睾酮抑制大鼠血管平滑肌细胞泡沫化及机制研究

目的研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)转化为泡沫细胞的抑制作用,并探讨其可能机制。方法培养大鼠VSMC,分为对照组、ox-LDL组、低(1nmol/L)、中(10nmol/L)、高(100nmol/L)浓度睾酮组。另外,设置睾酮组(100nmol/L)、氟他胺组(1μmol/L)、睾酮与氟他胺合用组,并与ox-LDL共培养建立泡沫细胞模型。利用油红O染色及酶荧光法检测不同浓度睾酮及氟他胺预处理对VSMC内脂质含量的影响,免疫印迹法检测各组细胞内线粒体融合素2(Mfn2)、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达变化。结果与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组VSMC脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P<0.05),CD36表达降低(P<0.05)。与睾酮组比较,睾酮与氟他胺合用组VSMC脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P<0.05),CD36表达增加(P<0.05)。结论睾酮以雄激素受体依赖的方式,抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化过程,其作用与睾酮上调Mfn2表达进而调节CD36和ABCA1表达有关。     

雌激素对氧化低密度脂蛋白诱导单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响

目的：研究17β-雌二醇对氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导单核细胞合成趋化因子受体CXCR2的影响。方法：单核细胞的研究模型为人前单核细胞系U937细胞。流式细胞仪测定单核细胞趋化因子受体CXCR2的蛋白表达，逆转录PCR测定其mRNA水平。结果：oxLDL(50μg/ml)可明显促进U937细胞的CXCR2mRNA及蛋白表达；17β-雌二醇（50nmol/L）预处理抑制了oxLDL(50μg/ml)诱导的U937细胞CXCR2的mRNA及蛋白表达，且17β-雌二醇（5-500nmol/L）抑制oxLDL(50μg/ml)诱导U937细胞合成的CXCR2蛋白呈正向量效关系。结论：雌激素抑制oxLDL诱导U937细胞产生的趋化因子受体CXCR2表达。     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。     

白细胞介素37对THP-1源巨噬细胞泡沫化的影响

目的:研究白细胞介素(白介素)-37对人THP-1源巨噬细胞泡沫化的影响及机制。方法:体外培养THP-1,用佛波酯(PMA)刺激24h使其分化为巨噬细胞后,进行以下处理:①用IL-37和(或)ox-LDL刺激THP-1源巨噬细胞24h;②用不同浓度的IL-37和ox-LDL同时刺激24h;③用ox-LDL刺激THP-1源巨噬细胞24h,再加IL-37干预24h,收集细胞。采用油红染色观察各组泡沫细胞所占细胞总数的比例,TC试剂盒测定细胞内TC的含量,利用RT-PCR、Western blot实验方法从mRNA水平和蛋白水平测定泡沫细胞清道夫受体CD36和SRA和ABCA-1的表达。结果:与对照组比较,IL-37能够明显减少泡沫细胞的形成,降低泡沫细胞TC的聚集[(303.10±8.90)ng/mg∶(150.40±7.36)ng/mg,P0.01],显著抑制巨噬细胞清道夫受体CD36和SRA的表达,并增强ABCA-1的表达,且作用效果与溶度呈正相关。对ox-LDL诱导的泡沫细胞,给予IL-37后仍能够显著上调ABCA1的表达,显著下调SRA、CD36的表达。结论:白细胞介素-37可抑制THP-1源巨噬细胞的泡沫化,其作用机制可能是通过IL-37抑制清道夫受体CD36和SRA、促进ABCA-1的表达实现的。     

肺炎衣原体通过上调清道夫受体A1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用。方法给予不同浓度的肺炎衣原体(1×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72h。运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达。结果高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%)。在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1 mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达。结论清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。     

清道夫受体CD36在CML抑制泡沫细胞迁徙中的作用

目的探讨清道夫受体CD36在羧甲基赖氨酸(CML)抑制泡沫细胞迁徙中的作用。方法 (1)首先观察CML对RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积和细胞迁移的影响,继之观察泡沫细胞中CML与CD36的相互作用,实验分为:对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组(40 mg/L ox-LDL)、CML组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML);(2)观察CD36在CML抑制泡沫细胞迁移中的作用。实验分两部分:首先观察CD36抑制剂SSO对RAW264.7泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML)和SSO组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+25μmol/L SSO);其次观察不同受体阻断对CML抑制泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML),anti-CD36组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+2μmol/L anti-CD36),anti-RAGE组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+2μmol/L anti-RAGE),mal BSA组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+400 nmol/L mal BSA)。连续24 h 1%BSA的培养基培养干预后进行相关检测(油红O染色、Transwell细胞迁移实验、免疫共沉淀实验、CD36免疫荧光染色等)。结果胆固醇氧化酶法定量及油红O染色定性显示CML可以有效促进RAW264.7巨噬细胞脂滴的蓄积并形成动脉粥样硬化斑块的关键组分泡沫细胞。Transwell细胞迁移实验和定量分析结果显示:与对照组相比,ox-LDL组中迁移泡沫细胞数减少43.5%(P0.05);与ox-LDL组相比,CML使泡沫细胞迁移数目减少49.2%(0.287±0.031比0.565±0.061,P0.05),表明CML抑制RAW264.7源性泡沫细胞迁移。免疫共沉淀实验及免疫荧光染色结果显示泡沫细胞中CML-CD36存在显著的相互作用。进一步的,用SSO或中和性抗体anti-CD36阻断CD36和清道夫受体抑制剂mal BSA阻断所有清道夫受体情况下,迁移的细胞数均较对照组显著增加(P0.05)。统计学分析显示,anti-CD36组细胞迁移指数为mal BSA组的81.3%(2.35±0.39比2.89±0.41,P0.05)。结论清道夫受体CD36是CML抑制RAW264.7泡沫细胞迁移的关键受体。     

整合素β1对泡沫细胞形成的影响及其机制

目的 探讨整合素β1对泡沫细胞形成的影响并初步阐明其作用机制.方法 针对整合素β1基因设计并化学合成siRNA.RAW264.7细胞与含0.1 g/L ox-LDL的培养基培养,分为空白对照组、转染siRNA阴性对照组(siRNANC)和siRNA组.应用油红O染色观察泡沫细胞形成,胆固醇氧化酶终点法测定细胞内总胆固醇的含量,原子力显微镜观察细胞膜上小凹结构的变化,Western blot和实时荧光定量PCR检测清道夫受体CD36蛋白和mRNA的表达.结果 与空白对照组相比,siRNA组油红O染色阳性细胞数明显减少,细胞内总胆固醇/总蛋白显著降低(P＜0.01).原子力显微镜下,siRNA干扰整合素β1基因后细胞未见明显的小凹结构.Western blot及荧光定量PCR结果显示siRNA组CD36蛋白和mRNA表达均显著减少(P＜0.01).结论 沉默整合素B1基因能有效减少RAW264.7细胞对ox-LDL的摄取,抑制泡沫细胞的形成,其机制可能与降低清道夫受体CD36的表达和减少细胞膜表面的小凹相关.     

RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后，RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平，其中以10^-7mol／L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。     

单核细胞源性泡沫细胞TREM-1的表达

目的 探讨髓系细胞触发受体-1(TREM-1)在氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞中的表达情况.方法 先后用PMA、ox-LDL诱导人U937细胞,使其转化为泡沫细胞.用RT-PCR法及Western印迹法检测PMA诱导组、低密度脂蛋白(LDL)组和ox-LDL组细胞中TREM-1 mRNA及蛋白的表达.结果 与PMA诱导组、PMA+LDL组细胞比较,PMA+ox-LDL组细胞TREM-1 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05).结论 TREM-1可能参与泡沫细胞的形成,与动脉粥样硬化(AS)斑块的发生发展密切相关,可能成为AS治疗的一个新的靶点或监测AS进展的一项新指标.     

雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)膜快速效应对人成骨样细胞MG63的OPG mRNA快速表达水平影响.方法 采用RT-PCR法分析经E2快速作用后的MG63细胞中OPG mRNA的表达水平.结果 E2膜快速效应能诱导人成骨细胞MG63 OPG mRNA表达水平出现一个快速增高现象,其表达高峰时间为E2作用后的10 min左右,而且这一现象能被G蛋白藕联抑制苏拉明所抑制.结论 而E2诱导的人成骨样细胞MG63中OPG mRNA表达水平的快速增高,可能与雌激素启动了雌激素膜受体介导的G蛋白藕联受体调节的磷脂酶C/腺苷酸环化酶通路有关.     

雌激素通过受体介导的通路影响大鼠心脏心钠素表达

目的研究雌激素对卵巢切除大鼠心脏雌激素受体(ER)α和β的调控及对血压、心率、心肌细胞心钠素(ANP)基因表达、合成和释放的影响。方法成年雌性Wistar大鼠随机分成5组假手术组,卵巢切除组和卵巢切除不同剂量17β-雌二醇组(80、800、8000ng·g-1·d-1)。测量大鼠收缩期血压(SBP)、心率;采用半定量RT-PCR和Western印迹方法,探讨不同剂量的17β-雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和ERβmRNA、ER蛋白质的表达调控及对ANPmRNA表达的影响;放射免疫方法测定血浆和心房组织ANP含量。结果超生理剂量的17β-雌二醇能降低卵巢切除大鼠SBP,减慢心率;成年雌性大鼠心脏ERαmRNA高于ERβmRNA的表达水平,而心房ERαmRNA表达又明显超过心室;卵巢切除减少心房ERαmRNA和蛋白质的表达,下调ANPmRNA,使心房组织和血浆ANP含量明显降低[(121±19)ng/mg组织vs(184±12)ng/mg组织,(196±21)ng/Lvs(288±36)ng/L,P<0.01];生理剂量17β-雌二醇能逆转上述改变。随剂量增加,17β-雌二醇的这种作用在一定程度上呈剂量依赖性关系。但卵巢切除和17β-雌二醇替代并不影响心脏ERβmRNA、心室ERαmRNA表达。结论超生理剂量雌激素可降低卵巢切除大鼠SBP,心率;ERα的高水平表达说明ERα是雌激素对心脏调控的优势受体;雌激素对心脏作用的主要靶部位是心房;雌激素促进心房肌细胞ANPmRNA的表达、合成和释放,通过受体依赖的ANP介导的通路发挥作用。     

腹部脂肪组织分泌抵抗素样分子α促进清道夫受体表达

目的探讨腹部脂肪组织抵抗素样分子α(RELMα)mRNA及蛋白表达情况,研究其对与动脉粥样硬化密切相关的巨噬细胞清道夫受体B(CD36)及平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响。方法取C57BL/6J小鼠腹部脂肪组织,体外培养巨噬细胞及平滑肌细胞,用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL,ox-LDC组)以及终浓度为3×10~(-6)mmol/L(A组)、9×10~(-6)mmol/L(B组)、2.7×10~(-5)mmol/L(C组)的RELMα刺激培养细胞,对照组加等量生理盐水刺激细胞。采用RT-PCR及免疫组织化学检测脂肪细胞内RELMα表达,采用流式细胞仪检测CD36及SR-A表达。结果小鼠腹部脂肪组织可见RELMαmRNA蛋白阳性表达。与对照组比较,ox-LDL组CD36荧光强度明显增强,SR-A表达阳性率明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,A、B、C组SR-A表达阳性率明显升高(P<0.05)。结论小鼠腹部脂肪组织能分泌RELMα,其不影响巨噬细胞CD36的表达,但能促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示腹部脂肪组织可能通过RELMα,影响SR-A表达从而促进动脉粥样硬化进展。     

24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞脂代谢因子ABCA1、CD36及炎症因子CD147、MMP-9的影响

目的通过体外实验探讨24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠腹腔巨噬细胞脂代谢因子ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、B族清道夫受体(CD36)和炎症因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法分别采用50 mg/L ox-LDL和10 mg/L Dil-ox-LDL诱导巨噬细胞,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A进行干预。荧光显微镜观察细胞内Dil-ox-LDL蓄积情况;蛋白免疫印迹检测细胞ABCA1、CD36、CD147、MMP-9蛋白的表达。结果 10 mg/L Dil-ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞内有大量的Dil-ox-LDL蓄积,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,细胞内Dil-ox-LDL蓄积明显减轻。与对照组比较,50 mg/L ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞ABCA1、CD36和CD147、MMP-9蛋白表达明显增加,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,ABCA1蛋白表达进一步上升(P0.01),CD36、CD147和MMP-9蛋白表达被明显抑制(P0.05或P0.01)。结论 24-乙酰泽泻醇A上调巨噬细胞的脂代谢因子ABCA1和抑制CD36的表达,减少胆固醇蓄积,同时抑制炎症因子CD147和MMP-9的分泌。     

瑞舒伐他汀对TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD_（36）、SR-AⅠ表达的影响

目的观察瑞舒伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD36和SR-AⅠ表达的影响。方法体外培养TPH-1巨噬细胞,分三组置6孔培养板中。对照组为正常生长的TPH-1巨噬细胞;ox-LDL组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化;瑞舒伐他汀组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化,然后加入瑞舒伐他汀10μmol/L培养2 h。检测各组细胞内清道夫受体CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA。结果与对照组相比,ox-LDL组CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA表达增加（P均〈0.05）;与ox-LDL组相比,瑞舒伐他汀组CD36、SR-AⅠ蛋白及mRNA表达明显降低（P均〈0.05）。结论瑞舒伐他汀可降低ox-LDL诱导的TPH-1巨噬细胞中清道夫受体CD36、SR-AⅠ的表达。     

高糖对HDL调节THP-1巨噬细胞CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响

目的　观察高糖对　HDL调节THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）表达的影响。方法　用50　mg/L　ox-LDL、50　mg/L　ox-LDL+50　mg/L　HDL、50　mg/L　ox-LDL+50　mg/L　HDL+20　mmol/L　D-葡萄糖、50　mg/L　HDL、50　mg/L　HDL+20　mmol/L　D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24　h,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,　RT-PCR和Western　Blot分别检测CD36、PPARγ、p-PPARγ　mRNA和蛋白的表达。结果　加用HDL组明显减少脂质蓄积,加用HDL组的CD36　mRNA　和蛋白的表达下调,PPARγ的mRNA　和蛋白及p-PPARγ的蛋白表达上调;而同时加用50　mg/L　HDL和　20　mmol/L葡萄糖组CD36和PPARγ的mRNA及蛋白表达上调,而p-PPARγ的表达下调（P<0.05）,并促进脂质蓄积。结论　高糖可使HDL　抑制CD36表达及脂质蓄积的作用减弱。     

高糖对THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的影响

目的 观察高糖对THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36表达和脂质蓄积的影响。方法 用不同浓度的D-葡萄糖（分别为5.6、11、20、30及35 mmol/L）、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、50 mg/L ox-LDL＋20 mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,定量PCR与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果 随着D-葡萄糖处理THP-1巨噬细胞浓度的增加,CD36 mRNA和蛋白的表达逐渐增加（P<0.05）;高糖可协同ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,并增加细胞内总胆固醇水平（P<0.05）。结论 高糖可诱导THP-1巨噬细胞CD36的表达上调,并促进细胞内脂质蓄积。     

泽泻汤对巨噬细胞源性泡沫细胞MMP-9表达的影响及其与ERK通路的相关性

目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL（50 mg/L）诱导后建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察泽泻汤对泡沫细胞MMP-9表达的影响及其与ERK通路的相关性。方法 用ox-LDL（50 mg/L）处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,经20%泽泻汤含药血清干预24 h,油红O染色检测泡沫细胞形成情况,RT-PCR检测泡沫细胞MMP-9 mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测泡沫细胞MMP-9和ERK信号分子的表达情况。结果 ox-LDL（50 mg/L）处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型;与空白组比较,模型组MMP-9mRNA和蛋白表达明显增加,经20%泽泻汤含药血清、U0126干预后,MMP-9 mRNA和蛋白、p-ERK蛋白表达水平较模型组显著降低。结论 ox-LDL（50 mg/L）处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型;ERK通路受抑制能减少泡沫细胞中MMP-9的表达,泽泻汤能抑制巨噬细胞源性泡沫细胞MMP-9表达,其作用机制可能与ERK的磷酸化密切相关。     

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的 观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用.方法 采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化.结果 10-10 ～ 10-6 mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8 mol/L 17β-雌二醇作用最为明显；预先给予10-6 mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应.用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用；10-8 mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加；10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用.结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应.     

脑肠肽Ghrelin通过生长激素促分泌素受体下调人源单核细胞株THP-1源性泡沫细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的实验研究

目的 探讨脑肠肽Ghrelin对人源单核细胞株THP-1源性泡沫细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达的调控作用及其调控途径.方法 体外培养人源单核细胞株THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,继而在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞,油红O染色法鉴定泡沫细胞形成.运用PT-PCR法和Western blot法分别检测Ghrelin干预后及拮抗生长激素促分泌素受体(GHS-R)后ACAT-1 mRNA水平与ACAT-1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量并计算胆固醇酯含量.结果 Ghrelin可明显减少细胞内胆固醇酯的含量,并能显著降低单核/巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA水平和蛋白表达(P均<0.01).拈抗GHS-R后,Ghrelin抑制泡沫细胞形成的效应被阻断,且GHS-R特异性拮抗剂浓度越高,该阻断作用越明显.浓度为10~(-5)、5×10~(-5)、10~(-4)mol/L的GHS-R特异性拈抗剂组ACAT-1mRNA水平与蛋白表达分别为1.14±0.04、1.58±0.03、2.40±0.16和1.25±0.09、1.77±0.11、2.30±0.09,明显高于Ghrelin组0.89±0.05和0.86±0.08(P均<0.05).结论 Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调抑制泡沫细胞的形成,从而延缓动脉粥样硬化的发生,且该效应通过GHS-R途径发挥作用.