RNA干扰对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用.方法:设计合成针对Skp2的小干涉RNA(siRNA)并进行转染.实验分为空白对照组、转染组1、转染组2、转染对照组及阴性对照组.采用Real time PCR和Western blotting技术检测各组Skp2 mRNA和蛋白水平的变化,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组卵巢癌细胞增殖情况.结果:应用Skp2-siRNA干扰SKOV3卵巢癌细胞株后,转染组1、转染组2的Skp2mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与空白对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),转染组1与转染组2之间差异无统计学意义(P＞0.05).转染组1与转染组2基因沉默效率分别为75.31%和76.86%,蛋白抑制率分别为62.10%和63.11%,细胞增殖抑制率分别为52.75%和53.06%.结论:RNAi技术能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株Skp2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖.     

前列腺癌组织中Skp2的表达及其与前列腺癌术后复发的关系

目的 研究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在前列腺癌患者中的表达及其与前列腺癌术后复发的关系.方法 选择2010年6月-2012年6月接受手术的前列腺癌86例作为观察组,同时选取良性前列腺增生25例作为对照组,检测两组前列腺组织中Skp2的mRNA水平和Skp2蛋白的表达,根据Skp2表达情况将观察组分为阳性组和阴性组,分析Skp2表达与临床病理特征及术后复发的关系.结果 与对照组相比,观察组前列腺癌组织中Skp2mRNA和Skp2蛋白的表达均显著升高(P＜0.05).观察组Skp2阴性35例的1、2、3年复发率为8.57％、25.71％、31.43％,显著低于Skp2阳性51例的27.45％、39.22％、49.02％ (P＜0.05);Skp2阴性患者1、2、3年生存率分别为97.14％、91.43％、82.86％,显著高于Skp2阳性患者的90.19％、84.31％、70.59％ (P＜0.05).结论 前列腺癌组织中Skp2 mRNA和Skp2蛋白的高水平表达与前列腺癌组织分型、临床分期、肿瘤浸润程度以及淋巴结转移有一定关系,可能是前列腺癌发展的重要机制之一.     

PPAR-γ和p27~(kip1)、Skp2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)-γ、p27kip1和细胞S期激酶相关蛋白(Skp)2蛋白在肝癌发生发展过程中的作用。方法:肝细胞癌组织标本57例(肝癌组)和正常肝组织标本(对照组)20例。采用免疫组织化学方法检测2组PPAR-γ、p27kip1及Skp2蛋白的表达,分析它们之间及其与肝癌临床病理特征的关系。结果:肝癌组PPAR-γ及Skp2蛋白的阳性表达率高于对照组,p27kip1蛋白阳性表达率低于对照组(P0.05),PPAR-γ蛋白与Skp2、P27kip1蛋白在不同TNM分期中的表达差异均有统计学意义(P0.05)。PPAR-γ蛋白与Skp2、p27kip1蛋白表达无相关性(P0.05);Skp2与p27kip1蛋白的表达呈负相关(r=-0.307,P=0.020)。Skp2蛋白低表达组的1、3、5年生存率高于高表达组(P0.001)。结论:PPAR-γ和Skp2蛋白表达与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,Skp2可作为判断肝细胞癌预后的指标。     

The Expression and Clinical Significance of PPAR-γ, p27kip1 and Skp2 in Hepatocellular Carcinoma

目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)-γ、p27kip1和细胞S期激酶相关蛋白(Skp)2蛋白在肝癌发生发展过程中的作用.方法:肝细胞癌组织标本57例(肝癌组)和正常肝组织标本(对照组)20例.采用免疫组织化学方法检测2组PPAR-γ、p27kip1及Skp2蛋白的表达,分析它们之间及其与肝癌临床病理特征的关系.结果:肝癌组PPAR-γ及Skp2蛋白的阳性表达率高于对照组,p27kipl蛋白阳性表达率低于对照组(P＜0.05),PPAR-γ蛋白与Skp2、P27kip1蛋白在不同TNM分期中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05).PPAR-γ蛋白与Skp2、p27kip1蛋白表达无相关性(P＞0.05);Skp2与p27kip1蛋白的表达呈负相关(r=-0.307,P=0.020).Skp2蛋白低表达组的1、3、5年生存率高于高表达组(P＜0.001).结论:PPAR-γ和Skp2蛋白表达与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,Skp2可作为判断肝细胞癌预后的指标.     

他视角

Skp2抑制剂,有望成为肿瘤防治新药物 近年来的研究显示,细胞衰老在肿瘤的发生和发展中起着很重要的作用。因癌基因或抑癌基因的缺失所致的细胞衰老,也一直认为是由p19Arf-p53通路所致。而近期的《自然》杂志中有研究指出,由Skp2基因失活所致的细胞老化,并不依赖于Arf—p53通路。Skp2E3泛素连接酶具有原癌基因活性,在人类癌症组织中经常可以发现其过表达。     

Skp2-siRNA干预对Eca-109食管癌细胞系p21和p27蛋白及细胞周期的影响

目的探讨Skp2-siRNA干扰后食管癌Eca-109细胞株Skp2、p21和p27蛋白表达情况及其对细胞增殖调控的影响。方法经Skp2-siRNA干扰食管癌Eca-109细胞株24、48和72 h后,用免疫细胞化学法检测Skp2、p21和p27蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布。结果食管癌Eca-109细胞株主要分布在G1期,Skp2蛋白表达下降（P＆lt;0.05或＆lt;0.01）,p21和p27蛋白的表达增高（P＆lt;0.05或＆lt;0.01）。结论运用Skp2-siRNA技术可以有效降低对p21和p27蛋白的降解,促进细胞停滞在G1期,降低细胞增殖活性。     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.     

Skp2蛋白在肺癌癌组织中表达及与临床病理特征的关系

目的 研究Skp2蛋白在肺癌癌组织中表达及与临床病理特征的关系.方法 选取2012年3月至2016年3月在我院就诊经病理检查确诊为肺癌患者的存档蜡块标本78例.选取同期在我院进行检查的30例健康患者的正常肺组织进行对照研究,进行免疫组化法检测,比较Skp2蛋白在正常肺组织与肺癌组织之间的表达以及Skp2蛋白表达与临床病理特征间的关系.结果 肺癌组织中的Skp2蛋白阳性率为44.9%显著高于正常肺组织的6.7%(P<0.05).Skp2的阳性表达与肺癌组分化程度、TNMT分期、淋巴结转移相关(P<0.05).结论 Skp2蛋白与肺癌的发生与发展存在密切联系,参与肺癌组织的侵袭与转移,对判断肺癌患者预后具有重要意义.     

Skp2、P27和CyclinE在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨浸润性宫颈癌(ICC)组织中Skp2、P27和CyclinE的表达情况及其临床病理意义。方法选取2012年1月～2018年1月我院病理科存档石蜡包埋ICC组织标本70例为ICC组,宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本30例为CIN组和正常子宫颈鳞状上皮(NCE)组织标本50例为NCE组。采用免疫组织化学法检测各组标本中Skp2、P27和CyclinE表达情况。结果 ICC组、CIN组、NCE组Skp2、CyclinE蛋白表达的阳性呈明显降低趋势,P27蛋白表达的阳性呈明显升高趋势,差异有统计学意义(P 0.05)。在ICC组中,Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表达与年龄、肿瘤大小、临床分期无明显关系(P 0.05);而与组织学Ⅲ级、间质浸润浅肌层、盆腔淋巴结转移阳性和脉管浸润阳性者Skp2蛋白和CyclinE蛋白表达阳性率分别显著高于组织学≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者,P27蛋白表达阳性率分别显著低于组织学≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者,差异有统计学意义(P 0.05)。随访资料显示,ICC组生存期≥5年者38例,生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表达阳性率明显低于生存期5年者,P27蛋白表达阳性率明显高于生存期5年者,差异有统计学意义(P 0.05)。结论 Skp2、P27和CyclinE共同参与了宫颈癌的发生发展。Skp2和CyclinE蛋白高表达可能是宫颈组织恶变的重要生物学标志,Skp2和CyclinE过度表达,伴P27的低表达提示肿瘤具有更高的侵袭性及不良预后。     

1,25二羟维生素D_3对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp_2/p27蛋白表达的影响

目的:观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对人卵巢癌细胞株HO8910增殖的影响,并且检测其作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27的蛋白表达情况,以探讨其作用机制。方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度D3[1,25(OH)2D3]对细胞株作用不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫细胞化学染色检测Skp2及p27蛋白表达情况。结果:1,25(OH)2D3在160×10-9mol/L以上时,对细胞有抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;1,25(OH)2D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数(P<0.01);能降低Skp2表达,增加p27蛋白表达(P<0.01)。结论:1,25(OH)2D3对人卵巢癌细胞株HO8910有抑制作用,可能通过下调Skp2表达、上调p27蛋白表达,从而抑制癌细胞增殖。     

Skp2和p27蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨在骨肉瘤组织中Skp2、p27蛋白的表达水平及其与肿瘤的发生、发展及预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法,检测35例骨肉瘤、14例骨软骨瘤中Skp2和p27蛋白的表达情况,并分析其在骨肉瘤不同病理分级、临床分期中的表达及两者之间的相互关系。结果 Skp2蛋白在骨肉瘤中阳性表达率为74.3%(26/35),而在骨软骨瘤中阳性表达率为11.4%(4/14),两者比较差异有统计学意义(χ2=8.803,P=0.003);p27蛋白在骨肉瘤中阳性表达率为40.0%(14/35);而在骨软骨瘤中阳性表达率为78.6%(11/14),两者比较差异有统计学意义(χ2=5.954,P=0.015)。Skp2蛋白在骨肉瘤组织中的表达与Enneking分期、肺转移密切相关(P<0.05),p27蛋白在骨肉瘤组织中的表达与Enneking分期密切相关(P<0.05),且临床期别越高,Skp2的表达阳性率越高,而p27表达阳性率越低,且Skp2蛋白与p27蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。结论 Skp2和p27蛋白表达的情况与骨肉瘤的发生和转移有密切关系,检测P27和SKP2的表达对临床具有重要的指导意义。     

采用组织芯片技术检测肺癌中泛素、Skp2、p27的表达

目的研究肺癌组织中泛素(Ubiquitin)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)及细胞周期调控因子p27的表达及其意义。方法采用组织芯片技术制作80例肺癌组织芯片,同时用S-P免疫组织化学方法检测肺癌组织芯片中Ubiquitin、Skp2及p27的表达。结果80例肺癌中Ubiquitin、Skp2和p27的阳性率分别为45.0%、48.8%、38.8%。Ubiquitin、Skp2、p27的表达与肺癌的组织学类型无关Skp2高表达、p27低表达与肺癌的淋巴结转移有关,肺癌组织中Ubiquitin、Skp9高表达与p27低表达密切相关。结论Skp2和p27的表达水平可以作为评估肺癌预后的参考指标。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.     

Skp2在急性白血病中的表达及与预后的关系

目的：探讨Skp2（S期激酶相关蛋白2）在急性白血病中的表达并分析其与预后的关系。方法：采用免疫组织化学法检测Skp2在51例初治急性白血病患者及20倒良性血液病患者（对照组）骨髓细胞中的表达,并分析急性白血病阳性表达与阴性表达完全缓解率的差别。结果：Skp2在急性白血病骨髓细胞中阳性结果的表达率明显高于对照组（P〈0．01）;Skp2阳性表达患者的完全缓解率显著低于阴性表达患者（P〈0．05）。结论：Skp2的过度表达与急性白血病的发生发展密切相关,且阳性表达可能提示急性白血病的预后不良。     

Skp2和p27^kip1在胃癌组织中的表达与临床病理特征的相关性研究

目的探讨Skp2和p27^kip1在胃癌不同发展阶段表达,胃癌中Skp2和p27kip1的表达与患者临床病理特征和预后的关系,以及Skp2和p27蛋白之间表达的相关性。方法用免疫组织化学法检测Skp2和p27^kip1在20例正常胃黏膜、20例慢性萎缩性胃炎伴肠化、20例胃不典型增生、15例早期胃癌、45例进展期中胃癌表达情况。结果Skp2蛋白在20例正常胃黏膜、20例慢性萎缩性胃炎伴肠化、20例胃不典型增生、15例早期胃癌、45例进展期胃癌中阳的性表达率分别为10%（2/20）、20%（4/20）、25%（5/20）、33.3%（5/15）和46.7%（21/45）,Skp2在胃癌中阳性表达率与年龄、性别、肿瘤大小、部位无关（P〉0.05）,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、浆膜浸润、TNM分期有关（P〈0.05）,Skp2在胃癌中的阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结转移、病理期进展而升高（P〈0.05）;p27kip1在20例正常胃黏膜、20例慢性萎缩性胃炎伴肠化、20例胃不典型增生、15例早期胃癌、45例进展期胃癌中阳的性表达率分别为90%（18/20）、65%（13/20）、50%（10/20）、40%（6/15）和37.8%（17/45）。p27kip1在胃癌中阳性表达率与年龄、性别、肿瘤大小、部位无关（P〉0.05）,p27kip1在胃癌中的阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结转移、病理期进展而降低（P〈0.05）;Skp2和p27kip1在胃癌组织中的表达呈负相关（r=-0.482）。结论Skp2在胃癌发生过程中,即由正常胃黏膜到进展期胃癌演变,其表达呈升高趋势,说明Skp2参与了胃癌的发生,并且促进胃癌的发生。p27kip1在胃癌的发生中与Skp2相反,起着抑制胃癌发生的作用。Skp2和p27kip1在胃癌中阳性表达率均与年龄、性别、肿瘤大小、部位无关,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、浆膜浸润、TNM分期有关。Skp2和p27kip1在胃癌中表达呈负相关。对Skp2和p27kip1蛋白检测可     

5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响

目的：探讨体外不同浓度5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2表达的影响。方法不同浓度5-氟尿嘧啶0、10、20、40和80μg／ml作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h,通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组卵巢癌细胞增殖情况,采用免疫细胞化学染色法和Realtime PCR技术检测各组Skp2蛋白和mR-NA水平的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72h后,随着浓度的增加,细胞增殖受限明显,Skp2蛋白和mRNA表达水平明显降低,并与5-氟尿嘧啶的浓度呈负相关（ r＝－0．816,P＜0．05;免疫组化Skp2：r＝－0．926,P＜0．05;RealtimePCRmRNA：r＝－0．899,P＜0．05）。结论5-氟尿嘧啶能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖,并能抑制Skp2蛋白和mRNA的表达。     

采用组织芯片技术检测乳腺癌中Skp2和p27的表达

目的观察乳腺癌中S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）、细胞周期调控因子p27的表达情况．探讨它们在乳腺癌中表达的意义及相互关系。方法选取外科手术切除乳腺癌组织标本80例，采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测乳腺癌中Skp2和p27的表达。结果80例乳腺癌中Skp2和p27的阳性率分别为46．3％、41．3％。p27阳性乳腺癌中Skp2阳性率为15．2％。p27阴性乳腺癌中Skp2阳性率为68．1％，两者具有显著性差异，P〈0．01。结论Skp2和p27的表达均与乳腺癌组织学类型无关。Skp2高表达、p27低表达与乳腺癌的浸润情况密切相关。Skp2高表达、p27低表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关。乳腺癌中Skp2的高表达与p27的低表达之间明显负相关。在乳腺癌细胞增殖调控机制中，p27具有抑制细胞增殖的作用，Skp2促进细胞周期调控因子p27的降解，从而促进细胞增殖。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

青蒿琥酯通过影响Skp2和CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞北大核心CSCD

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在乳腺癌发展过程中所发挥的功能及可能的作用机制。方法设置用不同浓度ART处理MCF-7、MDA-MB-231为实验组,0μmol·L^(-1)ART处理细胞为对照组。通过MTT、平板单克隆实验测定ART对乳腺癌细胞生长能力的影响;Transwell实验探究ART对乳腺癌细胞侵袭以及迁移能力的影响;采用流式细胞术检测ART对乳腺癌细胞周期及其凋亡的影响;通过转录组测序分析及RT-qPCR实验方法检测并验证ART在乳腺癌细胞中可能的作用机制。结果经ART处理后的两种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231其增殖、迁移以及侵袭能力与对照组相比均明显下降,ART作用后的乳腺癌细胞其G 0-G 1期细胞比例明显增加,并且乳腺癌细胞凋亡率明显上升。转录组测序结果提示,ART可能通过下调S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因的表达、上调周期蛋白抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)基因的表达调控乳腺癌细胞的周期以达到抑制乳腺癌细胞发生发展的目的。结论ART可通过影响Skp2基因、CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞的发展。     

阳离子通道在精子生理及男性生育中的作用研究进展

在哺乳动物的精子中表达6个跨膜螺旋重复单位的离子通道样蛋白被命名为精子阳离子通道蛋白。目前,已报道的该家族成员有4个:Cat Sper1、Cat Sper2、Cat Sper3、Cat Sper4[1-2]。Cat Sper1基因定位于人染色体11q12.1,Cat Sper2基因定位于人染色体15q15.3,Cat Sper3基因定位于人染色体5q31.1,Cat Sper4基因定位     

人类多重剪接RNA结合蛋白类基因的克隆和分析

目的 通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因.方法 采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群.通过UCSCGenome Blat Server分析,确定RBPMS2基因的染色体定位,SMART网上分析工具进行结构域预测,Unigene数据库进行表达谱分析.结果 电子克隆到人类RBPMS2新基因cDNA序列,含完整的开放阅读框(ORF).RBPMS2基因编码的多肽由209个氨基酸组成,分子量22.5 KDa,等电点8.63.SMART分析显示RBPMS2蛋白包含1个RNA识别模体(RRM)结构域.RBPMS2基因位于第15号染色体,定位在15q22.31,由7个外显子和6个内含子组成.电子表达谱分析显示RBPMS2在卵细胞、受精卵、囊胚、不同发育阶段的胚胎、膀胱、肾脏等组织中高表达.结论 分析并克隆到了一个新的人类RBPMS2基因.