非放射性分子杂交法在乙型肝炎诊断中的价值

<正> 乙型肝炎病毒(HBV)的感染性由其基因HBV—DNA所决定。HBksAg、HBeAg和HBV—DNA聚合酶均是HBV—DNA编码的产物。显然在所有反映HBV感染性的指标中,HBV—DNA最有价值。故按常规方法检测抗原—抗体系统(Ag—Ab)判断乙肝病人及携带者,难以精确反映HBV的存在和其感染性。而HBV—DNA检测的开展和研究无疑是乙肝病原学诊断的一大进展。     

非放射性HBV—DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＨＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检     

非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

HBV 感染者胃十二指肠粘膜HBV DNA地高辛原位分子杂交研究

目的：探讨HBV在胃十二指肠粘膜的分布,复制,表达及其意义。方法：应用地高辛原位分子杂交法检测62例HBV感染者胃十二指肠粘膜HBVDNA的分布状态,并与血清HBVM,胃十二指肠粘膜HBsAg,HBcAg,肝炎病情程度进行相关分析。结果：62例HBV感染者,27例（43．55％）胃肠粘膜检出HBV DNA,检出率与肝炎病情程度,血清HBsAg,HBeAg无明显相关,与血清HBVDNA,胃肠粘膜HBsAg,HBcAg密切相关,胃肠粘膜HBVDNA的表达表现为4种模式。结论：HBVDNA可在胃肠组织原位复制,其不同的表达模式反映了病毒复制或整合的状态。     

不对称PCR杂交显色方法的建立及其对HBV DNA的检测

目的：建立一种灵敏、快速、特异的检测ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ产物的杂交显色方法．方法：使用一个生物素标记的上游引物对ＨＢＶ ＤＮＡ进行不对称ＰＣＲ扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板表面．用标有辣根过氧化物酶的探针与固定的单链ＰＣＲ产物杂交,而后加底物显色测定吸光值。结果：该方法比常规的琼脂糖凝胶电泳法更特异,而且灵敏度高１０倍￣１００倍,对简便处理的标本适应性强,具有良     

乙肝病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA分布的分子生物学检测

应用原位杂交（ＩＳＨ）技术观察１２例血清乙肝病毒（ＨＢＶ）标志物阳性的肾炎病人肾组织中ＨＢＶＤＮＡ的存在状况。结果表明，采用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ全长段探针ＩＳＨ时１０例肾组织中显示有ＨＢＶＤＮＡ。这１０例用Ｓ＋Ｃ段探针检测仍阳性者８例，ＨＢＶＤＮＡ最常见于肾小管上皮细胞内，呈核型或浆核型，其次是肾小球系膜区和毛细血管袢。ＬＳＡＢ免疫组化法示ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位相吻合。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒直接侵犯，从分子病理水平为探讨ＨＢＶ相关性肾炎发病机理提供了新的依据。     

应用荧光原位杂交检测HBV基因在转基因小鼠染色体上的整合

目的应用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）,检测本研究中心制备的乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠目的基因的整合位点。方法采用荧光原位杂交技术,以正常小鼠染色体标本为对照,通过荧光标记的探针与转基因小鼠染色体标本进行杂交,对比分析同一中期分裂相的G显带和FISH结果。结果转基因小鼠染色体检测到一对明显的荧光信号,推测其在14号同源染色体上,而对照组无信号。结论外源HBV基因以单位点形式稳定地整合到转基因小鼠的染色体上。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

应用分子杂交技术检验白细胞内HBV DNA

本研究应用斑点分子杂交技术检测了157例慢性HBV感染者及80例一般人群(含20例献血员)的血清和白细胞内HBV DNA的状况。在157例慢性HBV感染者中血清HBV DNA阳性率为39%,白细胞内HBV DNA为36%,两者同时阳性者为18%。而在60例血清HBV DNA阳性者中白细胞内HBV DNA同时阳性者为48%,血清HBV DNA阴性的93例中仍有30%的病例白细胞内HBV DNA为阳性。说明在血清HBV DNA阴性的慢性HBV感染者中仍有1/3的病例的白细胞内存在HBVDNA。80例一般人群经RIA法筛选发现:单纯HBsAg阳性6例,其中3例白细胞内HBV DNA阳性。HBsAg与HBeAg同时阳性者4例,其白细胞内HBV DNA均为阳性。单纯抗-HBs阳性的24例中仅1例白细胞内存在HBV DNA。单纯抗-HBc阳性者为12例,白细胞内HBV DNA无1例阳性。值得注意的是,在血清HBV标志全阴性的34例中也发现了2例白细胞内HBV DNA阳性。由于HBV可以感染人的白细胞,而且影响白细胞的免疫功能,其在形成HBV感染的慢性化上可能起着重要的作用,因而在肝炎的转归、流行病学的意义及发病机制等问题上它的作用尚需进一步探讨。     

斑点杂交试验检测血清中HBV—DNA的临床应用及其意义

本文用地高辛探针和生物素探针做斑点杂交平行检测了160例乙型肝炎患者,其符合率为96.25％;HBeAg阳性者HBV-DNA检出率为88.41％;而HBeAg及抗HBe均阴性者的阴性率为95.95％。用地高辛探针对21例正常人,28例非乙肝患者中均未检出HBV DNA。实验表明,地高辛探针做斑点杂交具有较好的敏感性特导性和实用性。     

HBV-DNA检测在HBV不同血清学指标组合的应用

目的:ELISA方法检测HBV感染标志物,观察不同血清学指标组合的HBV-DNA阳性情况.方法:回顾分析2006-2008年我院就诊乙肝患者778例,用荧光定量聚台酶链反应和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测其血清的HBV-DNA和HBV血清标志物(HBV-M).结果:1组(HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性)、2组(HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性)、3组(HBsAg阳性)的患者HBV-DNA的阳性率分别为96.7%、54.2%、18.8%,其拷贝数分别为1.62×108/ml,1.12×106/ml,7.61×104/ml.结论:荧光定量PCR对乙型肝炎早期诊断、传染性的判断及疗效观察具有临床实用及指导意义.     

HBV-DNA与HBVPreS1 Ag、HBeAg应用价值的探讨

目的探讨HBV-DNA、HBV PreS1 Ag和HBeAg3指标在提示乙型肝炎病毒复制、病情转归以及疗效观察等方面的作用。方法采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,以<5.0×102拷贝/mL为阴性。采用ELISA法检测"乙肝两对半"和HBV PreS1 Ag。结果151例乙肝病人中有58例HBeAg阳性标本,HBV-DNA与HBeAg、HBV PreS1 Ag阳性符合率分别为96.6%、87.9%。71例接受抗病毒治疗和80例未接受抗病毒治疗病人HBV-DNA与HBV PreS1 Ag阳性一致率分别为84.5%和46.6%,差异有统计学意义(χ2=20.944,P<0.01)。结论HBeAg阳性仍是现阶段乙型肝炎病毒复制监测的理想指标,HBV PreS1 Ag可作为HBV感染及既往或现症病毒复制的支持性指标,但不适于作为抗病毒治疗监测指标。     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——Ⅱ、与斑点杂交、吸印杂交的比较

对生物素标记HBV DNA探针的原位杂交与~(32)P标记的HBV DNA探针的斑点杂交和吸印杂交作了比较。三者阳性率分别为33.33％(25/75)、36.36(16/44)和15.38％(4/26),三者无统计学差异。16例同时用原位杂交和吸印杂交检测,4例二者均为阳性,9例二者均为阴性,原位杂交多检出3例阳性,二者有显著的相关性(p=0.0192)。30例同时作了原位杂交和斑点杂交,其中17例结果一致,13例结果不一致,两者无显著相关性(p>0.05)。并比较了原位杂交与其它两种杂交方法的优缺点。     

应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个核细胞中HBV－DNA

本文应用多聚酶连反应（ＰＣＲ）技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。因此，在检测血清ＨＢＶ标志物及ＨＢＶ－ＤＮＡ的同时检测ＰＢＭＣ中的ＨＢＶ－ＤＮＡ可进一步防止ＨＢＶ传播与输血后肝炎的发生。     

乙肝病毒血清标志物与PCR检测HBV—DNA的关系

为了探讨ＰＣＲ技术在乙肝病毒感染诊断中的应用及ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢＶＭ间的关系，对５２４例乙肝病毒感染者的血清采用ＰＣＲ与ＥＬＩＡＳ进行检测。结果：ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ三项阳性组，ＨＢＶＭ全阴组，单项抗－ＨＢｓ阳性组，ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率分别为８０．１４％、４７．６２％、２６．４７％，提示三项阳性组ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率是８组形式中的最高组，标志病毒复制活跃、传染性强、ＨＢＶＭ全阴组也