APL细胞株NB4细胞和NB4 R1细胞以及转染PML RARa融合基因的U937细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平。结果　ATRA和As2 O3 在体内和体外均可以时间依赖的方式下调NB4细胞的促凝活性、TF抗原水平以及TFmRNA的转录。转染PML RARa融合基因的U937细胞与仅转染逆病毒载体的U937细胞相比 ,其TF表达水平显著升高 ;使用ATRA或As2 O3 分别处理转染PML RARa和转染逆病毒载体的U937细胞 ,其TF抗原水平均显著降低。结论　ATRA和As2 O3均可下调APL细胞TF的表达并降低其PCA ,As2 O3在诱导APL细胞凋亡的同时有可能通过下调APL细胞TF的表达而改善APL患者与DIC相关的出血症状。结果还提示APL细胞染色体易位产生的融合蛋白PML RARa可能对TF的异常表达有一定的影响 ,而ATRA和As2 O3对TF的下调作用可能不依赖于对融合蛋白PML RARa的降解。     

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RT-PCR技术，检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示，硫化砷作用于NB4细胞后，PNAS-2基因表达下调；RT-PCR结果发现，NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调，并呈时间依赖性；APL原代细胞经硫化砷作用后，PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS-2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达，推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。     

丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响

目的：研究丹参酮ⅡA（Tan ⅡA)对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞促凝活性（PCA）的影响。方法：使用Tan ⅡA处理NB4细胞，复钙时间检测NB4细胞的PCA，并用发色底物法测量反应体系中因子Xa(FXa)水平，ATRA处理的NB4细胞作为阳性对照组。结果：Tan ⅡA可下调NB4细胞PCA水平，与空白对照之间有统计学差异（P＜0．01）；Tan ⅡA和ATRA下调NB4细胞的PCA水平相似，无统计学差异（P＞0．05）；经Tan ⅡA作用的NBA4细胞，FXa水平降低。结论：Tan ⅡA与ATRA相似，均可降低NB4细胞的PCA水平，其降低PCA作用是通过下调NB4细胞TF的表达实现的。     

不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较

目的：通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较，力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物。方法：采用细胞生长曲线、形态学及NBT（硝基四氮唑蓝）还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能；细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果：三价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间剂量依赖性，而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用。结论：三价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物，可以老药新用，有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病。     

Modulation of Gene Expression Networks underlying Realgar-Induced Differentiation of Acute Promyelocytic Leukemia Cells

Objective: To elucidate the molecular mechanism of the differentiation of acute promyelocytic leukemia (APL) cell line NB4 induced by realgar. Methods: The response of NB4 cell to realgar was explored with a cDNA microarray representing 1003 different human genes. Results: The analysis of gene expression profiles indicated that 8 genes were up-regulated and 33 genes were down-regulated 48 hrs after realgar treatment. Among the 8 up-regulated genes, 2 genes were involved in ubiquitin proteasome degradation pathway. Some genes related to RNA processing, protein synthesis and signal transduction were down-regulated. Conclusion: The ubiquitin-proteasome degradation pathway may play an important role in the degradation of PML/RAR α fusion protein and the differentiation of NB4 cells.     

In vitro study on arsenic sulfide(realgar)-induced apoptosis of retinoic acid susceptible or resistant acute promyelocytic leukemia cell lines

Objective: To further understand the possible mechanisms of arsenic sulfide (realgar) in the treatment of acute promyelocytic leukemia (APL). Methods: All-trans retinoic acid (ATRA)-susceptible APL cell line (NB4 cells) and ATRA-resistant APL cell line (MR2 subclone) were used as models in vitro. At various times after incubated with various concentrations of realgar, NB4 and MR2 cells were observed by cell viability , cell proliferation and cell morphology; cell cycle and the expression of Annexin V were assayed by flow cytometry. Results: Cell viability and proliferation of NB4 and MR2 cells were inhibited after the treatment, to some extent, in a dose and time dependent manner. 177 - 711g/L of realgar treated NB4 and MR2 cell presented morphologically some features of apoptotic cells such as intact cell membrane, chromatin condensation and nuclear fragmentation, apoptosis body could be found by electron microscopy as well. Sub-Gl cells and cell cycle arrest were observed by flow cytometry. The proport     

急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的：构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60 R、NB4 R,并对其生物学性状进行鉴定。方法：以全反式维甲酸（ ATRA ）为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。 CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果：成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60 R、NB4 R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论：成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。     

Combination of all-trans retinoic acid with butyric acid and its prodrugs markedly enhancing differentiation of human acute promyelocytic leukemia NB4 cells

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｕｓｅＮＢ４,ａｎａｕｔｈｅｎｔｉｃｈｕｍａｎａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅ,ａｓｗｅｌａｓｔｈｅｍａｒｏｗｃｅｌｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋ...