甲基化对亚甲蓝体内外抗癌作用的相反影响及其机理探讨

目的：研究甲基化对亚甲蓝体内外抗艾氏腹水癌作用的影响及其机理。方法：艾氏腹水癌细胞体外实验采用活细胞计数法，用人肺癌细胞研究亚甲蓝类药物体外作用及机理采有克隆形成实验方法，体内实验用荷艾氏腹水癌小鼠半数生存期检测药物作用。结果：1，9二甲基亚甲蓝对艾氏腹水癌体外杀伤作用比亚甲蓝显著增强。处理24h IC50为0．15μmol/L，而亚甲蓝为1．1μmol/L。甲基化也显著改变了作用特点，由亚甲蓝的时间依赖性特征改变为浓度依赖性，但用于艾氏腹水癌小鼠的治疗实验发现亚甲蓝的疗效显著而1，9二甲基亚甲蓝无效。机理探讨表明过氧化氢酶及细胞数目增加可能是1，9二甲基亚甲蓝体内失效的主要原因。结论：1，9位甲基化使亚甲蓝体外杀伤艾氏腹水癌能力显著增强，但体内治疗荷艾氏腹水癌小鼠反而失效，其原因与体内癌细胞数目及过氧化氢酶关系密切。     

低能超声波对人肺癌细胞的杀伤作用

低能量（０．８ｗ／ｃｍ＾２）连续波超声，在０℃时超声３分钟即可杀死８０％的多种类型人肺癌细胞及人肺纤维母细胞；超声１０分钟即可杀死全部细胞，细胞悬液浓度增加，杀伤力减弱，在０℃，２５℃及３７℃下处理，３７℃时超声杀伤细胞作用最强，每隔１０秒钟的超声场下试管内细胞悬液的温度监测结果表明，低能超声对体外癌细胞的杀伤并不是由于热加升温作用所致。     

蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞的细胞毒性作用

目的探讨蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)的细胞毒作用。方法选用8种浓度的蛔虫提取物诱导小鼠Lewis肺癌细胞,分别在诱导后24、48、72 h采用四氮唑盐酶还原法(MTT)测A492值,计算细胞存活率和抑制率。结果不同浓度的蛔虫提取物分别作用LLC细胞24、48和72 h,对LLC细胞的增殖均有明显的抑制作用,呈剂量依赖,且以48 h抑制作用最强,之后随着作用时间的延长,BEAL对肿瘤细胞的抑制作用降低。结论蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞具有细胞毒性作用,能够诱导LLC细胞发生凋亡。     

MCT-485对肝癌细胞显示出细胞毒性

MultiCell Technologies公司公布了MCT-465和MCT-485的最新临床前研究结果。体外研究中,MCT-485在几种肝癌细胞株中显示出剂量依赖的细胞毒性。MCT-485诱导了TNF-a及IL-6的表达。而MCT-465并未显示细胞毒性或抑制增殖的作用。体内研究进一步支持了上述机理,并且探索了MCT-465、MCT-485作为一种新的治疗肝细胞癌和其它癌症方法的安全性、有效性和实用性。     

我所的肺癌细胞分子生物学研究

细胞分子生物学研究室前身为细胞免疫学研究室，1978年开始肺癌细胞分子生物学研究工作，1981年正式建立细胞生物学研究室，主任赖百塘，副主任汪惠。2000年，在市科委领导和卫生局大力支持下，建立了北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室。在我所党委和所领导的关怀和支持下，研究室工作取得了长足的进步。建立了多种类型的6个人肺癌细胞系,制备了4种抗人肺癌的单克隆抗体，     

砷化物对HL-60细胞生长及基因组DNA甲基化的影响

目的：研究NaAsO2和 N3AO4cf HL-60细胞生长及基因组DNA甲基化的影响,方法：采用细胞培养和限制性内切酶解分析技术观察分析细胞生长及细胞基因组DNA甲基化水平。结果：（1）中无机砷化物对HL－60细胞生长具有抑制作用,特别是高浓度NaAsO2(2,10umol/L)和Na3AsO4(100,300umol/L)可明显地抑制HL－60细胞的生长（P＜0．01）,随着砷化物浓度的增加,MspI酶解基因组DNA片段的分子量变化不大,但Hpa II酶解片段的分子量逐渐变大,结论：提示基因组DNA中CCGG核苷酸内侧C的甲基化总的水平有上升趋势。     

纳米氧化铜对人肝癌细胞的毒性作用

目的探讨40 nm氧化铜颗粒对人肝癌HepG2细胞毒性的影响。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含终浓度分别为0(对照)～200μg/ml纳米氧化铜的无血清培养基中培养24 h。运用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)检测分析其对人肝癌细胞的毒性作用。结果不同浓度纳米氧化铜染毒组HepG2细胞的存活率与对照组(0μg/ml)相比均明显降低(P0.05),且细胞存活率随着纳米氧化铜染毒浓度的上升呈下降趋势;HepG2细胞LDH的活力与对照组(0μg/ml)相比也明显升高(P0.01),且细胞中LDH活力随着纳米氧化铜染毒浓度升高呈上升趋势。结论 40 nm氧化铜颗粒能够引起HepG2细胞产生毒性效应。     

不同砷化合物对人舌鳞癌细胞的毒性研究

目的研究不同的砷化合物(一甲基亚砷酸,三氧化二砷,砷酸氢二钠,二甲基砷酸钠)对人舌鳞癌细胞株增殖的影响。方法以人舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,分别暴露于0.032 6～33.500 0μmol/L一甲基亚砷酸(CH3AsO,MMAⅢ),0～3 200.0μmol/L三氧化二砷(As2O3,iAsⅢ),砷酸氢二纳(Na2HAsO4.7H2O,iAsⅤ)和二甲基砷酸钠(C2H6AsO2Na.3H2O,DMAⅤ)48 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;将细胞暴露于10.00 mol/L的三氧化二砷,砷酸氢二钠和二甲基砷酸钠,0.13μmol/L的一甲基亚砷酸,收集细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)。结果高于一定浓度的一甲基亚胂酸(≥8.34μmol/L),三氧化二砷(≥50.00μmol/L),砷酸氢二钠(≥1 600.00μmol/L)和二甲基砷酸钠(≥400.00μmol/L)均能够显著降低Tca8113的细胞生存率,且在一定剂量范围内具有剂量-效应关系;CH3AsO,As2O3,Na2HAsO4.7H2O和C2H6AsO2Na.3H2O暴露48 h的Tca8113细胞的50%生存率(IC50)经计算分别为15.68、288.40、1 720.00、1 483.00μmol/L;细胞内活性氧含量依次为CH3AsOAs2O3Na2HAsO4.7H2OC2H6AsO2Na.3H2O。结论砷化合物在高于一定浓度时可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其中MMAⅢ的毒性最强;砷价态相同时,有机态砷的毒性高于无机态砷。随着药物浓度的增加,ROS也增加,其中也以MMAⅢ最高。砷化合物的细胞毒性可能与诱导的氧化损伤有关。     

肺剂量和炎性细胞因子在预测放疗诱导性肺毒性中的临床价值

目的分析平均肺剂量(MLD)和炎性细胞因子(IL-8和TGF-β1)组合预测放射性肺损伤(radiation-induced lung injury, RILT)的准确性和有效性。 方法选择75例Ⅰ-Ⅲ期的NSCLC患者,通过使用三维适形技术给予放射疗法,在4～7周内每天以2.0～2.9 Gy的剂量递送44～87.9 Gy给患者。分别提取患者放射治疗前(pre),放射治疗2周(2 W),4周(4 W)的血液样品,测定细胞因子的表达含量。患者随访接受病史检查和体格检查以及胸部计算机断层扫描,随访终点为出现RILT症状,或肺炎、肺纤维化等症状。Logistic回归分析平均肺剂量(MLD)和炎性细胞因子(IL-8和TGF-β1)的表达变化以评估其与RILT的相关性,ROC曲线下面积(AUC)用于分析这些因素在预测RILT的特异性和敏感性。 结果75例Ⅰ-Ⅲ期的NSCLC患者中65例出现RILT ,其中16例(24.6%)患者的RILT等级大于2。MLD,基线IL-8水平和TGF-β1 2 W/pre比率的AUC值分别为0.61(0.45,0.77),0.70(0.56,0.84)和0.68(0.53,0.83)。与MLD单独预测相比,MLD,基线IL-8水平和TGF-β1 2w/pre比率组合可将AUC的值从0.61提高到0.73(0.60,0.87)。 结论IL-8和TGF-β1是NSCLC患者RILT的重要预测因子。MLD,IL-8水平和TGF-β1 2 W/pre比率的组合提供了更准确的模型来预测RILT2的风险。     

抑癌基因启动子过甲基化对肺癌临床研究的意义

抑癌基因启动子过甲基化是除基因突变和染色体物质缺失外抑癌基因失活的第3种机制,某些情况下是抑癌基因失活的惟一机制.目前抑癌基因启动子过甲基化已被用于肺癌的诊断、筛查和监测肿瘤复发的研究.本文对抑癌基因启动子过甲基化导致肺癌发生的基础、研究过甲基化的方法、过甲基化研究在临床的应用、逆转过甲基化的探讨及目前研究的局限性作一综述.     

肺癌细胞株抑癌基因启动子CpG岛甲基化与转录的关系

基因特别是抑癌基因肩动子区CpG岛甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展关系的研究正受到越来越多的重视。本研究用甲基化特异性的PCR(MSP)测NSCLC细胞株中12个肿瘤相关基因的甲基化发生情况，并观察甲基化与mRNA转录之间的关系，以进一步阐明抑癌基因甲基化在NSCLC中的作用。     

5-Aza-CdR对肝癌细胞DAPK基因甲基化的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子CpG岛甲基化的影响。方法不同浓度(0.5μmol/L、5.0μmol/L、50.0μmol/L)5-Aza-CdR处理人肝癌细胞株SMMC-772172小时后,用焦磷酸测序法检测处理前后DAPK基因启动子CpG岛甲基化水平。以未经处理的人肝癌细胞株SMMC-7721作为对照组。结果未经5-Aza-CdR处理的肝癌细胞SMMC-7721细胞株DAPK基因启动子高度甲基化,平均水平为76.71%。经3种不同浓度药物处理72小时后,各组间甲基化平均水平分别为78.29%、77.57%和66.00%,各组间甲基化水平差异均有统计学意义(F=39.71,P<0.01)。其中,50.0μmol/L处理组细胞甲基化水平最低,与其他各组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 SMMC-7721细胞株DAPK基因启动子区呈高度甲基化状态;5-Aza-CdR能够逆转人肝癌细胞SMMC-7721DAPK基因启动子区域的甲基化状态。     

肝衰竭患者血浆(血清)对体外培养肝细胞毒性作用的研究现状

生物人工肝是以培养肝细胞为基础的人工肝支持系统,高活性和功能良好的肝细胞是其基本要素之一,然而,由于肝衰竭患者肝脏大量肝细胞坏死,导致机体代谢紊乱和大量毒性物质堆集,这些毒性物质会对反应器中肝细胞产生毒性作用,直接影响生物人工肝的治疗效果.因此,了解肝衰竭患者血浆（liver failure plasma,LFP）或血清（liver failure serum,LFS）对体外培养肝细胞的各种不良作用,对生物人工肝的临床应用有重要意义.本文综述近年来在该领域的研究进展.     

抑癌基因甲基化的研究及其在肺癌诊治中的应用

肺癌的发病率逐年上升，尽管采用手术、放疗和化疗等多学科治疗，但肺癌5年存活率仍在15％以下。其中重要的原因是缺少有效的早期诊断的方法。肺癌的发生与基因密切相关，因此研究癌变机制，探索肺癌早期分子事件一直是肺癌研究的热点。过去研究的焦点集中在基因突变、缺失等遗传学改变与肺癌形成的关系。近来，人们逐渐认识到基因表达异常也是肿瘤发生的重要机制，     

甲基汞对肺癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用。方法采用MTT比色法。对照组仅加培养液;顺铂组、As2O3组、甲基汞组分别加入不同浓度的顺铂、As2O3、甲基汞,用DG-3022A型酶联免疫检测仪测定光密度(A)值,计算增殖抑制率,并以倒置光学显微镜观察各组Lewis肺癌细胞生长密度及形态变化。结果甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞有较强的增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,而且同一时间各浓度之间、同一浓度各时间之间均存在显著性差异(P<0·001);甲基汞的增殖抑制作用强于顺铂和As2O3,起效浓度较后两者低,发挥作用较后两者快。结论甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞有增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,其增殖抑制作用强于顺铂和As2O3。     

亚甲蓝染色对胃癌前病变的诊断价值

目的研究胃镜下亚甲蓝染色对胃癌前病变的诊断价值。方法胃镜下有胃黏膜异常表现的46例患者,用0.5%的亚甲蓝均匀喷洒于胃黏膜,然后在染色的部位取活检送病理组织学检查。将同期胃镜下有胃黏膜异常表现但未染色的50例作为对照组。结果染色组有29例存在胃黏膜肠上皮化生(gastric intestinal metaplas,GIM)和不典型增生(atypical hyperplasia,ATP),检出率63.04%,对照组检出率为24%。结论胃镜下亚甲蓝染色可明显提高胃癌前病变的检出率。     

利用生物纳米技术检测外周血肺癌细胞的实验研究

目的建立磁性纳米颗粒从肿瘤患者外周血中富集与纯化肿瘤细胞的方法,应用荧光纳米晶生物探针检测方法,实现对肺癌早期微转移的诊断。方法体外培养人肝癌细胞和肺癌细胞,采集健康人外周血单个核细胞（PBMC）,将PBMC与肝癌细胞和肺癌细胞按比例混合,通过磁粒抗体复合物富集癌细胞,用荧光纳米晶探针进行肺癌特异性鉴定。结果光镜下可见较多的人肝癌细胞和人肺癌细胞与磁性纳米颗粒紧密结合,而PBMC与磁性纳米颗粒不结合。荧光显微镜下可见荧光纳米晶表面蛋白A探针特异性地与肺癌细胞结合产生荧光信号,但与肝癌细胞不结合,无荧光信号出现。结论本方法可成功地从外周血中富集到肺癌细胞,经荧光纳米晶探针成功地鉴定为肺癌细胞,达到诊断肺癌早期微转移的目的。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.