通莲Ⅰ号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究通莲Ⅰ号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制.方法:将Eca109细胞以l x106个／皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37℃,5％饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～3 200 mg·L-1倍比梯度的通莲Ⅰ号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期.结果:T,Q,H的1C50值分别为386,771,729 mg·L-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43％,60.84％,61.90％.同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P＜0.05),T方作用最强.而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异.结论:通莲Ⅰ号方通过抑质细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优.     

通莲Ⅰ号方对食管癌Eca109细胞NF-κB信号通路影响的研究

目的 从分子水平揭示通莲Ⅰ号方对食管癌细胞的抑制作用及其治疗噎膈的机制.方法 体外培养食管鳞癌Eca109细胞,通莲Ⅰ号方及3拆方分别作用于细胞,以MTT法检测细胞半数有效量,Western blot法观察NF-κB信号通路各基因表达变化情况.结果 通莲Ⅰ号方及活血行气、清热解毒拆方可显著抑制Eca109细胞增殖,通莲Ⅰ号全方IC50=412 mg·L-1,清热解毒拆方IC50 =718 mg·L-1,活血行气拆方IC50=693 mg·L-1;可抑制NF-κB信号通路相关分子IKKβ3、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β3表达,作用强弱依次为:通莲Ⅰ号全方＞活血行气拆方＞清热解毒拆方＞滋阴养血拆方.结论 通莲Ⅰ号方用于治疗食管癌的有效组分在活血行气、清热解毒、滋阴养血类药物的协同作用,通过调节NF-κB介导的信号通路相关基因表达,抑制癌细胞增殖.     

通莲I号方抑制小鼠食管癌移植瘤生长作用及其机制研究

目的：研究通莲I号方对食管癌Eca109细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对肿瘤组织免疫因子TNF-α、IL-6和IL-8的影响。方法：食管癌Eca109细胞接种于小鼠右前肢皮下。小鼠随机分为模型组和通莲I号方低、中、高剂量组,分别灌胃生理盐水和通莲I号方各剂量。各组连续给药3周,末次给药结束3周后分离小鼠瘤组织,计算抑瘤率,ELISA法检测肿瘤组织上清液TNF-α、IL-6和IL-8含量。结果：通莲I号方高剂量组瘤重明显低于模型组（P＜0.05）,抑瘤率明显高于通莲I号方低剂量组（P＜0.05）。HE染色可见,通莲I号方高剂量组的肿瘤细胞淡染,核分裂较少,可见较多肿瘤细胞肿胀变性坏死。通莲I号方高剂量组肿瘤组织TNF-α、IL-6和IL-8表达明显低于模型组与通莲I号方中、低剂量组（P＜0.05,P＜0.01）。结论：通莲I号方可抑制小鼠食管癌Eca109细胞移植瘤生长,其抑瘤机制与下调瘤组织TNF-α、IL-6和IL-8等因子水平,增强免疫调节有关。     

通莲I号方联合适形放疗对中晚期食管癌患者血清TNF-α、IL-2R和CP的影响

目的:观察通莲I号方联合适形放疗对中晚期食管癌患者血清TNF-α、IL-2R和CP的影响,揭示该方抗食管癌的部分分子机制。方法:35例健康人作为对照,38例中晚期食管癌患者,年龄45⁶5岁,患者均采用三维适形放疗,总剂量(5665岁,患者均采用三维适形放疗,总剂量(56⁶6)Gy/(2566)Gy/(25³0)次/(530)次/(5⁶)周,配合通莲I号方1剂/d,2次/d。结果:治疗前,患者血清TNF-α、IL-2R和CP含量和正常人比较,有极显著性差异(P<0.01)。治疗后和正常人比较,3指标均无显著性差异(P>0.05)。治疗后6个月复发患者13例,未复发18例。复发患者IL-2R极显著升高,与未复发组比较,有极显著性差异(P<0.01);TNF-α和CP也显著升高,与未复发组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:通莲I号方联合适形放疗可以显著降低中晚期食管癌患者血清中TNF-α、IL-2R和CP含量;治疗6个月后,复发患者相关指标升高,长期疗效有待观察。     

适形放疗联合通莲I号方治疗中晚期食管肿瘤疗效分析

[目的] 比较通莲I号方配合三维适形放疗与单纯三维适形放疗治疗中晚期食管肿瘤的疗效。[方法] 38例局部中晚期食管肿瘤患者,随机分为治疗组(21例) 和对照组(17例),两组均采用三维适形放疗,总剂量(56~66)Gy/(25~30)次/(5~6)周,治疗组加服通莲I号方每日1剂,每日2次,自放疗开始给药至放疗结束后1个月。[结果] 在瘤体尺寸控制方面,治疗组和对照组的总有效率差异有显著性(P<0.05),两组在毒副反应方面差异无显著性(P>0.05),两组治疗前后生活质量(KPS评分)自身比较差异有显著性(P<0.05),同时,治疗组生活质量改善情况优于对照组,两组间KPS评分比较差异有显著(P<0.05)。[结论] 通莲I号方配合三维适形放疗治疗中晚期食管肿瘤可以增强疗效,并可提高患者的生活质量。     

涤痰化瘀汤诱导人食管癌Eca—109细胞凋亡的作用的研究

目的：研究涤痰化瘀汤药物血清诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡作用。方法：采用MTT法测定细胞生长抑制率，通过流式细胞仪（AnnexinV检测），电镜观察凋亡细胞。结果：涤痰化瘀汤药物血清能明显抑制人食道癌Eca-109细胞生长，AnnexinV检测及电镜观察结果均表明药物血清能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡，结论：涤痰化瘀汤能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡。有望用于临床治疗食管癌。     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

六君子汤提取物对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用

目的:研究六君子汤乙酸乙酯提取物对食管癌Eca109细胞增殖的影响。方法:以104个/孔的细胞密度接种96孔板中,培养24 h后,各组分别加入不同浓度六君子汤提取物的培养液100μL,质量浓度为10,20,40,60,80,100 mg·L-1,另设空白孔,每组设8个复孔,采用MTT比色法检测六君子汤提取物对食管癌Eca109细胞株生长抑制作用,采用流式细胞仪检测药物作用后细胞凋亡情况,激光共聚焦显微镜观察药物作用后细胞形态变化。结果:在10~100 mg·L-1内,不同浓度六君子汤提取物能有效抑制Eca109细胞增殖(P<0.05)。21.06,49.65,67.47 mg·L-1的六君子汤提取物作用Eca109细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.05);并且在激光共聚焦显微镜下观察到凋亡小体,与空白组相比,早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量明显增多。结论:六君子汤提取物能显著抑制食管癌Eca109细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响

目的 研究斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响.方法 采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的变化.结果 不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达下降(p<0.01).结论 斑蝥酸钠可抑制Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达.     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制.方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达.结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关.木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48h后,使Eca109细胞cyclinD1、survivin和c-myc基因表达低于对照组(P＜0.05).结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用.     

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。     

苦参碱对人食管癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响

目的探讨中药提取物苦参碱单体(Matrine)对人食管癌细胞株Eca-109的诱导凋亡和抑制增殖作用。方法体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的苦参碱对体外培养的Eca-109细胞株进行干预。以MTT比色法、Hoechst33342染色法以及流式细胞术测定苦参碱对Eca-109细胞株的诱导凋亡及抑制增殖的作用。结果 MTT实验显示苦参碱可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖,流式细胞术检测细胞周期显示G2期细胞明显增多,S期细胞显著减少。结论苦参碱能明显抑制Eca-109细胞株的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞于G2期有关。     

从细胞凋亡和周期研究旋覆归连方抑制食管癌Eca9706细胞增殖作用

目的:从细胞增殖、周期和凋亡研究旋覆归连方治疗食管癌作用机制.方法:体外培养食管癌细胞株Eca9706,MTT法检测旋覆归连方抑制细胞增殖作用,观察其时效和量效;1×105/孔细胞接种于6孔板,加入15,25,60 mg·L-1的药物作用48 h,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:旋覆归连方具有很强的抑制Eca9706增殖作用,具有剂量依赖性,IC50 58.11mg·L-1;质量浓度15,25,60 mg·L-1在96 h内抑制率依时增加;早、晚期凋亡率用药组与阴性对照组相比明显增高(P＜0.05);细胞G1/G0期比率也明显增加(P＜0.05),60 mg·L-组出现了明显的凋亡峰.结论:旋覆归连方能抑制食管癌细胞的增殖,具有浓度和时间依赖性,可能与其阻滞了细胞G1/G0期和诱导细胞凋亡有关.     

甘草次酸对人食管癌Eca9706细胞生长的抑制作用及机制

目的:研究甘草次酸对人食管癌细胞生长的抑制作用及对细胞凋亡的影响。方法:Eca9706细胞接种于96孔板,每孔104个细胞/100μL,培养24 h贴壁,分别加入含不同浓度甘草次酸的培养液100μL,质量浓度分别为95,114,138,166,200 mg·L-1,另设对照孔(加培养液100μL和与溶解药物等量的DMSO),每组设8个复孔。细胞培养48 h,MTT法检测甘草次酸对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。结果:在95~200 mg·L-1质量浓度甘草次酸能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性,(P<0.05)。83,108,133 mg·L-1的甘草次酸作用Eca9706细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。激光共聚焦显微镜下对照组细胞膜绿色荧光,以早期凋亡为主,甘草次酸高、低剂量组细胞膜绿色荧光、核红色荧光较多,既有早期凋亡,又有晚期凋亡。结论:甘草次酸可能通过诱导细胞凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。     

华蟾素注射液联合放疗对食管癌细胞增殖与周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对食管癌细胞ECA109增殖的抑制作用,分析华蟾素联合X射线照射对细胞周期的影响,探讨华蟾素注射液与放疗联合效应的机制。方法:实验分空白组、华蟾素组、放疗组、华蟾素+放疗组,作用食管癌ECA109细胞48 h后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素注射液对ECA109细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的变化,反转录-PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组泛素连接酶(RNF2),p16和周期蛋白依赖性激酶(CDK4)mRNA和蛋白表达。结果:华蟾素可显著抑制食管癌ECA109细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性。与空白组比较,各药物组中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例明显升高(P0.05),S期细胞比例明显下降(P0.05)。与空白组比较,华蟾素+放疗组中RNF2 mRNA和蛋白明显降低(P0.05),且各药物组均能促进p16 mRNA和蛋白表达(P0.05),抑制CDK4 mRNA和蛋白水平(P0.05)。结论:华蟾素注射液能有效抑制人食管癌ECA109细胞增殖,并将细胞阻滞于G0/G1期,机制可能与降低RNF2,CDK4水平,上调p16基因水平相关。