Celebrex对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用

目的探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂Celehrex对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株的抑制作用及机制。方法体外培养人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3,应用MTT法、RT-PCR和ELISA法检测Celebrex对PC3细胞生长的作用及对COX-2mRNA、前列腺素E2（PGE2）和IL-6表达的影响。结果Celebrex在一定时间和剂量范围内可明显抑制PC3细胞的生长,Celebrex无论在时间-效应或剂量-效应关系上均不影响PC3细胞COX-2mRNA的表达,但能明显减少PGE2和IL-6的表达。结论炎症因子的分泌增多可能是雄激素非依赖性前列腺癌细胞生长的动力,Celebrex对COX-2mRNA的表达无明显影响,主要是通过抑制COX-2及其下游炎症因子PGE2和IL-6等的表达而对雄激素非依赖性前列腺癌发挥抑制效应。     

构建人 COX-2反义核酸真核表达载体对膀胱癌 T24细胞株COX-2表达的作用

【目的】构建人环氧化酶-2（COX-2）反义核酸真核表达载体,探讨其抑制膀胱癌 T24细胞COX-2表达的作用。【方法】经PCR法从含人COX-2基因的质粒中扩增其cDNA ,通过限制性内切酶克隆于 T载体EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ位点之间,并将其反向插入pcDNA3．1中获得重组质粒。应用脂质体介导将其导入T24膀胱癌细胞中,经过G418筛后进行流式细胞术、间接免疫荧光染色和RT-PCR鉴定。【结果】核酸测序和限制性内切酶消化证实重组COX-2反义核酸真核表达质粒 pcDNA3．1/COX-2 as是正确的,经鉴定转导 pcD-NA3/COX-2 as的T24细胞中环氧化酶-2的表达明显抑制。【结论】成功构建人COX-2反义核酸真核表达载体并获得环氧化酶-2基因表达持续下调的膀胱癌细胞株T24-AS。     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞COX-2mRNA表达的抑制作用

目的研究COX-2非选择性抑制剂阿司匹林（Aspirin）对宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖的抑制作用及COX-2mRNA表达量的影响。方法Hela细胞分4组培养在6孔板上设对照组及实验组，观察不同剂量阿司匹林作用后细胞的增殖状态及采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PcR）检测阿司匹林作用前后Hela细胞COX-2mRNA量的变化。结果阿司匹林能抑制Hela细胞增殖及细胞中COX-2mRNA的转录，且抑制强度随阿司匹林的浓度的提高而增加。结论体外阿司匹林抑制癌细胞Hela生长，并从mRNA水平抑制COX-2蛋白的表达，对宫颈癌可能有潜在治疗意义。     

miR-143在膀胱癌组织中的表达及意义

【目的】探讨miR-143在膀胱癌组织中的作用及机制,为膀胱癌的临床诊治提供参考。【方法】选用体外培养的T24细胞株作为研究对象,按照处理方式分为si-COX-2转染组、miRNA-143转染组、阴性对照组、空白对照组。Transwell趋化实验和3 H-thymidine 法检测 T24细胞增殖和迁移能力,免疫印迹法检测COX-2蛋白表达变化。【结果】miR-143和si-COX-2转染T24细胞48～72 h后,细胞增殖能力较正常T24细胞相比下降36％～49％（ P ＜0．01）,迁移能力下降81％。免疫印迹结果表明,si-COX-2或miR-143转染的T24细胞内源性COX-2表达水平显著减少至正常T24细胞表达水平的0．39和0．31倍（ P＜0．01）。【结论】miR-143可能通过COX-2通路发挥对膀胱癌 T24细胞的增殖和侵袭的抑制作用并抑制COX-2的表达。提示miR-143可作为膀胱癌的治疗候选药物。     

尼美舒利对结肠癌细胞株PGE2及VEGF表达的影响

目的:探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响,明确以COX-2为靶点治疗结肠癌的作用途径。方法:将选择性COX-2抑制剂尼美舒利(nimesulide)按不同浓度作用于结肠癌细胞系HT-29,用MTT(四甲基偶氮唑蓝比色法)法分别于0、24、48、72h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察尼美舒利对细胞凋亡的影响,进一步采用ELISA法检测药物作用后前列腺素E2(PGE2)的表达,免疫组化法测定内皮细胞生长因子(VEGF)表达阳性率。结果:尼美舒利对结肠癌细胞系HT-29呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增殖,促进其凋亡。PEG2及VEGF表达水平随作用时间延长而下降。结论:选择性COX-2抑制剂可能通过PGE2与VEGF途径影响结肠癌细胞HT-29的增殖与凋亡,是其治疗结肠癌的分子机制。     

环氧化酶-2与单核-内皮细胞黏附性的相关研究

目的探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达水平同单核-内皮细胞黏附性的关系及其相关机制。方法采用细胞计数法检测单核-内皮细胞的黏附性;实时荧光定量PCR检测内皮细胞COX-2mRNA表达量;Westernblot检测内皮细胞COX-2蛋白表达量;ELISA检测内皮细胞前列腺素E2（ProstaglandinE2,PGE2）水平。结果内皮细胞COX-2mRNA及蛋白表达量在炎症因子TNF—α、IL-1β刺激后显著上调,并随时间变化（P〈0．05）;内皮细胞COX-2蛋白表达量增加与PGE。水平及单核-内皮细胞的黏附性成正相关;使用COX-2特异性抑制剂NS398预孵育后,内皮细胞PGE2表达水平降低（P〈0．05）,单核一内皮细胞的黏附性受到显著抑制（P〈0．01）。结论内皮细胞COX-2mRNA及蛋白表达量在炎症因子TNF-α、IL-1β刺激后明显上调,其表达增加后可能通过催化花生四烯酸代谢成PGE2,使单核一内皮细胞的黏附性增强,从而影响动脉粥样硬化性疾病的进程。     

熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901的COX-2表达

【目的】探讨熊果酸(ursolic acid,UA)抑制人胃癌细胞SGC7901增殖与抑制环氧合酶2(cycloox-ygenase-2,COX-2)表达间联系。【方法】体外常规培养人胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测0、10、20、30、40μmol/L UA作用不同时间对细胞增殖的影响;倒置显微镜观察不同浓度UA作用24 h后细胞形态变化;Western blot法检测COX-2蛋白表达;放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平。【结果】20~40μmol/L UA可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的药物半数抑制浓度(IC50)分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)(、24.83±1.02)μmol/L;20~40μmol/L UA作用24 h后,SGC7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;COX-2蛋白表达减弱;PGE2水平下降。【结论】熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与抑制COX-2表达进而减少PGE2生成有关。     

环氧化酶2抑制剂减轻重症急性胰腺炎的实验研究

目的实验研究环氧化酶2（COX-2）mRNA在重症急性胰腺炎（SAP）中的表达及应用COX-2抑制剂对SAP胰腺损伤的作用,探讨其可能的机制。方法SD大鼠54只随机分为对照组、SAP组、用药组,用药组在造模前30min经股静脉注射COX-2抑制剂赛来昔布10mg／kg,SAP组和对照组注射等剂量生理盐水。用药组和SAP组用3．5％牛磺胆酸钠制造重症急性胰腺炎模型。各组造模后0．5h、6h、24h取6只动物取材测量腹水量,抽血测定脂肪酶证实急性胰腺炎（AP）,胰头部固定位置行病理检查并评分,测定胰腺MPO的活性,放免法测定胰腺前列腺素E2（PGE2）的水平。用RT—PCR测定COX-2mRNA的表达。结果COX-2mRNA在SAP造模后0．5h表达即增强,相对应胰腺的PGE2水平升高,6hMPO升高,胰腺的病理损害明显;应用COX-2抑制剂赛来昔布组在SAP造模后各时间点COX-2mRNA表达明显抑制,对应PFE2下降,腹水量减少;6h、24h胰腺的病理损害减轻,MPO减少,胰腺的病理评分、MPO与COX-2mRNA的表达有相关性;各时间点血脂肪酶变化不明显。结论COX-2在SAP病程进展中起重要作用。COX-2抑制剂可以减轻SAP时胰腺的病理损害,可能与减轻中性粒细胞在胰腺部的浸润有关。     

环氧化酶-2抑制剂尼美舒利对膀胱癌T24细胞的体外凋亡诱导作用

目的：观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对人膀胱癌细胞体外凋亡的诱导作用，探讨其作用机制。方法：采用流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法（AO-EB）、透射电镜等技术，检测尼美舒利作用下体外培养的人膀胱癌细胞株T24凋亡变化：Western Blot法检测survivin、Smad2蛋白表达变化。结果：尼美舒利作用后T24细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，细胞凋亡率与尼美舒利作用时间和剂量相关；AO-EB双染色后．细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光．典型细胞可见新月形改变，固缩或片段化的核；电镜下可见较为典型的细胞凋亡形态变化；同时，survivin蛋白表达较对照组减弱，而Smad2表达增强。结论：尼美舒利对膀胱癌细胞有明显的凋亡诱导作用．下调survivin、上调Smad2基因表达可能是其机制之一。     

尼美舒利不依赖环氧合酶-2途径抑制胃癌生长的机制研究

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利不依赖COX-2途径抑制胃癌细胞移植瘤的可能机制。方法应用W estern-b lotting方法从人胃癌细胞株MKN45、AGS、MKN28、SGC-7901以及BGC-823中筛选出COX-2极低表达的细胞株MKN28,将其收集后皮下注射在BALB/C裸鼠的右侧前肢腋下。24只裸鼠分为模型组和干预组,干预组给予300 mg/L的尼美舒利灌胃,每日1次。每10天测定瘤体的大小,第40天终止实验,处置动物,留取移植瘤组织,免疫组化检测核因子-κB(NF-κB)和p21WAF1的表达;提取瘤组织总RNA进行RT-PCR,测定模型组和干预组过氧化物酶体增殖蛋白激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA的表达水平。结果干预组移植瘤体积显著小于模型组(P<0.05),提示选择性COX-2抑制剂对MKN28胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有良好的抑瘤作用。干预组NF-κB的表达显著低于模型组(P<0.05),p21WAF1的表达则显著高于模型组(P<0,05);RT-PCR发现干预组PPAR-γmRNA的表达较模型组增强。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利对COX-2表达水平极低的胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有抑瘤作用。其机制可能是通过影响细胞凋亡相关蛋白p21WAF1的表达以及NF-κB和PPAR-γ转录因子等不依赖COX-2途径的作用得以实现。     

The choice of selective COX-2 inhibitors

Non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) has been widely prescribed as a useful antifebrile or painkiller. But, gastrointestinal injury as a side effect of NSAIDs has been a big social probrem. NSAID-induced gastric damage has been shown to be induced by the inhibition of both cyclooxygenase (COX)-1 and 2. Thus, selective COX-2 inhibitors are expected to induce less gastric injury and to be safe as compared to traditional NSAIDs. But in certain situations such as gastric ulcer or H. pylori-induced gastritis, selective COX-2 inhibitors may delay ulcer healing or repair processes. Previous reports have shown that COX-2 inhibitors increase cardiovascular (CV) events as compared with placebo and recent studies further suggest that all NSAIDs might also be involved in increases in CV events. Therefore, any NSAIDs must be carefully used when they are prescribed for patients with CV risks.     

Adverse Drug Events Involving COX-2 Inhibitors

OBJECTIVE: To describe the types and severity of adverse drug-related events (ADEs) observed in patients receiving cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitors and to increase the awareness of risk factors that predispose patients to ADEs associated with COX-2 inhibitors. METHODS: A review of ADEs reported at the University of Pittsburgh Medical Center Presbyterian Hospital (UPMC-P) revealed significant events related to use of celecoxib or rofecoxib. A query of the internal ADE database was performed to identify ADEs involving COX-2 inhibitors from January 1999 to June 2002. A similar query was performed to identify ADEs involving nonselective nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) reported during this same time period. Utilization data were also collected. RESULTS: Forty-eight ADEs involving 24 patients receiving COX-2 inhibitors were reported and validated via the UPMC-P ADE review process compared with 38 events in 33 patients receiving nonselective NSAIDs. The types of ADEs reported as related to COX-2 inhibitors were similar to those reported in association with nonselective NSAIDs. Forty-two percent of ADEs (n = 20) involving COX-2 inhibitors and 45% of events (n = 17) involving nonselective NSAIDs were classified as severe. All patients receiving COX-2 inhibitors and 91% of patients receiving nonselective NSAIDs exhibited risk factors that increased their risk to experience an ADE; all but 1 of these patients were receiving outpatient COX-2 inhibitor therapy. CONCLUSIONS: The observed ADEs involving COX-2 inhibitors were similar to those associated with nonselective NSAIDs. Most events may have been preventable, highlighting the need for education regarding the appropriate use of COX-2 inhibitors.