黑色素瘤抗原-A1基因多态性及其在肝癌组织中的表达

目的了解黑色素瘤抗原(MAGE)-A1基因在肝癌组织中的表达状况,探讨该基因是否存在单核苷酸多态性(SNP).方法用RT-PCR方法检测49例原发性肝细胞性肝癌(HCC)患者肝癌组织MAGE-A1基因mRNA的表达情况,同时提取其中43例HCC患者的肝癌组织、癌旁组织及外周血细胞基因组DNA,PCR扩增MAGE-A1 DNA,并对上述PCR产物进行测序.结果49例患者中MAGE-A1 mRNA阳性22例,阳性率44.9%.43例HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞中扩增的KAGE-A1 DNA序列测定显示MAGE-A1基因存在两类变异:TAG有16例,变异发生率为37.2%,包括3个位置的变异:C159T,A272G,G393A,GTG变异有7例,发生率为16.3%,亦包括3个位点的变异即:A272G,C991T,A1125G.因为C991T没有改变编码的氨基酸,A1125G不在编码区,故仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A).结论MAGE-A1在HCC中高表达,表达率为44.9%.MAGE-A1 mRNA的表达与AFP无关.MAGE-A1基因存在三种SNP,但不影响其mRNA的表达.     

肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达，并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP)，以及基因变异在人群中的分布状况。方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA，用逆转录-多聚合酶链反应(RTPCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达，并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异；提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA，以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA，分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47．4％(9／19)，癌旁组织无表达。序列测定显示，MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型：一类是Ⅰ型(GenBank M77481)，发生率为11．1％(1／9)；另一类型(C159T，A272G，G393A)发生率为55．6％(5／9)，称之为TGA型，导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q；第三种类型(A272G，C991T，A1125G)发生率为33．3％(3／9)，仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A)，称之为GTG型。经对基因组DNA分析，证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变，而是SNP，其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为：Ⅰ型占26．3％(5／19)和60．9％(14／23)；TGA型占57．9％(11／19)和47．8％(11／23)，GTG型占21．1％(4／19)和21．7％(5／23)。TGA型和GTG型的序列已被GenBank收录，编号为AF463515和AY148486。在男性研究对象中，SNP型别在是否患有HCC及是否表达MAGE1抗原的患者中的分布差异均无显著性。SNP可能产生多个新的能与人白细胞抗原结合的抗原表位。利用多个模块从头搭建的方法，得到Ⅰ型和TGA型的蛋白三维空间结构模型。结论 MAGE-1在HCC患者的癌组织中表达，发现MAGE-1存在3种高频分布的SNP类型，尝试建立了MAGE-1蛋白的三维空间模型，这为进一步研究不同的MAGEI-1抗原性肽疫苗奠定了基础。     

结肠癌黑色素瘤抗原基因-1启动子去甲基化状态的研究

编码黑色素瘤相关抗原的黑色素瘤抗原基因-1(MAGE-1)作为沉默肿瘤相关基因,在正常细胞不表达,但具有在肿瘤细胞中转录并翻译出功能性产物而促进肿瘤演进的特点。该肿瘤抗原可被肿瘤患者T细胞识别,而成为一种十分有效的免疫系统攻击目标,诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,阻止肿瘤的生长扩散和复发[1]。结肠癌作为常见的     

肝癌相关基因甲基化的研究进展

DNA甲基化状态的改变是肝癌相关基因调控的一种方式，属于肝癌发生的早期事件，该文通过总结原发性肝癌相关的甲基化基因研究的最新进展，分析了基因甲基化在肝癌发病机制、早期诊断和治疗等方面研究中的地位和前景。     

黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织的表达

[目的]检测黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。[方法]采用RT-PCR法,对66例直肠癌患者的癌组织、癌旁"正常"黏膜组织和手术切缘组织(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE-A1的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。[结果]66例直肠癌患者的直肠癌组织、癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织MAGE-A1基因的表达阳性率分别为30.30%(20/66)、12.12%(8/66)、12.12%(8/66),3例直肠息肉标本未见MAGE-A1表达。肿瘤组织MAGE-A1基因表达阳性率均显著高于癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织(P0.05);而与年龄、性别、组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P0.05)。[结论]基于MAGE-A1基因在直肠癌中的高表达率,MAGE-A1表达蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。     

黑色素瘤抗原基因在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨黑色素瘤抗原基因（MAGE）-1、MAGE-3在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR方法检测MAGE-1和MAGE-3 mRNA在65例结直肠癌组织和相应正常黏膜组织中的表达,并对PCR扩增产物中的基因片段进行DNA测序验证。结果结直肠癌组织标本中,MAGE-1和MAGE-3表达率分别为18.5% （12/65）、33.9%（22/65）,MAGE-1和MAGE-3表达均为阳性者占12.3%（8/65）;相应正常黏膜组织均未检测到上述目的基因表达,DNA测序结果表明RT-PCR产物确为目的基因片段;除MAGE-1基因表达与患者年龄有相关性外（P=0.007）,两基因表达与其他临床病理特征均元相关性（P〉0.05）。结论MAGE-1、MAGE-3可作为结直肠癌疫苗的备选基因和免疫学检测的分子标志物,并作为肿瘤免疫治疗的特异性靶位基因。     

抑癌基因RASSF1启动子甲基化在肿瘤中的研究进展

肺癌和其它一些肿瘤中普遍存在人3号染色体短臂的杂合型丢失（loss of heterozygosity,LOH）,2000年Dammann等通过酵母双杂交技术从3p21.3分离鉴定出抑癌基因RASSF1A（rasassociation domain family 1A）。在许多人类肿瘤中存在RASSF1A启动子区域高甲基化,导致基因表观遗传失活。RASSF1A启动子区高甲基化可以作为肿瘤早期诊断和评价预后的一个候选分子标志。     

肝癌相关基因甲基化的研究进展

DNA甲基化状态的改变是肝癌相关基因调控的一种方式,属于肝癌发生的早期事件,该文通过总结原发性肝癌相关的甲基化基因研究的最新进展,分析了基因甲基化在肝癌发病机制、早期诊断和治疗等方面研究中的地位和前景。     

m6A甲基化修饰在肝癌中的研究进展

RNA修饰在许多生物学功能中起到至关重要的作用,其调控异常与癌症的进展有关.N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰是最普遍最重要的RNA修饰,在几乎所有重要的生物过程中发挥关键作用.m6A甲基化是由甲基转移酶(m6A writers)、去甲基化酶(m6A erasers)和m6A识别...     

去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。     

丛蛋白B1在不同肝细胞系及肝癌组织中的表达

肝细胞肝癌(HCC)是常见的并且危害严重的恶性肿瘤之一,转移复发性是延长肝癌患者生存时间的一个主要障碍[1].丛蛋白B1通过调节肌动蛋白和微管动力学控制细胞运动,同时通过R-Ras调节整合素,极有可能参与肝细胞肝癌的侵袭和转移.本研究观察了不同肝细胞系中丛蛋白B1的mRNA和蛋白质表达水平,并在人不同的肝组织中进行验证,以探讨丛蛋白B1在肝癌侵袭转移中的作用.     

肝癌细胞HepG2表达白细胞介素6的意义

近年来,炎症及炎症因子与肿瘤的关系得到进一步的关注.原发性肝细胞癌(HCC)的风险因素不仅包括HBV和HCV感染,还有慢性酒精性肝病、血色病和脂肪肝等慢性肝病,多种炎症因子及细胞因子参与其中,其中白细胞介素6(IL-6)与肝癌的关系已经流行病学及实验研究证实[1-2].近年本实验室观察到部分肝癌细胞株也表达IL-6,本研究进一步探讨肝癌细胞HepG2表达IL-6情况及其对HepG2细胞生长的影响.     

Promoter hypomethylation and reactivation of MAGE-A1 and MAGE-A3 genes in colorectal cancer cell lines and cancer tissues

INTRODUCTION Human tumors often display changes in DNA methylation, which include both genome-wide hypomethylation and site-specific hypermethylation. Global hypomethylation and CpG island hypermethylation have been recognized as important contributors to…     

丙型肝炎病毒F蛋白抑制肝癌细胞增殖功能的研究

目的 研究HCV F蛋白的生物学功能.方法 扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将编码HCV F蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中,用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞,经Blasticidine抗性筛选,拟建立HCV F蛋白稳定表达的细胞株,用RT-PCR方法检测HCV-F基因的表达.通过MTS、细胞计数、结晶紫以及流式细胞检测实验观察F蛋白对转染细胞增殖和细胞周期的影响.计量资料分析采用t检验.结果 成功建立了HCV F基因稳定表达的细胞株Huh7-F和SMMC7721-F,MTS、细胞计数实验均证实Huh7-F和SMMC7721-F细胞较对照细胞增殖速度减慢,Huh7-F稳定细胞株结晶紫定量A值为1.072±0.070,对照组为1.387±0.005(t=-6.347,P＜0.05);SMMC7721-F稳定细胞株A值为1.594±0.007,对照组为1.921±0.090(t=-4.81,P＜0.05).流式细胞仪检测Huh7-F稳定细胞株48hS期细胞百分比分别为47.12％±0.04％,对照组S期细胞数为55.32％000±1.45％(t=-7.99,P＜0.05);SMMC7721-F稳定细胞株S期细胞百分比分别为30.75％±0.09％,对照组S期细胞数为33.23％±0.28％(t=-5.91,P＜0.05).结论 稳定转染HCV F基因可以明显抑制Huh7细胞、SMMC7721细胞的增殖.     

KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究

目的 观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响,为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础.方法 培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H,瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组,转染空载体pcDNA3.1/HisC的细胞为空白对照组,未转染细胞为阴性对照组,采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KiSS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响.应用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,组间差异以两样本t检验分析. 结果 转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力(A值)分别为0.257±0.029、0.374±0.016和0.394±0.031,转染组明显低于空载体组(t=-7.90345,P＜0.01)和未转染组(t=-7.22752,P＜0.01);与Fibronectin基质的黏附能力(A值)分别为0.292±0.004、0.394±0.010和0.412±0.023,转染组明显低于空载体组(t=-20.93138,P＜0.01)和未转染组(t=-11.31371,P＜0.01);趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65.80±1.92、93.80±2.28和96.40±2.07,转染组明显低于空载体组(t=-30.11750,P＜ 0.01)和未转染组(t=-24.19142,P＜0.01);侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42.40±1.14、66.00±1.58和67.80±1.92,转染组明显低于空载体组(t=-27.0711,P＜0.01)和未转染组(t=-25.4,P＜0.01).而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力(A值)分别为0.644±0.027、0.669±0.022和0.678±0.027,转染组略低于空载体组(t=-1.60371,P＞0.05)和未转染组(t=-1.97828,P＞0.05);同时,转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞,也未出现明显的凋亡峰.结论 KiSS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能力,但可抑制其黏附、侵袭和运动能力,提示KiSS-1可作为一个候选的肝细胞癌转移抑制基因,可望成为肝癌侵袭转移治疗的新靶点.     

乙型肝炎病毒X蛋白在体外和体内对SMMC-7721细胞生长与分化的影响

近年来,HBV对肝癌细胞生物学行为的影响受到越来越多的关注.我们前期研究结果表明乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)可以诱导肝癌细胞株SMMC-7721发生上皮-间质样表型转化(EMT),并显著增强肝癌细胞侵袭转移潜能[1].     

不同转移潜能人肝癌细胞系转录因子活性差异分析

目的分析不同转移潜能人肝癌细胞系细胞核内转录因子活性的差异，筛选与肝癌转移相关的转录因子。方法应用转录因子活性芯片技术，在功能水平分析三种不同转移潜能人肝癌细胞系（Hep3B、MHCC97L和MHCC97H）细胞核内转录因子活性的差异，并用电泳迁移率变动分析和蛋白免疫印迹实验验证芯片结果。结果在345个候选的转录因子中，筛选出7个活性差异转录因子。随人肝癌细胞转移潜能的增高（Hep3B〈MHCC97L〈MHCC97H），活性上调的转录因子有5个，包括p53、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、核因子κb、信号传导及转录活化因子3（Stat3）和Sp1；活性下调的转录因子有2个，包括Rb和Smad3。结论转录因子活性异常与肝癌转移密切相关，本实验筛选出的转录因子可能有助于揭示肝癌转移的分子机制，并寻找新的预测指标及干预治疗的靶点。