整合型HBV-DNA前C区基因突变与肝细胞癌的相关性

目的探讨整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区基因突变与肝细胞癌的关系。②方法应用聚合酶链反应－单链构象多态技术,对２９例肝癌、１２例慢性肝硬化和１４例非肝病病人的肝组织内整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区进行突变分析。③结果肝癌、肝硬化和正常肝组织中整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％,６６．６７％和１４．２９％,组间比较差异有显著性（χ２＝２９．４３,Ｐ＜０．００１）,３组整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区突变率分别为４１．６％,２５．０％和０,组间比较差异有显著性（χ２＝１２．４４,Ｐ＜０．０５）。④结论肝组织中整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区突变与肝细胞癌的发生和发展相关。     

人肝细胞癌及癌旁肝组织HBV-DNA的原位杂交检测

①目的探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ与增生结节和肝癌的关系。②方法应用原位杂交技术检测５８例肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌旁组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ的表达。③结果肝细胞癌及癌旁组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３７．９％（２２／５８）和４４．８％（２６／５８），差异无显著性（χ２＝０．５６，Ｐ＞０．０５）。ＨＢＶ－ＤＮＡ在癌旁组织中主要位于胞浆内，而肝癌组织中以胞核定位为主。２２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性的ＨＣＣ中，１６例ＨＣＣ及癌旁组织均阳性，６例ＨＣＣ单独阳性，两者差异有显著性（χ２＝９．０９，Ｐ＜０．０１）。６例癌旁增生结节中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（６／２７），以胞核定位为主。④结论ＨＢＶ感染与ＨＣＣ存在密切关系。癌周组织ＨＢＶ－ＤＮＡ以复制型为主，癌组织内ＨＢＶ－ＤＮＡ以整合型为主；癌旁增生结节为ＨＣＣ的癌前病变。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

豫东地区乙肝病毒感染与原发性肝癌关系探讨

本文回顾我院１９８７年１月－１９９４年１２月收治的居住在商丘及其周围１４个县市的１０６例肝癌病人与ＨＢＶ感染的相关性，着重探讨了豫东地区ＨＢＶ感染与肝癌发病的关系，１０６例肝癌患者中８１．３％有惭肝，肝硬化病史。经ＥＬＡ法检测，８５．５％有ＨＢＶ感染，其中５０％ＨＢｅＡｇ阳性，经ＰＣＲ法ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率８５．０％》     

HBx—DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲ Ｉ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨ Ｉ、Ｂｇｌ Ⅱ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶ ＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘ ＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌（ＨＣＣ），分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达。结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬化或／和慢活肝病变，且ＨＢｓＡｇ表达率９６．３％。３２例ＨＣＣ中检出８例Ｐ５３蛋白阳性（２５％），这种改变与ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达无明显关系，而与ＨＣＣ发生年龄有关；３２例ＨＣＣ组织中有２例ｐ５３基因第２４９号编码子突变（６．２５％），明显低于ＡＦＢ１高含量区ＨＣＣ，而与台湾、日本等ＡＦＢ１低含量区报道一致，提示：成都地区ＨＣＣ与ＨＢＶ感染确有密切关系；ｐ５３改变在ＨＣＣ发生上有一定作用，但是多数ＨＣＣ并无ｐ５３基因突变又提示ＨＣＣ发生尚涉及其它复杂机制；ＨＢＶ在ＨＣＣｐ５３基因改变中的作用机制值得进一步探索。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

应用聚合酶链反应进一步探讨原发性肝癌与HBV,HCV感染的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测原发性肝癌（ＰＨＣ）及肝硬化（ＬＣ）患者血中ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＨＣＶ－ＲＮＡ，同时检测血中乙肝５项标志及抗－ＨＣＶ。结果５６例ＰＨＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者４３例（７６．７８％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者４２例（７５．００％），两种方法联合应用阳性率为４９例（８７．５％）；其中３４例检测ＨＣＡ－ＲＮＡ阳性者８例（２３．５３％）。６２例ＬＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者３５例（５６．４５％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者３８例（６１．２９％），二者联合应用阳性数为４５例（７２．５８％），其中３４例检测ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性数为９例（２３．６８％）。ＰＨＣ组ＨＢＶ感染率显著高于ＬＣ组（Ｐ＜０．０５），ＨＣＶ感染率两组差异无显著性（Ｐ＜０．０５）。并对ＨＢＶ、ＨＣＶ感染与ＬＣ、ＰＨＣ的发生发展作进一步讨论。     

肝癌细胞中 HBV-DNA 片段整合及 N-ras、p~(53) 表达的研究

肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）与ＨＢＶ整合密切相关，为研究ＨＢＶ－ＤＮＡ各片段在ＨＣＣ发生中的作用，用ＨＢＶ全长基因探针通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交分析了１７例ＨＣＣ标本中ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在状态，并用ＨＢＶ片段基因探针和Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３探针检测了其相应ｍＲＮＡ的转录情况。结果发现，５２．９％ＨＣＣ标本为纯整合型，４７．１％的标本为混合型。１７例ＨＣＣ中，Ｐｒｅｓ、ＨＢｓ、ＨＢｘ、ＨＢｃ转录率分别为４７．１％、５８．８％、７０．５％和４１．２％。９例纯整合型ＨＣＣ中，上述基因转录率分别为１１．１％、４４．４％、５５．６％和１１．１％，其中ＨＢｘ较ＨＢｃ、Ｐｒｅｓ差异有显著性（Ｐ＜０．０５），ＨＣＣ标本Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３总转录率分别为８２．３％、６４．７％。提示ＨＢＶ－ＤＮＡ在ＨＣＣ细胞内主要以整合于染色体上的方式存在，而且整合片段可作为转录的模板，其蛋白产物可能通过影响Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３在细胞调控中的功能促进肿瘤的形成。     

非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

人原发性肝细胞癌地高辛素标记HBV DNA探针的原位杂交与C－myc和P_（53）癌基因表达相互关系的研究

取自肝癌高发区的４０例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）标本，应用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测ＰＨＣ和癌周肝组织内ＨＢＶＤＮＡ的表达，并用光敏生物素Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针原位杂交和用免疫组化检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ及Ｐ５３癌基因在ＰＨＣ和癌周肝组织内的表达。Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针肝内总阳性率为８０％，在ＰＨＣ内为６５％，而癌周肝组织中为７３％。ＨＢＶ－ＤＮＡ定位于肝细胞或癌细胞的胞浆和胞核内，而ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒在胞浆内比胞核内多。ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞癌周比癌内更多。结果表明，ＰＨＣ病例与ＨＢＶ存在关系密切；癌内ＨＢＶＤＮＡ大都属整合型，而癌周属游离型。研讨ＰＨＣ内ＨＢＶＤＮＡ的表达与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，和Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达相互关系及致癌作用。     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

350例病毒性肝炎患者检测HBV-DNA与HBV血清学标志物相关性研究

采用ＰＣＲ技术对３５０例各型病毒性肝炎进行检测，旨在研究血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－Ｍ之间的相关性，以确定ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。并以ＨＢＶ－ＤＮＡ为依据进一步考察ＨＢＶ－Ｍ的临床价值。结果显示：在ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）病例中ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）者１０２例（９０．２７％），说明ＨＢｅＡｇ基本可反应病毒处于复制状态；在１３７例ＨＢｅＡｇ（－）／抗－ＨＢｅ（＋）中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）为６８例（４９．６３％），表明病毒活动并未终止；在抗－ＨＢｓ（＋）１４例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２例（１４．２９％），说明抗－ＨＢｓ出现后仍然可有ＨＢＶ复制；在ＨＢＶ－Ｍ均阴性的８５例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２３例（２７．０６％），说明不能单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ检测来诊断乙肝，需定期查ＨＢＶ－ＤＮＡ或肝活体组织检查ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌，分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶ ＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达，结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬     

肝癌患者HCV感染与癌基因c—erbB—2表达的关系

探讨ＨＣＶ感染与肝癌组织中癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２表达的关系。方法；采用免疫组化ＳＰ法。４６例ＨＣＣ及其３８例癌旁组织中，ＨＣＶＮＳ３抗原的检出率为２１．７％和３４．２％，两者间无显著性差异。癌ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的检出率分别为４７．８％和４４．７，两者间无显著性差异；肝癌组织中癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达的阳性率与该患者的ＨＣＶ感染无关。     

肝细胞癌和其它慢性肝病HCV HBV感染比较分析

对１２８例有病理诊断依据的肝细胞场（ＨＣＣ）、４７例慢迁肝（ＣＰＨ）、１０５例慢活肝（ＣＡＨ）、４６例肝硬化（ＬＣ）．采用嵌套式ＰＣＲ技术检测其血标本中的丙型肝炎病毒（ＨＣｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＩＩＡ，对这两种病毒的血清学标志也进行了研究。结果：在ＨＣＣ组。ＨＣＶＲＮＡ１４．１％阳性，ＨＢＶＤＮＡ７ｉ．３％阳性。ＣＰＨ，ＣＡＨ，ＬＣ和ＨＣＣ的ＨＢＶ感染率均在９０％左右，而ＨＣＶ感染率则分别为８．５％、９．５％、１７．４％和１９．５％，显示ＨＣＶ感染率随肝病严重程度的增加而有增加的趋势；晚期肝病组的ＨＣＶ感染率（１９．０％）显著高于慢性肝炎组（９．２％，Ｐ＜０．０５）。提示ＨＣＶ感染后经过慢性肝炎、肝硬化发展为ＨＣＣ可能是一个逐渐演进的病理过程。ＨＣＶ，ＨＢＶ重叠感染率。ＨＣＣ组高于ＣＰＨ，ＣＡＨ，而与ＬＣ相近，显示ＨＣＶ重叠感染在原有ＨＢＶ感染的基础上促进病变向着迁延化、慢性化，进而向着肝硬化、ＨＣＣ方向发展。     

多聚酶链反应检测乙型肝炎后肝硬化患者血清HBV—DNV及其意义

为乙型肝炎后肝硬化患者体内ＨＢＶ的复制状况，为抗病毒治疗提供依据，以减少盲目用药。应用多聚酶链反应，对２６例乙型肝炎后肝硬化患者检测了血清ＨＢＶ－ＤＮＡ存在状态?结果显示，活动性乙型肝炎后肝硬化９例，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性８例。阳性率８８．８８％，静止性乙型肝炎后肝硬化１７例，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性６例，阳性率３５．２９％。两组比较，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异显著（Ｐ〈０．０１）。结果表明，应重点对     

地高辛标记探针原位杂交对肝细胞癌HBV DNA分布的研究

为了探讨ＨＢＶ与肝细胞癌（ＨＣＣ）发病的关系，作者应用地高辛标记ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交及免疫组化检测了８０例ＨＣＣ组织及癌周肝组织的ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ。结果显示，癌周肝组织ＨＢＶ阳性６３例（７９％），癌组织ＨＢＶ阳性４９例（６０％），癌周阳性细胞数明显多于癌内。癌周ＨＢＶ ＤＮＡ，以复制型为主，而癌组织的ＨＢＶ ＤＮＡ大多属整合型。结果表明大多数ＨＣＣ病例与ＨＢＶ存在密切相关，而且整合