海风藤酮对小鼠抗着床作用的免疫组织化学观察

目的 观察海风藤酮对小鼠胚泡着床的影响。方法 未经产雌性昆明小白鼠于妊娠第２天,一侧子宫角内分别注射不同剂量海风藤酮（５,１０,２０,４０,６０μＬ）作为实验组,另一侧子宫角注射相应剂量的生理盐水为对照。于妊娠第８天及第１０天,取子宫组织做常石蜡切片,ＨＥ及免疫组织化学染色,光镜观察。（３）结果 注入海风藤酮组子宫蜕膜变薄,层粘连蛋白免疫阳性物减少,纤粘连蛋白免疫阳性物增多,并伴有不同程度胚胎发育     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的细胞化学和电镜观察

目的观察海风藤酮对小鼠的抗着床作用及其细胞化学和超微结构的变化。②方法向妊娠第２天小鼠子宫角内注射不同剂量的海风藤酮,于妊娠第８天和第１０天观察其对滋养层细胞的刀豆凝集素（ＣｏｎＡ）受体和麦胚凝集素（ＷＧＡ）受体表达,以及对滋养层细胞和子宫蜕膜细胞超微结构的影响。③结果随着海风藤酮剂量增大,滋养层细胞的ＷＧＡ和ＣｏｎＡ受体的阳性反应减弱,以ＷＧＡ受体的改变更明显。电镜所见,实验组绒毛浅层滋养层细胞胞浆电子密度低,核固缩;深层滋养层细胞溶酶体增多,见髓样小体,子宫蜕膜的大蜕膜细胞胞浆溶酶体增多,胞浆空泡化,核膜溶解。④结论海风藤酮可使小鼠胚胎滋养细胞的ＷＧＡ和ＣｏｎＡ受体糖蛋白减少,从而干扰了细胞之间的识别黏附,破坏了胚胎正常生长和发育的内环境,抑制着床过程。     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的免疫组织化学观察

目的观察海风藤酮对小鼠胚泡着床的影响。②方法未经产雌性昆明小白鼠于妊娠第２天,一侧子宫角内分别注射不同剂量海风藤酮（５,１０,２０,４０,６０μＬ）作为实验组,另一侧子宫角注射相应剂量的生理盐水为对照。于妊娠第８天及第１０天,取子宫组织做常规石蜡切片,ＨＥ及免疫组织化学染色,光镜观察。③结果注入海风藤酮（≥２０μＬ）组子宫蜕膜变薄,层粘连蛋白（Ｌｎ）免疫阳性物减少,纤粘连蛋白（Ｆｎ）免疫阳性物增多,并伴有不同程度胚胎发育迟缓及退化等改变。大剂量海风藤酮（≥４０μＬ）组部分动物子宫内膜无蜕膜反应,而且胚胎已消失。④结论海风藤酮通过拮抗血小板激活因子影响蜕膜反应,并使Ｌｎ及Ｆｎ的量和分布发生异常改变。这可能是该药抗着床作用的重要途径之一。     

海风藤酮对大鼠肝脏缺血保护作用的实验研究

目的：研究海风藤酮对大鼠肝脏缺血的保护作用及其机制。方法：采用肝脏部分缺血模型，观察大鼠肝脏缺血再灌注损伤，以及预防性应用海风藤酮时肝脏胆汁流量、丙二醛（ＭＤＡ）含量、血清酶学改变。结果：海风藤酮预防组与对照组相比，肝脏胆汁流量、ＭＤＡ含量、血清酶学变化均显著减低（Ｐ＜０．０１）。结论：血小板激活因子（ＰＡＦ）可能通过某种机制产生毒性自由基，在肝脏缺血过程中起重要作用；海风藤酮可以通过抑制ＰＡＦ的药理作用对肝脏起保护作用     

海风藤酮对大鼠肝脏缺血保护作用的实验研究

目的：研究海风藤酮对大鼠肝脏缺血的保护作用及其机制。方法：采用肝脏部分缺血模型，观察大鼠肝脏缺血再灌注损伤，以及预防性应用海风藤酮时肝脏胆汁流量、丙二酮（ＭＤＡ）含量、血清酶学改变。结果：海风藤酮预防组与对照组相比，肝脏胆汁流量、ＭＤＡ含量、血清酶学变化均显著减低（Ｐ〈０．０１）。结论：血小板激活因子（ＰＡＦ）可能通过某种机制产生毒性自由基，在肝脏缺血过程中起重要作用；海风藤酮可以通过抑制ＰＡＦ的     

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇A和海风藤醇B对兔血小板聚集的影响

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇Ａ和海风藤醇Ｂ均有抑制血小板激活因子（ＰＡＦ）诱导的兔血小板聚集作用，ＩＣ_（５０）分别为１７．９、９．２、１４２．０、１４．０μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。经阿司匹林（ＡＳＡ）、磷酸肌酸／磷酸肌酸激酶（ＣＰ／ＣＰＫ）预处理的兔洗涤血小板，甲基海风藤酚和海风藤醇Ｂ仍能抑制ＰＡＦ诱导的兔血小板聚集，ＩＣ_（５０）为９．０、１６．５μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。同时，４种成分对于二磷酸腺苷（ＡＤＰ），花生四烯酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集抑制作用较弱，海风藤Ｂ能使ＰＡＦ诱导血小板聚集量－效曲线平行右移，ＥＣ_（５０）由１．５９ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）升为２０．６ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）。结果表明：４种成分能选择性拮抗ＰＡＦ对兔血小板的聚集作用。     

海风藤醇B对PAF越膜代谢和生物合成的影响

研究海风藤醇Ｂ地抗血小板激活作用与其影响兔血小板中血小板激活因子的越膜代谢和生物合成间的关系。采用放射性薄层层析法和ＰＡＦ生物测定法研究海风藤醇Ｂ对ＰＡＦ越膜代谢和生物合成的影响。海风藤醇Ｂ，银杏内醌Ｂ可抑制兔血小板」＾３Ｈ「－ＰＡＦ的越膜代谢，ＩＣ５０分别为８４．８，３４．９μｍｏｌ．Ｌ＾－１。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1－6d分别腹腔内注射N－硝基－L－精氨酸甲酯[L－NAME,一氧化氮合酶（NOS）的非特异性竞争抑制剂]0.5-5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L－NAME＋L－精氨酸（NO的前体）,观察L－精氨酸对L－NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上术3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现：与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L－NAME1－5mg可减少胚胎的着床位点数（P＜0.05）,腹腔注射4、5mg的L－NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3－5d）给予L－NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L－NAME的这种抑制作用可被同时给予的L－精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升…

应用＾４５Ｃａ＾２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０，１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ＾２＋内流还是胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％，但对Ａ２３１８７引起的胞内（Ｃａ＾２＋）升高无显著抑制作用。结果表明，海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流的Ｃａ＾     

海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升高的抑制作用

应用４５Ｃａ２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０、１００μｍｏｌ·Ｌ－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ２＋内流还是胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％；但对Ａ２３１８７引起的胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高无显著抑制作用。结果表明：海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流和［Ｃａ２＋］ｉ的升高。     

中国拟青霉对小鼠的抗着床作用研究

小鼠妊娠第1天起给予中国拟青霉(CN80-2)20g/kg灌胃,每天1次,连续7天,有显著的抗着床作用。雌激素活性和抗雌激素活性实验证明CN80-2有明显的抗雌激素活性。大鼠给予CN80-2(剂量-方法同小鼠)后,其血浆雌二醇浓度明显降低,而血浆孕酮浓度仅轻度下降。小鼠给予CN80-280g/kg-次灌胃,无明显毒性。     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养及形态学观察

目的探索着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养方法，并对培养细胞进行形态学检测。方法取着床窗口(妊娠d4)小鼠双侧子宫角，用胰蛋白酶消化和机械削刮法相结合分离上皮细胞，经高密度接种及添加EGF培养后，通过光镜和透射电镜观察其形态学特征。结果接种24h后大部分细胞已贴壁，培养4d后细胞排列紧密、长成上皮细胞集落，电镜显示细胞为分泌上皮细胞，细胞纯化率在90％以上。结论采用上述方法可成功地分离、原代培养着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞。     

海风藤酮对小鼠胚卵着床的影响

海风藤酮对小鼠胚卵着床的影响北京医科大学组织学胚胎学教研室肖君刚，李惠，刘斌近年，随着对血小板激活因子（ＰＡＦ）的不断深入研究，各种不同类型的ＰＡＦ抑制剂及ＰＡＦ受体拮抗剂不断地被合成和提取，且已用于生殖调控的研究中［１］。本校药学院已从植物海风藤中...     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1～6d分别腹腔内注射N-硝基-L-精氨酸甲酯〔L-NAME,一氧化氮合酶(NOS)的非特异性竞争抑制剂〕0.5～5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L-NAME+L-精氨酸（NO的前体）,观察L-精氨酸对L-NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上述3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L-NAME1～5mg可减少胚胎的着床位点数（P<0.05),腹腔注射4、5mg的L-NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3～5d）给予L-NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L-NAME的这种抑制作用可被同时给予的L-精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

整合素avβ3拮抗剂SB-273005抗小鼠胚胎着床的作用

[目的]探讨整合素avβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床的影响.[方法]雌雄小鼠2：1合笼,次晨检查阴栓,阳性者定为妊娠第1天,记为D1.步骤[1]取D3小鼠40只,随机分为2组,每组20只,实验组连续2 d上午灌胃给SB-273005,于D4下午观察囊胚发育情况.②取D3小鼠80只,随机分为4组,每组20只,A、B、C组为实验组,连续3 d分别灌胃给SB-273005 0．3、1、3 mg·kg-1·d-1,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率.③取D4小鼠40只,随机分为两组,每组20只,实验组双侧宫角注射SB-273005,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率.[4]各对照组用与其相应实验组同方法给同体积二甲亚枫(DMSO).取上述D8处死各组小鼠子宫,观察内膜组织学及D4处死小鼠内膜免疫组化变化.[结果]步骤[1]中实验组与对照组囊胚发育率分别为64．7%和84．5%(P＜0．01).步骤[2]中A、B、C、D组妊娠率分别55%、40%、35%、88%(P＜0．05).步骤[3]中实验组妊娠率为15%．对照组妊娠率为70%,两者相比差异有显著性(P＜0．01).说明SB-273005能降低囊胚发育率、小鼠胚胎着床数及妊娠率.组织学及免疫组化结果表明,SB-273005能引起蜕膜细胞退化解体,抑制整合素avβ3在蜕膜组织中的表达.[结论]整合素avβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床有抑制作用.     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

整合素αvβ3拮抗剂SB-273005抗小鼠胚胎着床的作用

 【目的】 探讨整合素αvβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床的影响&#65377;【方法】 雌雄小鼠2∶1合笼,次晨检查阴栓,阳性者定为妊娠第1天,记为D1&#65377;步骤①取D3小鼠40只,随机分为2组,每组20只,实验组连续2 d上午灌胃给SB-273005,于D4下午观察囊胚发育情况&#65377;②取D3小鼠80只,随机分为4组,每组20只,A&#65380;B&#65380;C组为实验组,连续3 d分别灌胃给SB-273005 0.3&#65380;1&#65380;3 mg·kg-1·d-1,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率&#65377;③取D4小鼠40只,随机分为两组,每组20只,实验组双侧宫角注射SB-273005,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率&#65377;④各对照组用与其相应实验组同方法给同体积二甲亚枫(DMSO)&#65377;取上述D8处死各组小鼠子宫,观察内膜组织学及D4处死小鼠内膜免疫组化变化&#65377;【结果】 步骤①中实验组与对照组囊胚发育率分别为64.7%和 84.5%(P < 0.01)&#65377;步骤②中A &#65380;B&#65380;C&#65380;D组妊娠率分别55%&#65380;40%&#65380;35%&#65380;88%(P < 0.05)&#65377;步骤③中实验组妊娠率为15%,对照组妊娠率为70%,两者相比差异有显著性(P < 0.01)&#65377;说明SB-273005能降低囊胚发育率&#65380;小鼠胚胎着床数及妊娠率&#65377;组织学及免疫组化结果表明,SB-273005能引起蜕膜细胞退化解体,抑制整合素αvβ3在蜕膜组织中的表达&#65377;【结论】 整合素αvβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床有抑制作用&#65377;