乙型肝炎患者血清HBV cccDNA与肝组织HBV cccDNA、血清HBV DNA的关系及意义

目的探讨乙型肝炎患者血清HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)与肝组织HBV ccc DNA、血清HBV DNA的关系及意义。方法从本院2011年9月~2013年9月收治的乙型肝炎患者中随机选择69例进行研究。结果 15例肝组织及其血清标本中,HBV ccc DNA阳性检出率方面,血清标本显著低于肝组织,经比较差异有统计学意义,(χ2=7.13,P0.05)。肝组织HBV ccc DNA和血清中HBV ccc DNA水平以及血清HBV DNA水平之间均呈正相关关系,(r=0.62,r=0.72,均P0.05)。随着HBV DNA水平的升高,血清HBV ccc DNA拷贝数呈现出不断增大的情况,二者水平之间呈正相关关系(r=0.82,P0.05)。69例血清标本中,HBV DNA≥105拷贝/m L的高水平组的血清HBV ccc DNA阳性检出率达到96.6%,显著高于HBV DNA水平较低组(103拷贝/m L≤HBV DNA1×105拷贝/m L)经比较差异有统计学意义,(χ2=6.27,P0.05)。69例乙型肝炎患者血清标本中,随着病程的不断进展,HBV ccc DNA检出率呈现出不断上升的情况,其中肝癌组的检出率最高,不同病程之间的阳性检出率比较均有统计学意义,(均P0.05)。结论乙型肝炎血清HBV ccc DNA可间接反映出患者肝组织内的HBV ccc DNA情况,与HBV DNA之间具有显著的相关性,且与病程有关。     

慢性HBV感染者肝脏HBV cccDNA含量相关因素分析

目的探讨慢性HBV感染者肝组织中HBV cccDNA含量与血清病毒标志物、HBV DNA及肝脏病理分级的关系,为临床评价抗病毒治疗效果及疗程确定提供理论依据。方法以2007年5月-2008年2月住院的30例慢性HBV感染者为研究对象,应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测患者肝组织中HBV cccDNA、肝组织总HBV DNA（HBV tDNA）和血清HBVDNA,同时用化学发光免疫分析法检测HBsAg、HBeAg定量,分析感染者肝组织内HBV cccDNA与肝组织内HBV DNA、血清HBVDNA、HBsAg及HBeAg定量水平之间的关系,并比较肝组织中HBV cccDNA含量与肝脏病理炎症和纤维化分级的关系。采用Pear-son简单相关和Spearman等级相关法进行相关性分析。结果 30例慢性HBV感染者肝组织中均可检出HBV cccDNA,范围在3.15×103～1.06×107拷贝/mg;肝组织cccDNA定量与肝组织总HBV DNA定量呈正相关（r=0.375,P〈0.05）,与血清HBV DNA无相关性（r=0.174,P〉0.05）;肝组织中HBV cccDNA水平与血清HBsAg定量呈高度正相关（r=0.562,P〈0.001）,而与血清HBeAg定量无相关性（r=0.152,P〉0.05）。肝组织cccDNA定量与肝组织炎症活动度（G）及纤维化程度（S）无相关性（r=0.082,P〉0.05）。结论慢性HBV感染者肝组织内HBV cccDNA成稳定的中等水平复制;血清HBV DNA载量不能直接代表其肝组织中的HBV cccDNA水平;血清HBsAg定量可作为反映肝组织中HBV cccDNA水平的指标。     

慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物与HBV DNA的相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物(HBV serum markers,HBV-M)HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBcAb IgM含量与HBV DNA水平的相关性,为临床诊断和治疗提供依据。方法采用化学发光微粒子免疫测定法和荧光定量聚合酶链反应分别检测446例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量和HBV DNA水平,同时检测54例HBcAb IgM阳性患者的血清HBV DNA水平,统计分析HBV-M含量与HBV DNA水平的相关性。结果①CHB患者血清中,HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关(P<0.05),HBeAb和HBcAb含量与HBV DNA水平未见相关性(P>0.05);②HBcAb IgM阳性患者中HBcAb IgM含量与HBV DNA水平亦未见相关性(P>0.05)。结论 CHB患者血清HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关。定量检测HBV-M和HBV DNA能更好地了解HBV的动态变化,对诊断和治疗有重要指导意义。     

PCR-ELISA技术检测HBV YMDD变异

笔者采用PCR-ELISA技术对服用拉米夫定的患者进行HBV YMDD突变的检测,现报告如下。1 材料与方法1.1 研究对象 150例慢性乙型肝炎患者,男83例,女67例;平均年龄38.4岁,均为本院2000年10月～2002年4月治疗的患者,拉米夫定治疗时间为24～60W,HBV DNA定量检测次数均在4次以上。选择其中的28例血清HBV DNA     

HBV感染血清标志物、HBV DNA水平与性别的关系

探讨HBV感染者血清标志物、HBVDNA水平和性别之间的关系.选择495例HBsAg阳性的血清标本和502例HBV DNA高于1×108copy/ml以上的血清标本,分别通过ELISA法以及实时荧光定量法进行HBV感染血清标志物HBV DNA的检测.三种组合[组合1为HBsAg( )HBeAg( )抗-HBc( ),组合2为HBsAg( )抗-HBe( )抗-HBc( ),组合3为HBsAg( )抗-HBc( )]的HBV DNA阳性率(分别为95%、18%和53%)存在极显著差异(P＜0.01);女性在HBAg阴性模式中的比例与在HBeAg阳性模式中的比例差异显著(P＜0.05).HBV感染血清标志物、HBV DNA水平和性别之间存在着重要的关系;对于组合3的患者要给予足够重视;女性在高HBV DNA水平而且HBeAg阴性组合中的比例非常小,这也许与女性在肝癌患者中所占比例较低存在着一定的关系.     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg水平的相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度的关系。方法在951例慢性乙型肝炎患者,采用FQ-PCR法和Abbott化学发光微粒子免疫分析技术分别测定血清HBV DNA水平及HBsAg和HBeAg滴度,分析HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度的相关性。结果在951例患者中,HBVDNA阳性率为53.83%(512/951);患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度呈正相关(rs=0.45和re=0.49,P<0.05);在HBV DNA水平≥7lg拷贝/毫升患者,血清HBsAg和HBeAg滴度高于HBV DNA为3～7lg拷贝/毫升患者,HBV DNA为3～7lg拷贝/毫升患者血清HBsAg和HBeAg滴度大于HBV DNA<3lg拷贝/毫升患者,差异均有统计学意义(P<0.05);将HBsAg分为<1000 IU/ml、1000～10000 IU/ml和≥10000 IU/ml3组,结果不同HBsAg滴度患者血清HBV DNA水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论在血清HBV DNA≥7lg拷贝/毫升和HBsAg滴度≥10000 IU/mL患者,HBV DNA水平与HBsAg滴度呈正相关,在HBV DNA>3 lg拷贝/毫升患者,血清HBV DNA水平与HBeAg滴度呈正相关。     

HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清、肝组织HBV全基因序列分析

目的 了解HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织中的HBV基因序列,并比较其差异性.方法 以1例长期随访HBsAb阳性隐匿性HBV感染者作为研究对象,用多种试剂盒检测其血清HBsAg、HBsAb,提取外周血血清和肝组织HBV DNA进行全基因组分段扩增,行序列测定及同源性比较.结果 多种试剂盒检测均提示该例患者HBsAg阴性、HBsAb阳性;血清HBV DNA为103～ 105拷贝/mL;血清和肝组织来源的HBV DNA全基因测序完全相同,均为3 215个碱基、B基因型,与参照序列核苷酸同源性为98.82％,各编码区均没有缺失或移码突变,不同编码区的核苷酸序列同源性为98.37％～ 100％,氨基酸序列同源性为98.18％～ 100％,在S区存在几种变异如PreS1的Q80H、S的C64Y、E164G、L175S,但前S区、“a”决定簇、1 762/1 764、1 896位点均未见变异.结论 HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织来源的HBV基因序列无明显差异.     

两种血清HBV DNA提取方法的比较

目的比较磁珠提取法和浓缩提取法提取血清HBV DNA的效率,选择一种适用于血液筛查的核酸提取方法。方法将已知浓度的HBV标准血清,用阴性血清稀释,配制成不同浓度的HBV应用标准血清,同时用磁珠法和浓缩法提取HBV DNA,然后运用聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大技术(即三联放大技术)检测HBV DNA。结果 90、180、360、720、1440IU/mlHBV血清磁珠法提取物HB VDNA检出率分别为87.5%、100%、100%、100%和100%,浓缩法提取物HBV DNA检出率分别为0、0、0、25.0%和87.5%,差异有统计学意义(P0.05)。结论磁珠法提取物HBV DNA检出率高于浓缩提取法,且操作简单,自动化程度高,重复性好,适宜用于血液筛查中的核酸提取。     

慢性HBV感染者性别及HBeAg模式与血清HBV DNA水平的关系

目的探讨慢性HBV感染者性别、HBeAg与HBV DNA水平间的关系。方法运用荧光定量PCR检测151例从未经过保肝、降酶、免疫调节或抗病毒治疗的慢性HBV感染者的血清HBV DNA,同时运用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测HBV血清标志物,并按性别的不同对结果进行相关性探讨。结果 HBeAg阳性组中男50例,女28例,血清HBV DNA检出率为100%;HBeAg阴性组中男59例,女14例,血清HBV DNA检出率为49.3%(36/73)。总体上,2组血清HBV DNA水平差异无统计学意义。但按HBeAg状态分组后,HBeAg阳性组中男性感染者血清HBV DNA水平明显低于女性(P<0.05);HBeAg阴性组中男女HBV DNA水平差异无统计学意义。结论 HBeAg阳性组中男性感染者血清HBV DNA水平明显低于女性,可能因为男性对HBV的免疫抑制强于女性。而HBeAg阴性组中男性感染者血清HBV DNA水平与女性无差异,可能因为男性对HBV的免疫抑制虽然强于女性,但也更易导致HBV变异及肝脏炎症活动,病毒变异导致HBeAg阴转,但是HBV复制能力反而增强,因此与女性的HBV DNA水平比较无差异。     

HBV感染者血清标志物与HBV DNA的关系

目的了解乌鲁木齐地区HBV感染者血清学标志物与HBV DNA的关系。方法检测234例HBV感染者血清标志物,并用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果在本组234例HBV感染者中,血清前S1抗原阳性率为62.39%(146/234);前S2抗原阳性率为85.47%(200/234);HBV DNA阳性率为49.57%(116/234)。在HB-sAg/HBeAg/Anti-HBc阳性组,前S1抗原和HBV DNA阳性率较高。结论前S1抗原和HBV DNA能反映病毒的复制状态。     

HBV感染者血清中HBVcccDNA、HBeAg及HBV DNA的关系

探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PER分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎（AHB）、慢性乙型肝炎（CHB）、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了检测。HBVcccDNA仅见于HBV DNA阳性血清中；HBeAg阳性组的HBVcccDNA阳性率显著高于HBeAg阴性组（P〈0．05）；145例HBV DNA阳性患者中，HBVcccDNA阳性组HBVD—NA水平显著高于HBVcccDNA阴性组（P〈0．01）。血清HBVcccDNA可能是乙肝病毒在患者体内大量复制的血清标志。     

慢性乙型肝炎患者肝组织HBV cccDNA、总HBV DNA与血清HBV DNA的相关性及其与临床的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）、肝组织总HBV DNA（HBV tDNA）与血清HBV DNA之间的相关性及其与临床的关系。方法 78例慢性乙型肝炎患者入选本研究。肝组织β- globinDNA、HBV cccDNA和HBV tDNA采用实时荧光定量PCR方法检测,平均每个肝细胞HBV cccDNA和HBV tDNA含量（拷贝/cell）=HBV cccDNA（实测值）/β-globin DNA（实测值）和HBV tDNA（实测值）/β3-globin DNA（实测值）,肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA含量的计算单位定义为log₁₀拷贝/10⁶cell;采用实时荧光定量PCR、ELISA法检测血清HBVDNA和HBV标志物;采用免疫组织化学方法检测肝细胞中HBsAg和HBcAg的表达。统计分析采用pearson相关分析及t检验。结果 （1）肝组织HBV cccDNA与HBV tDNA定量呈正相关（r=0.696,P<0.001）;肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（r=0.304,P<0.01）;肝组织HBV tDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（r=0.341,P<0.01）;（2）肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义和（P均>0.05）;（3）肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义（P>0.05）;（4）HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量与HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;（5）肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA以及血清HBV DNA三者与肝脏炎症活动度及纤维化程度均无显著相关性（P>0.05）。结论 （1）血清HBV DNA定量结果并不一定能完全反映患者肝组织中HBV cccDNA和HBV tDNA含量,尤其在血清HBV DNA<500拷贝/mL时,肝组织中仍存在HBV cccDNA和HBV tDNA,且含量大小不等。（2）肝细胞内HBcAg定性检测阳性或者HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量均明显高于阴性患者;而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量均没有显著差异;（3）HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者,而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA均没有显著差异;（4）肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA及血清HBV DNA与肝脏炎症活动度和纤维化程度均无显著相关性。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV RNA、HBV DNA的检测及其与血清HBV DNA的关系

目的:探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中HBV感染情况及复制状态,以及与血清HBV DNA的关系.方法:应用PCR技术特异性,选择地检测慢乙肝患者PBMC中HBV RNA、HBV DNA,并与血清HBV DNA进行比较.结果:在慢乙肝患者PBMC中能检测出HBV RNA及HBV DNA,阳性率分别为38.78%及77.55%,且两者的检出率有一致性.当PBMC中HBV RNA阳性时,HBV DNA均为阳性(100%),而当HBV DNA阳性时,部分病例可表现为HBV RNA阴性,两者阳性符合率为50%.血清中HBV DNA阳性率为71.42%.PBMC中HBV RNA的阳性率与血清中HBV DNA的阳性符合率为63.33%,血清中HBV DNA与PBMC中HBV DNA阳性符合率为76.32%.结果提示:HBV能感染PBMC,在部分患者存在着活动性复制,这种复制表现为不同于肝细胞内的低水平复制.此外,HBV感染PBMC后也存在着非复制状态,表现为PBMC中HBV DNA阳性,但HBV RNA阴性.另外,当血中HBV DNA阴性时,少数病例PBMC仍可表现为HBV RNA及HBV DNA阳性.结论:HBV能够感染PBMC并存在活动性复制,可能是造成患者免疫功能紊乱、肝脏损害慢性化的重要原因之一.     

慢性乙型肝炎血清HBV DNA定量检测的临床意义

本文采用荧光定量PCR法对49例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA作定量检测,分析血清HBV DNA水平与疾病程度和HBV血清标志物(HBVM)的关系,探讨血清HBV DNA定量检测的临床意义。 资料与方法 一、检测对象 参照1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。慢性乙型肝炎49例,均存在肝功能异常,其中轻度19例、中度13例、重度17例。男42例,女7例。年龄18～78岁,平     

HBV-LP与HBV复制的相关性研究

目的针对HBV-LP与HBV复制的相关性进行研究。方法随机选择2012年12月至2015年9月期间,我院收治的HBV感染患者120例、健康体检患者120例,HBV感染患者作为观察组、健康体检患者作为对照组,针对两组患者血清进行检测,包括乙型肝炎病毒大蛋白、乙型肝炎病毒标志物,测定HBV-LP与HBV DNA,比较HBV-LP与HBV DNA的相关、阳性率等指标。结果在本次研究中,对照组患者的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA103拷贝/mL组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。对照组患者的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA103~105拷贝/mL组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。对照组患者的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA≥105拷贝/mL组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。观察组HBV DNA103~105拷贝/mL组的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA103拷贝/mL组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。观察组HBV DNA103拷贝/mL组的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA≥105拷贝/mL组的比较,差异具有统计学意义(P0.05)。观察组HBV DNA≥105拷贝/mL组的HBV-LP浓度与观察组HBV DNA103~105拷贝/mL组的HBV-LP浓度比较,差异具有统计学意义(P0.05)。HBV感染HBV DNA阳性患者血清HBV-LP之间存在相关性,HBV-LP阳性率为92.50%(111/120),HBV DNA阳性患者血清的HBV-LP阳性率为94.12%(96/102),HBV DNA阴性患者血清的HBV-LP阳性率为83.33%(15/18)。HBV-LP与HBV DNA阳性率之间存在相关性,HBV-LP随着HBV DNA拷贝数升高,阳性率增加。随着HBV DNA复制数增加,HBV-LP浓度升高,两者之间为正相关。结论在HBV感染患者中HBV DNA、HBV-LP检测,可有效判断患者体内HBV病毒进展、复制、及疗效和预后。     

乙型肝炎患者血清HBV标志物与HBV DNA相关性分析

目的探讨乙型肝炎患者血清学标志(HBVM)与HBV DNA的关系。方法对257例乙型肝炎患者同时检测HBVM与HBV DNA。HBVM检测用EHSA法，HBV DNA检测用PCR法。根据不同检测结果进行对比分析。结果在HBsAg HBeAg HBcAb阳性的血清中HBV DNA阳性率和含量最高，血清HBeAg与HBV DNA含量密切相关，但部分HBeAg阴性或抗-HBe阳性患者也有较高的HBV DNA阳性率及含量。结论PCR定量检测HBV DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱，在临床上有重要意义。     

HBV DNA阳性者相应HBV标志物表现形式及临床转归的探讨

我们对乙型肝炎病毒(HBV)感染经斑点杂交法检测血清HBV DNA阳性者196例,结合临床类型分析其HBV标志物表现形式。 资料和方法 一、对象中HBV感染者196例均系1996年5月至10月在北京佑安医院住院的患者。男153例,女43例,年龄14～71岁,平均39.8岁。病毒性肝炎临床诊断根据1995年第五届全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准,其中急性肝炎33例,慢性肝炎114例,重型肝炎5例,肝炎肝硬变30例,原发性肝癌14例。 二、方法 (一) 血清HBV DNA检测 采用斑点杂交法,试剂由北京肝炎试剂研究中心提供。 (二) HBV M检测 采用ELISA法,试剂由美国Abbott公司提供。 结果 一、血清HBV DNA阳性患者其对应HBV M的表现(见表1) 从表1可见,在196例     

不同方法抽提血清HBV DNA得率的比较

目的：比较不同的HBV DNA抽提方法对PCR产物量的影响,方法：将HBV DNA阳性血清及投入了HBV DNA质粒的HBV DNA阴性血清,分别采用7种不同方法抽提核酸,抽提物作PCR后,产物行琼脂糖凝胶电泳,并对阳性扩增条带进行密度定量,结果：血清直接煮沸法,经典的蛋白酶裂解加酚／氯仿抽提法,蛋白酶裂解加酚／氯仿抽提法省缺乙醇沉淀和柱抽提法的HBV DNA抽提得率分别为75．2％,13．8％,21．9％,用碱变性裂解和蛋白酶裂解后煮沸所得上清液,以及血清直接作为模板,行PCR后不能得到阳性扩增条带。结论：核酸抽提方法选择不当能直接影响基因检测的灵敏度,导致基因定量准确性下降,血清直接煮沸法抽提HBV DNA得率高,操作简便,省时和经济,值得推荐。     

乙型肝炎患者血清HBV DNA负荷和肝组织超微结构损伤的相关性

探讨乙型肝炎患者血清HBV DNA负荷和肝组织超微结构损伤的相关性。采用免疫荧光定量聚合酶链和超微病理学技术,分别检测随机选择的40例乙型肝炎患者血清HBV DNA负荷和其肝组织超微结构损伤。血清 HBV DNA水平和肝组织某些超微结构损伤(线粒体肿胀、溶酶体增多、汇管区淋巴细胞浸润、Kupffer细胞增生、肝细胞淤胆和间质纤维组织增生)呈正相关,但不呈直线相关(re=0．21,t=1．12,P>0．05);血清HBV DNA水平和肝组织某些超微结构损伤(内质网增生扩张、高尔基体扩张、贮脂细胞增生、毛细胆管扩张淤胆、毛细血管增生)无相关性(P>0．05)。乙型肝炎患者血清HBV DNA负荷和其肝组织某些超做结构损伤有相关性。     

248例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织HBsAg／HBcAg表达的相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理学损害和HBsAg／HBcAg表达的关系。方法 对248例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺活检,采用免疫组织化学法检测HBsAg和HBcAg,同时检测患者血清HBVDNA水平。结果 在肝脏炎症程度G1～G4四组患者之间血清HBV DNA水平无显著性差异（P〉0．05）,肝纤维化程度S1～S4四组患者之间血清HBV DNA水平也无显著性差异（P〉0．05）;在肝组织HBsAg表达强度-～＋＋＋四组患者之间血清HBV DNA水平无显著性差异（P〉0．05）,而肝组织HBcAg随血清HBV DNA水平的增高而表达增强。结论 慢性乙型肝炎患者肝组织炎症活动度和纤维化程度与血清HBV DNA水平无相关性。