HSPgp96与rIL-2治疗小鼠H22肝癌移植瘤的实验研究

目的：研究热休克蛋白gp96(Heat—Shock Protein gp96，HSPgp96)—肽复合物瘤苗与重组人白介素-2(Recombinant Human Interleukin-2，rIL-2)对小鼠H22肝癌移植瘤的治疗效果。方法：从H22肝癌细胞中提取和纯化HSPgp96。建立小鼠H22肝癌移植瘤模型，应用HSPgp96与rIL-2治疗并比较疗效，观察指标：瘤重，光镜、电镜下观察组织结构。结果：经鉴定获得纯化的HSPgp96。HSPgp96 5μg与rIL-2 25ku治疗小鼠H22肝癌有效。结论；该实验方法提纯的HSPgp96与重组人IL-2都能有效抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长。     

肝癌细胞疫苗对荷瘤小鼠脾淋巴细胞IFN-γ生成及肿瘤浸润淋巴细胞的影响

目的探讨高强度聚焦超声(HIFU)制备肿瘤疫苗对小鼠抗同源肿瘤免疫力的影响。方法以HIFU辐照或高温水浴灭活H22细胞制成HIFU瘤苗和高温瘤苗。将雌性BALB/c小鼠108只,随机分为HIFU瘤苗、高温瘤苗、生理盐水组,分别皮下注射HIFU瘤苗、高温瘤苗、生理盐水,之后接种H22细胞,观测荷瘤小鼠肿瘤体积及生存期。ELSIA检测免疫后荷瘤小鼠脾淋巴细胞在同源肿瘤再刺激下IFN-γ的生成。免疫组化检测小鼠肿瘤浸润T淋巴细胞。结果 HIFU瘤苗免疫使小鼠肿瘤生长被抑制,脾淋巴细胞IFN-γ生成增加,且较高温瘤苗组更显著(P<0.05)。瘤苗增加了肿瘤中CD4+和CD8+细胞浸润的程度。结论 HIFU瘤苗提高了实验动物的抗肿瘤免疫力,表现为增高的淋巴细胞IFN-γ生成和肿瘤内淋巴细胞浸润。     

高强度聚焦超声扫描损伤离体人子宫肌瘤的能效关系研究

目的：通过研究高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound，HIFU)扫描损伤离体人子宫肌瘤的能效关系，寻找HIFU扫描损伤子宫肌瘤的适宜参数。方法：不同声强及辐照时间的HIFU(频率0．8MHz，焦距117mm,声强0～8587．6W／Cm^2)在相同的扫描线长下对同一焦点深度的离体人子宫肌瘤组织进行扫描损伤，记录不同声强造成组织损伤的阈扫描时间并计算其损伤灶体积及能效因子。结果：在相同的声强下，损伤体积随辐照时间的延长而增加，阈扫描时间随声强的增加而减少，能效因子随声强及扫描时间不同而发生变化，随着声强的增大，最佳能效关系点出现后移，焦点声强为5762．7W／cm^2时其阈扫描时间(45s)为出现最佳能效因子所需的扫描时间。结论：HIFU以15mm线长进行扫描损伤子宫肌瘤时，焦点声强5762．7W／cm^2、扫描时间45s是适宜的治疗参数。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响。方法:48只荷瘤小鼠随机分为模型组、环磷酰胺治疗组、扶正抑瘤颗粒大剂量治疗组和扶正抑瘤颗粒小剂量治疗组,分别予以相应药物治疗14 d。碘化丙啶染色,流式细胞术检测各组小鼠肝癌H22细胞的凋亡率。采用荧光探针罗丹明123负载,激光扫描共聚焦显微镜下观察H22细胞的荧光强度,分析H22细胞线粒体膜电位的大小。结果:扶正抑瘤颗粒可以提高小鼠肝癌H22细胞的凋亡率,降低H22细胞的线粒体膜电位,与模型组比较,差异有统计学意义。结论:扶正抑瘤颗粒的抗肿瘤机制可能与降低肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

高强度聚焦超声的不同声强对CT-26肿瘤细胞的急性生物学效应研究

目的观察高强度聚焦超声(HIFU)对体外培养的CT-26肿瘤细胞的急性生物学效应,探讨HIFU破坏肿瘤细胞的确切机理。方法固定辐照时间,应用不同声强的HIFU辐照CT26细胞株后,用台盼兰染色、MTT 法测定活肿瘤细胞数,同时用台盼兰染色观察肿瘤细胞的形态学变化,分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系, 了解剂量-效应关系。结果随着HIFU辐照声强的增加,肿瘤细胞的存活率迅速减少,全部杀死CT26细胞剂量的最小值为600W／cm2×30s;但死亡细胞形态完全下一致,当1000W／cm2×30s时死亡细胞无完整细胞形态,几乎完全为细胞碎片。结论声强低时对细胞的影响以高温效应为主,声强高时以高温效应和空化效应为主或以空化效应为主。     

融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用

目的 制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM.CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用.方法 用含hlL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1( ).GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1( )瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN- γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cγ释放法测定H22/pcDNA3.1( )-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性.结果 成功制备了含有hIL2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长.结论 转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期.     

超声辐射微泡治疗小鼠皮下H22肝癌移植瘤的疗效

目的：研究超声辐射微泡对小鼠皮下H22肝癌移植瘤的治疗作用。方法：建立小鼠H22肝癌腹水瘤皮下移植瘤模型，随机分对照组、单纯超声治疗组和超声微泡组。观察肿瘤生长情况，计算瘤重，对治疗后肿瘤组织进行病理学检查，了解肿瘤细胞坏死和凋亡情况，并进行定量分析。结果：相对于对照组，超声微泡组肿瘤生长延缓，肿瘤坏死面积显著增加，凋亡肿瘤细胞数明显增多（P〈0．05）。结论：超声辐射微泡可显著抑制H22肝癌移植瘤的生长，除杀灭肿瘤细胞外，还可诱导瘤细胞凋亡。     

微波制备IFN-γ处理的小鼠H22肝癌瘤苗免疫荷瘤鼠的抗瘤作用

目的 探讨用微波方法制备干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)处理的小鼠H22肝癌细胞瘤苗(microwave and IFN-γ treated H22 tumor cells making H22 tumor vaccine,MITTV-H22)激发机体的抗肿瘤免疫反应.方法 小鼠皮下接种H22肿瘤细胞,同时于肿瘤接种部位皮下接种MITTV-H22进行免疫治疗.观察2组小鼠的生存期,治疗结束后取瘤称质量、测瘤体积、计算体积抑瘤率和质量抑瘤率、观察瘤组织病理切片.结果 实验组小鼠的平均生存期为46.5d,对照组小鼠的平均生存期为34.0d(P＜0.05＝.实验组小鼠的瘤块体积增长速度明显慢于对照组(F=179.318,P＜0.0＝.实验组小鼠的平均瘤体积、平均瘤质量小于对照组.实验组的体积抑瘤率为(57.80±18.40)%,质量抑瘤率为(62.65±23.53) %.实验组肿瘤组织坏死明显增多,大片坏死组织中可见散在成团或岛屿状的残留瘤细胞,淋巴细胞多见,瘤体周边纤维母细胞明显增生.对照组肿瘤组织中瘤细胞增生活跃,局部可见小片状坏死灶,肿瘤细胞间淋巴细胞极少见,瘤体周边有很少或未见纤维母细胞增生.结论 MITTV-H22对H22细胞型肝癌具有较强的治疗作用.     

咖啡酸锗抗肝癌作用及其机制的实验研究

目的:探讨咖啡酸锗对H22肝癌小鼠的体内抗肿瘤作用及其诱导细胞凋亡的机制。方法:采用H22肝癌小鼠模型观察咖啡酸锗的体内抗肿瘤作用,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构改变,免疫组化方法检测肿瘤组织中bax、bcl-2蛋白表达。结果:咖啡酸锗对小鼠H22移植瘤的生长具有明显抑制作用,高、中浓度组抑瘤率分别为57.0%、40.4%(P<0.01),电镜下可见典型的细胞凋亡形态特征。咖啡酸锗处理后肿瘤组织中bax蛋白表达明显增强,bcl-2表达降低(P<0.05)。结论:咖啡酸锗对H22肝癌小鼠具有明显的体内抗肿瘤作用,同时能够促进肿瘤组织中bax蛋白表达,抑制bcl-2蛋白表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

微波制备IFN-γ处理的小鼠H22肝癌瘤苗的抗瘤作用

目的探讨用微波方法制备IFN-γ处理的小鼠H22肝癌细胞瘤苗(MITTV-H22)对H22细胞型肝癌的预防与治疗作用。方法 (1)预防实验:采用MITTV-H22免疫小鼠3次后接种H22肿瘤细胞,观察小鼠的生存期、肿瘤生长情况及检测淋巴细胞增殖指数。(2)治疗实验:小鼠接种H22肿瘤细胞的同时接种MITTV-H22进行免疫治疗。观察小鼠的生存期,治疗结束后取瘤称重、测瘤体积。结果 (1)预防实验:实验组小鼠于H22肿瘤细胞攻击后7 d经解剖肿瘤接种部位未发现瘤组织。对照组于接种部位出现直径小于0.5cm的包块,成瘤率为100%。实验组小鼠的生存期(115.40 d±11.22 d vs 31.87 d±5.87 d)和淋巴细胞增殖指数(1.51±0.23 vs 1.26±0.18)都优于对照组(P<0.05)。(2)治疗实验:实验组小鼠的平均生存期长于对照组(46.5 d±3.3 d vs 34.0 d±4.6 d,P<0.05);实验组瘤块体积增长速度明显慢于对照组(F=179.318,P<0.05);实验组的平均瘤体积(0.67 cm~3±0.21cm~3 vs 1.84cm~3±0.74 cm~3)、平均瘤质量(0.67 g±0.35 g vs 1.91 g±0.34 g)小于对照组(P<0.05)。结论 MITTV-H22可以有效的抑制肿瘤生长,具有明显的抗瘤效应。