硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性

目的研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变。结果单独应用1μmol·L-1ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)%、(24.35±2.37)%和(26.37±2.39)。1μmol·L-1ST1571联合25~400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调NF-КB蛋白表达(P0.01)。结论硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的。     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的 观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM细胞生物学行为的影响.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞12～24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-gp的表达;应用RT-PCR法检测mdr-1 mRNA水平.结果 硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P＜0.05,P＜0.01),下调P-gp表达和mdr-1mRNA水平(P ＜0.05,P＜0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越明显.结论 硒化壳聚糖能够通过下调mdr-1基因和P-gp蛋白表达,阻滞细胞于G1期诱导凋亡来对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生影响.     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系

目的 研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3 K/Akt信号途径的关系.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变.结果 随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P＜0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用.结论 硒化壳聚糖可通过抑制PI-3 K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用.     

黄连解毒汤中黄酮成分逆转 K562/ADM多药耐药的实验观察

目的:观察黄连解毒汤中黄酮成分逆转肿瘤多药耐药的作用,探讨本方逆转肿瘤多药耐药的物质基础。方法:以人慢性粒细胞白血病红白血病细胞株K562的耐阿霉素(adriamycin,ADM)细胞株(K562/ADM)为细胞系,通过MTT实验观察黄芩苷、京尼平苷对K562/ADM细胞ADM的敏感性的影响,计算细胞增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50)及耐药逆转倍数,并对细胞内ADM浓度变化进行测定。结果:黄芩苷、京尼平苷均能部分逆转K562/ADM细胞。黄芩苷、京尼平苷的IC50值分别为5.06,6.74 mg.L-1。黄芩苷、京尼平苷的耐药逆转倍数分别为1.95,1.46倍。与相应的对照组相比,K562/ADM细胞经黄芩苷(50 mg.L-1)、京尼平苷(100 mg.L-1)作用后,细胞内ADM的荧光强度高于对照组,其中黄芩苷组提高到3.6%,京尼平苷组提高到1.7%。结论:黄连解毒汤逆转肿瘤多药耐药的物质基础可能与其含有的黄芩苷、京尼平苷有关。     

6种中药活性成分对K562/ADM耐药性逆转及P27和P170蛋白表达影响

目的观察中药活性成分对白血病K562/ADM耐药细胞逆转及P27和P170蛋白表达的影响,探讨其可能作用机制。方法选用补骨脂素、苦参碱、槲皮素、姜黄素、川芎嗪、大黄酸6种中药单体成分作为研究对象,MTT比色法测定6种中药成分对K562/ADM耐药细胞的增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素的质量浓度,流式细胞术检测K562/ADM耐药细胞中P27和P170蛋白表达。结果 6种中药活性成分逆转耐药倍数在6.99~10.59之间,K562/ADM耐药细胞中阿霉素积累比率为(11.6±3.7)~(17.7±2.8);对照组P27和P210蛋白的表达率分别为(33.1±2.1)和(6.51±1.33),K562/S和K562/ADM耐药细胞的P27和P210相关蛋白表达率分别在(54.2±3.5)~(72.1±4.2)和(6.21±1.35)~(6.59±1.48)之间。结论 6种中药活性成分具有不同程度的逆转耐药细胞作用,且影响耐药细胞内化疗药物质量浓度;各中药活性成分具有不同程度抑制K562/ADM耐药细胞中P27蛋白表达作用。     

半夏醇提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02的耐药性

目的:观察非细胞毒性浓度(抑制率≤5％)半夏醇提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法:将细胞悬液接种于72孔培养板中,细胞数为2 ×108个/L,半夏醇提取液(2.5,5,10,20,40μg·L-1)处理K562/A02细胞72 h后,采用MTT法测定半夏醇提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏醇提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白p170表达的变化与细胞内柔红霉素的浓度,应用SPSS 16.0软件包对实验结果进行统计学处理.结果:半夏醇提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为6.5 μg·L-1,非细胞毒性浓度半夏醇提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度( IC50),使K562/A02细胞的IC50由原来的(30.9±0.11) μg·L-1降低至(10.1±0.21) μg·L-1,其逆转倍数为3.06倍;半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,细胞膜糖蛋白p170的表达从91.21％下调至45.12％ (P ＜0.01);柔红霉素外渗试验显示,半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,可使细胞内化疗药物的浓度明显增加.结论:半夏醇提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,半夏醇提取液逆转白血病细胞耐药性是通过下调了白血病细胞膜糖蛋白p170的表达,使其将化疗药物泵出细胞外的功能受到了抑制,从而使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度,从而可以杀灭耐药的白血病细胞系.     

姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用研究

目的:研究姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用,初步探讨其逆转机制。方法:MTT法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性的变化;免疫组织化学法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞与其亲本K562细胞膜P-gp的表达;流式细胞术检测K562和K562/A02细胞内柔红霉素(DNR)的平均荧光强度(mean fluo-rescene intendity,MFI);RT-PCR法检测K562/A02细胞mdr1 mRNA。结果:用2.5 mg.L-1姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性提高;姜黄素水解物能降低K562/A02细胞膜P-gp的表达(P0.05)。K562/A02细胞内DNR的MFI低于K562细胞(P0.01),姜黄素水解物能增加K562/A02细胞内DNR的MFI(P0.05);姜黄素水解物处理后K562/A02细胞内mdr1 mRNA下降。结论:姜黄素水解物具有体外逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,且降低K562/A02细胞膜P-gp的表达降低化疗药物外排增强化疗药物在细胞内的潴留可能是其逆转作用的机制之一。     

三七总皂甙体外逆转K562/VCR细胞多药耐药的实验研究

目的:从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂甙(PNS)对人白血病细胞K562(敏感细胞)及K562/VCR(耐药细胞)的影响.方法:以MTT法测定三七总皂甙注射液对K562及K562/VCR的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;用流式细胞仪测定PNS作用后敏感细胞和耐药细胞内阿霉素的浓度;以流式细胞仪测定敏感细胞和三七总皂甙作用的耐药细胞表达多药耐药糖蛋白P-gp(P-170)的阳性率.以上实验均用维拉帕米作为阳性对照.结果:①三七总皂甙在300μg/ml浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量.②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为28.7ng/ml和1141.8ng/ml,耐药倍数为39.7倍.③三七总皂甙能够增强阿霉素(DOX)对K562/VCR的细胞毒作用.④三七总皂甙能够增加耐药细胞K562/VCR细胞内的阿霉素的蓄积浓度.⑤三七总皂甙(200μg/ml)可下调多药耐药基因mdr-1表达的P-gp糖蛋白的量,而未发现维拉帕米的类似作用.结论:三七总皂甙能够部分逆转耐药细胞K562/VCR的多药耐药性.     

硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞 bcr/abl融合基因表达的影响

目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响,探讨这种作用与bcr/abl融合基因表达的关系。方法:应用磺酰罗丹明B(SRB)法和集落形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响;应用Western blot(免疫印迹)法检测细胞P210bcr/abl融合蛋白含量;应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测bcr/abl融合基因信使RNA(mRNA)水平。结果:50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562细胞48 h可明显抑制细胞增殖和降低其存活率(P<0.05,P<0.01);50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用48 h或200 mg·L-1硒化壳聚糖作用12,24,48 h后K562细胞内P210bcr/abl蛋白含量呈时间和剂量依赖性下降(P<0.05,P<0.01),而bcr/abl融合基因mRNA水平未见明显改变。结论:硒化壳聚糖可通过下调bcr/abl融合基因表达的P210bcr/abl融合蛋白对K562细胞增殖产生抑制作用。     

欧白芷素对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用(英文)

目的:探讨欧白芷素对耐药细胞株K562/A02中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drug resistance,MDR)提供新方法。方法:采用MTT法观察阿霉素对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测欧白芷素对K562和K562/A02细胞内阿霉素累积和细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果:欧白芷素对耐药细胞株K562/A02有显著的逆转耐药活性,最大逆转倍数为7.36。在K562/A02细胞中,欧白芷素明显增加阿霉素的累积,增加了罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)蓄积,抑制了Rh123的外排,同时欧白芷素还在mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达。结论:欧白芷素能够抑制K562/A02耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。     

左氧氟沙星注射液及口服片剂在健康人体内的药动学研究

 目的 研究左氧氟沙星注射液及口服片剂单次给药的药动学。方法 选18名男性健康受试者,分别随机交叉给予左氧氟沙星注射液200 mg（注射时间60 min）及200 mg口服片剂;另选18名健康受试者,分别随机交叉给予左氧氟沙星注射液300 mg, 注射时间分别为60及90 min。采用反相高效液相色谱法测定血及尿药浓度。结果 左氧氟沙星200 mg注射液与200 mg口服片剂的主要药动学参数c_max分别为（3.06±0.32）,(2.50±0.39) mg·L^-1;AUC分别为(17.79±1.62),(17.02±1.79) mg·h·L^-1;t_1/2β分别为(5.60±0.31),(5.73±0.48) h;48 h尿药累积排泄百分率分别为(72.58±8.66)%和（71.50±6.75）%。经计算口服片剂的绝对生物利用度为（96.03±9.35）%。左氧氟沙星注射液300 mg, 注射时间分别为60及90 min的主要药动学参数c_max分别为（4.63±0.59）,（4.21±0.66）mg·L^-1;AUC分别为（29.17±2.66）,（29.04±3.76） mg·h·L^-1;t_1/2β分别为（6.05±0.30）,（5.96±0.48）h;48 h尿药累积排泄百分率分别为（74.50±9.32）%和（77.68±8.86）%。两组中的主要参数经配对t检验除c_max有显著性差异(P＜0.05)外,其余均无显著性差异(P＜0.05)。结论 200 mg左氧氟沙星片剂的口服吸收良好,绝对生物利用度为(96.03±9.35)%;给予相同剂量左氧氟沙星300 mg而注射时间不同（60及90min）的药动学过程基本一致,因此临床可根据具体情况调整给药时间。     

醒脑静口服给药栀子苷在Beagle犬体内的药代动力学研究

目的:建立Beagle犬血浆中栀子苷的高效液相色谱分析方法,研究醒脑静口服给药后栀子苷的药代动力学特征及生物利用度。方法:Beagle犬分别口服、注射给予醒脑静,采用HPLC测定Beagle犬血浆中栀子苷浓度,以Kinetica软件拟合,计算相关药动学参数。结果:Beagle犬血浆中栀子苷在1.24～158.88 mg.L-1线性关系良好,口服给药的主要药动学参数为Cmax(11.8±0.6)mg.L-1,Tmax(52.0±4.5)min,AUC(1 280.8±172.0)mg.min.L-1,MRT(118.7±25.4)min。注射给药的药动学参数为Cmax(107.4±6.3)mg.L-1,AUC(7 930.1±670.0)mg.min.L-1,MRT(92.4±5.1)min。生物利用度为(6.46±0.87)%。结论:该实验建立的Beagle犬血浆中栀子苷的HPLC分析方法,适用性良好,提取、方法回收率和日内、日间精密度均符合要求,室温及冻融条件下稳定性良好。醒脑静口服给药栀子苷的生物利用度较低。     

静脉滴注头孢哌酮/他唑巴坦复方制剂的健康人体药动学

 目的研究静脉滴注头孢哌酮/他唑巴坦复方制剂在健康人体内的药动学。方法16名健康男性志愿者静脉滴注头孢哌酮2000mg/他唑巴坦500mg复方制剂,采用反相高效液相色谱法同时测定血浆中头孢哌酮和他唑巴坦浓度,并用DAS1.0程序处理药-时数据。结果头孢哌酮的ρ_max为(194.94±40.04)mg·L^-1,t_1/2β为(2.23±0.41)h,AUC_0-∞为(364.41±71.77)mg·h·L^-1,AUC_0-8为(326.73±62.84)mg·h·L^-1,CLs为(5.76±1.2)L·h^-1;他唑巴坦的ρ_max为(26.58±4.07)mg·L^-1,t_1/2β为(0.87±0.12)h,AUC_0-∞为(18.89±4.23)mg·h·L^-1,AUC_0-3为(16.91±4.43)mg·h·L^-1,CLs为(27.80±6.6)L·h^-1。结论健康志愿者静脉滴注头孢哌酮2000mg/他唑巴坦500mg复方制剂,头孢哌酮和他唑巴坦均符合一级消除二室模型,其主要药动学参数与文献报道接近,为临床合理用药提供了参考资料。     

通痹汤治疗强直性脊柱炎的临床疗效分析

目的:观察中西医结合治疗强直性脊柱炎的临床效果.方法:选取80例发病时间在3个月以内的强直性脊柱炎患者,并随机分为两组,40例患者口服吲哚美辛肠溶片和布洛芬治疗作为对照组,40例患者在对照组基础上加服自拟通痹汤,两组患者均治疗3个月,观察比较两组患者治疗效果.结果:观察组患者治疗总有效率为92.50％,对照组患者治疗总有效率为77.50％,两组患者治疗效果有显著差异(P＜0.05).两组患者治疗前血沉(ESR),慢反应物质(cRP)及免疫球蛋白A(IgA)无显著差异,治疗后观察组ESR,CRP及IgA分别为(8.05 ±3.02)mm·h-1,(7.25±3.52)mg·L-1,(1.58±0.87) mg·L-1,对照组ESR,CRP及IgA分别为(14.56±6.12)mm·h-1,(12.32±6.27) mg·L-1,(3.02±0.89)mg·L-1,两组差异显著(P＜0.05).结论:中西医结合治疗强直性脊柱炎可达到更理想的治疗效果.     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.     

血浆中硫普罗宁的测定及其片剂人体生物等效性研究

 目的研究硫普罗宁片在健康人体内的相对生物利用度。方法采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定了18名健康男性受试者交叉po 200mg的硫普罗宁参比制剂和受试制剂后不同时间血浆中硫普罗宁的浓度,求出主要药动学参数,并进行方差分析和双单侧t检验。结果HPLC-MS测定血浆中硫普罗宁的线性范围为0.02～5mg·L^-1,定量下限为0.02mg·L^-1。日内、日间精密度(RSD)均小于13%,相对回收率介于96%～106%之间。硫普罗宁片参比制剂和受试制剂主要药动学参数:ρ_max分别为(3.54±0.75)和(3.27±1.03)mg·L^-1;t_max分别为(4.6±1.1)和(4.3±1.0)h;AUC_0-96h分别为(18.2±4.5)和(17.6±5.9)mg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为(20.4±5.5)和(19.9±6.9)mg·h·L^-1;t_1/2分别为(39.4±14.3)和(41.8±16.5)h。t_max经非参数秩和检验,受试制剂与参比制剂无统计学显著性差异;ρ_max、AUC_0-96h、AUC_0-∞经对数转换后进行方差分析,受试制剂与参比制剂无统计学显著性差异,双向单侧t检验结果表明,受试制剂ρ_max的90%可信限落在参比制剂70%～143%之间,受试制剂AUC的90%可信限落在参比制剂80%～125%之间;以AUC_0-96h计算,受试制剂硫普罗宁片的相对生物利用度为(95.7±26.1)%。结论两种硫普罗宁片制剂具有生物等效性。     

单剂量及多剂量口服奥扎格雷钠口服液的人体药动学研究

 目的考察奥扎格雷钠在国人中的药动学过程。方法采用双周期试验设计,选用12名健康志愿者单剂量及多剂量po200 mg奥扎格雷钠口服液,建立HPLC测定奥扎格雷钠的血药浓度并计算药动学参数,进而对主要药动学参数进行统计分析。结果单剂量与多剂量的药-时曲线均符合一级吸收的二房室开放模型,其主要药动学参数AUC_0-t分别为(3.50±0.90)与(5.87±1.18)mg·h·L^-1,AUC_0-∞分别为(3.73±0.91)与(6.32±1.29)mg·h·L^-1,ρ_max分别为(3.10±1.06)与(5.12±1.37)mg·L^-1,t_max分别为(0.42±0.12)与(0.50±0.26)h,t_1/2β分别为(0.72±0.26)与(0.75±0.99)h。结论单剂量与多剂量给药的主要药动学参数比较ρ_max,AUC_0-t,AUC_0-∞采用Excel进行成对t检验具有极显著性差异(P<0.01)。