杞菊地黄汤对化学诱导光感受器细胞凋亡大鼠的治疗观察

目的观察不同剂量杞菊地黄汤对N甲基N亚硝脲(NmethylNnitrosourea,MNU)诱导的大鼠光感受器细胞凋亡的影响。方法SD大鼠分为正常组、模型对照组以及杞菊地黄汤6倍、3倍、1倍和1/3倍各剂量组。TUNEL法检测光感受器细胞的凋亡,常规HE染色测量视网膜外核层的厚度。结果与模型对照组相比,3倍与1倍剂量杞菊地黄汤能显著降低MNU诱导的大鼠外核层细胞凋亡百分率(P<0.01),维持外核层厚度(P<0.01);6倍和1/3倍剂量杞菊地黄汤组大鼠与模型组无差异(P>0.05)。结论3倍与1倍剂量的杞菊地黄汤对MNU诱导的光感受器细胞凋亡有抑制作用。     

N-甲基-N-亚硝基脲诱导大鼠视网膜变性早期基因表达谱分析

背景N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）诱导的大鼠光感受器细胞凋亡可用于研究视网膜变性类疾病,但视网膜变性类疾病早期基因水平的研究尚未见报道。目的应用基因芯片技术研究MNU诱导的视网膜变性大鼠早期基因表达谱的变化。方法6周龄雌性SD大鼠50只分为正常组20只、12h模型组20只和24h模型组10只。模型组大鼠皮下注射MNU（40mg／kg）,正常组大鼠皮下注射等容量的生理盐水作为对照。分别于造模后12、12、24h处死正常组和12h模型组、24h模型组大鼠,大鼠右眼球进行常规视网膜组织病理学检查,正常组和12h模型组大鼠左眼的新鲜视网膜用基因芯片技术检测差异基因的表达,用荧光实时定量PCR（real—timePCR）法验证基因芯片技术检测出的差异表达率≥2．0的基因mRNA表达水平。结果全层视网膜厚度测量表明,24h模型组大鼠的厚度值明显低于正常组大鼠和12h模型组大鼠,差异均有统计学意义（t=9．926,P=0．002;t=2．736,P=0．028）。24h模型组大鼠外核层厚度值为（26．58±2．90）仙m,明显低于正常组的（38．11±1．01）μm和12h模型组的（35．07±3．03）μm,差异均有统计学意义（t=6．028,P=0．009;f=6．839,P=0．006）,正常组与12h模型组间大鼠全层视网膜厚度和外核层厚度值比较差异均无统计学意义（全层厚度：t=1．541,P=0．324;外核层厚度：t=2．040,P=0．134）。大鼠cDNA基因芯片技术检测结果表明,12h模型组大鼠全部17000个基因的表达谱中涉及生物过程的基因为142个,涉及分子功能的基因为94个,排除重复基因共有74个基因,差异表达基因主要涉及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、Toll样受体通路和细胞凋亡通路。对基因芯片技术检测的差异表达率≥2．0的基因进行的real．timePCR定量分析表明,CCL2、,L—Jb、CCL3、c-fos、c—myc、p53和MMP3基因mRNA表达值与基因芯片技术检测的表达趋势一致。结论MNU诱导的视网膜变性早期有明显的基因表达改变。基因芯片检测的基因表达改变结果与real—timePCR定量分析结果一致。     

大鼠视网膜变性中药保护作用的实验研究

目的观察金钠多(Ginaton,Gin)和葛根素(Puerarin,Pue)对N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosorea,MNU)诱导SD大鼠视网膜变性的保护作用及机制。方法雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、Gin大剂量和中剂量组、Pue大剂量和中剂量组。于生后47d开始腹腔注射给药,每日1次。并于生后50d,模型组和各药物处理组的大鼠腹腔注射MNU60mg·kg-1,正常对照组腹腔注射生理盐水。在MNU或生理盐水处理后不同时间处死动物,取眼球。视网膜形态学分析测量周边视网膜总厚度,TUNEL试剂盒检测感受器细胞凋亡。结果MNU处理7d后,模型纽周边视网膜总厚度为36μm,Gin组(大剂量和中剂量)和Pue组(大剂量和中剂量)分别为(44±2)μm,(37±2)μm,(46±2)μm,(35±2)μm。MNU处理24h后,模型组周边视网膜光感受细胞凋亡指数为(38.0±3.6)%,Gin大剂量组、中剂量组、Pue大剂量组和中剂量组分别为(26.3±2.7)%,(37.4±2.9)%,(25.4±3.0)%,(39.0±2.5)%.结论Gin和Pue对MNU引起周边视网膜损伤有一定的保护作用,呈剂量依赖性,其作用机制是通过抑制光感受器细胞发生凋亡。但二者对中心视网膜均无保护作用。     

MNU诱导视网膜变性大鼠bax和bcl-xl的表达及意义

目的检测bax和bcl-xl在N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导的视网膜变性大鼠中的表达,并探讨其在光感受器细胞凋亡中的意义。方法采用Real-Time PCR法检测正常组和MNU腹腔注射后0.5、1、2、3、5 d大鼠视网膜中bax和bcl-xl的表达,TUNEL法检测各组大鼠视网膜细胞的凋亡。结果正常组视网膜中可检测到bax和bcl-xl的表达,MNU处理后0.5 d,bax表达上升,第1天达顶峰,第5天仍高于正常组;MNU处理后12 h,bcl-xl表达下降,第2天达低谷,第5天仍低于正常组。正常组未见TUNEL阳性细胞,MNU处理后12 h,外核层见少量TUNEL阳性细胞,MNU处理后第2天阳性细胞达顶峰,随后逐渐减少,第5天外核层仍有少量阳性细胞。结论bax和bcl-xl表达量的变化可能在MNU诱导的视网膜变性发病机制中起着重要作用。     

Rhodopsin和recoverin在MNU诱导的光感受器损伤中的表达变化

目的：观察N-甲基-N-亚硝基脲( MNU)诱导的大鼠视网膜光感受器损伤过程中Rhodopsin 和recoverin表达变化与损伤的时效关系。
　　方法：将36只SPF级7周龄大鼠随机分为正常对照组, MNU模型组(6h组,12h组,24h组,3d组,7d组),每组各6只。模型组一次性腹腔注射60mg/kg MNU,正常对照组腹腔注射等量PBS。右眼行HE,TUNEL,透射电镜评估视网膜组织损伤的超微结构变化及细胞凋亡程度,左眼取视网膜组织通过Western blot和免疫荧光观察视网膜组织中Rhodopsin和recoverin的mRNA表达变化。
　　结果：透射电镜观察到MNU注射12 h 后出现凋亡小体,24 h后外核层大部分细胞呈阳性反应;TUNEL 检测发现MNU注射24 h 光感受器细胞凋亡指数最高,达(29.7±2.3)%,与电镜结果吻合。 Western blot 结果表明, MNU注射12 h后表达有极显著性差异( P<0.01),而Recoverin的表达从注射后24h有极显著性差异(P<0.01)。
　　结论：一次性腹腔注射60 mg/kg MNU能特异性诱导SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡, Rhodopsin和recoverin表达下调与MNU诱导光感受器细胞的选择性凋亡有关。     

N-甲基-N亚硝脲诱导的大鼠视网膜损伤过程中光感受器间维生素A类结合蛋白和恢复蛋白的达达变化

观察N-甲基-N亚硝脲(MNU)诱导的大鼠视网膜损伤对光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)和恢复蛋白(recoverin)在视网膜中的表达变化.方法雌性Sprague-Dawley大鼠30只随机分为正常对照组和MNU处理1、3、7、10d组,每组均为6只大鼠.不同时间MNU处理组大鼠按体重40 mg/kg给予一次性腹腔注射MNU;正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水5 ml/kg.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光检测各组大鼠视网膜中IRBP和恢复蛋白的mRNA及蛋白表达.结果 RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,不同时间MNU处理组IRBP的mRNA表达水平随MNU作用时间增加而逐渐降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);恢复蛋白的mRNA表达水平随MNU作用时间增加而逐渐升高.MNU处理1d组恢复蛋白的mRNA表达水平与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);MNU处理组3、7、10d组恢复蛋白的mRNA表达水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光显微镜观察结果显示,正常对照组大鼠视网膜IRBP主要表达在光感受器细胞内、外节;不同时间MNU处理组IRBP在视网膜各层均有表达并随MNU作用时间增加而逐渐降低.恢复蛋白阳性标记物主要见于视网膜内核层、内丛状层及节细胞层,随MNU作用时间增加恢复蛋白的表达逐渐增强.结论MNU可降低IRBP的表达,但增加恢复蛋白的表达.     

促红细胞生成素对急性高眼压大鼠视网膜的保护作用

目的:探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)预处理对大鼠急性高眼压视网膜损伤的保护作用及其机制.方法:选用健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为正常组4只(不做任何处理直接处死),生理盐水组16只(造模前3hip生理盐水),rhEPO组16只(造模前3hip rhEPO).采用生理盐水前房加压灌注法升高大鼠眼压至100mmHg并维持60min,于造模成功后6,24,48,72h分别处死动物摘取眼球制作视网膜石蜡切片.HE染色观察视网膜组织的形态学改变;分别采用TUNEL法和免疫组化法观测凋亡细胞和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)在视网膜中的表达和分布,并利用计算机图像分析系统量化检测指标,进行统计学分析.结果:急性高眼压造成大鼠视网膜损伤,生理盐水组大鼠视网膜内层变薄,所占整个视网膜的百分比较正常组下降,rhEPO组视网膜内层所占百分比较生理盐水组大,差异有统计学意义(P＜0.01);正常组大鼠视网膜未见TUNEL阳性细胞,生理盐水组和rhEPO组在神经节细胞层、内核层均可见TUNEL阳性凋亡细胞,但thEPO组与生理盐水组比较,TUNEL阳性细胞减少,差异有统计学意义(P＜0.01).正常组视网膜p-Akt有弱表达,生理盐水组和rhEPO组在神经节细胞层、内网层、内核层均可见p-Akt阳性细胞,但rhEPO组比生理盐水组表达增强,差异有统计学意义(P＜0.01).神经节细胞层与内核层p-Akt的表达较内网层强.结论:rhEPO预处理可减弱高眼压对视网膜造成的损伤,减少和延缓细胞凋亡的发生,其可能的机制是通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信号传导通路上调p-Akt来抑制凋亡的发生.     

糖尿病早期大鼠视网膜血管凋亡相关基因的表达

目的使用基因芯片技术分析糖尿病早期大鼠视网膜血管凋亡相关基因表达概况。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。在血糖升高后的第6周分别处死正常组大鼠和糖尿病组大鼠各10只，提取20只眼的视网膜血管，一步法提取总RNA。使用(α-32P)脱氧腺苷酸(dATP)标记样品制作探针，与含有1176个基因的尼龙膜芯片进行杂交。使用计算机软件对所获结果进行相关分析。选择3个差异表达的基因进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证。结果糖尿病大鼠第6周，136个基因具有差异表达，占检测基因总数的11.5％。其中，表现为上调的基因90个，占7.6％；表现为下调的基因46个，占3.9％。差异表达涉及多种功能的多个基因。与凋亡信号传导通路相关的72个基因中，有15个出现了表达的差异。表达上调的基因包括肿瘤坏死因子（TNF）家族中Fas相关的死亡域（FADD）、TNF受体家族成员12 （TNFRSF12）、TNF受体家族成员9 （TNFRSF9）和TRAIL；Bcl-2家族的bcl-2,bcl-w,bax和 bak1以及Akt等；表达下调的基因有Fas相关因子（FAF1)。结论糖尿病早期大鼠视网膜血管基因表达发生了复杂的变化，特别是多个凋亡相关通路的基因在糖尿病早期就发生改变，而且多数处在通路上游。提示糖尿病视网膜病变的发生涉及多条凋亡信号传导通路，分子生物化学水平上的变化还仅仅局限在凋亡的诱导期。 （中华眼底病杂志，2008，24：244-248）     

益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜Bax、Caspase-3表达的影响

目的　观察益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜中Bax、Caspase-3表达的影响。方法　24只RCS大鼠分为3组，每组8只，雌雄各半，其中，空白组:RCS（rdy+/+，p+/+）大鼠灌胃生理盐水；模型组:RCS（rdy-/-，p-/-）大鼠灌胃生理盐水；益气明目丸组:RCS（rdy-/-，p-/-）大鼠灌胃益气明目丸悬浊溶液。灌胃30 d后，HE染色观察各组视网膜各层结构，免疫组织化学染色法检测各组视网膜组织中Bax、Caspase-3的平均光密度值，Western blot法测定各组视网膜组织中Bax、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果　HE染色结果显示，益气明目丸组大鼠视网膜厚度明显高于模型组，感光细胞核数目也较模型组增多，外丛状层、外核层、视杆视锥层较模型组结构更清晰。免疫组织化学染色检测结果显示，益气明目丸组Bax、Caspase-3平均光密度值（0.133±0.030、0.069±0.024）均较模型组(0.211±0.036、0.119±0.027)减少（均为P＜0.01）。Western blot检测结果显示，益气明目丸组Bax蛋白、Caspase-3蛋白相对表达量（0.374±0.051、0.628±0.045）均明显低于模型组(0.768±0.061、0.802±0.074)，差异均有统计学意义（均为P＜0.01）。结论　益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜的超微结构具有保护作用；益气明目丸通过抑制视网膜上Bax、Caspase-3的表达减轻视网膜感光细胞的凋亡，达到保护视细胞的目的。     

黄芩苷调节IL-33/ST2信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜新生血管生成的影响

目的 探讨黄芩苷调节白细胞介素(IL)-33/基质裂解素2(ST2)信号通路对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜新生血管生成的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组(正常大鼠,灌胃生理盐水)、DR模型组(大鼠建立DR模型后,灌胃生理盐水)和黄芩苷低、中、高剂量组(大鼠建立DR模型后,分别灌胃75 mg·kg^-1、150 mg·kg^-1、300 mg·kg^-1黄芩苷),所有大鼠均以右眼为实验眼。FFA检查各组大鼠视网膜血管生成情况,ELISA检测各组大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、Ang-1、IL-6、IL-33、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测各组大鼠视网膜组织中IL-33、ST2蛋白表达水平。结果 与对照组相比,DR模型组大鼠血清VEGF、Ang-1、IL-6、IL-33、TNF-α水平及视网膜组织中IL-33、ST2蛋白表达水平均显著升高(均为P<0.05),右眼眼底新生血管增多,荧光素渗漏明显;与DR模型组相比,黄芩苷低、中、高剂量组大鼠血清VEGF、Ang-1、IL-6、I...     

Suppression of N-methyl-N-nitrosourea-induced photoreceptor apoptosis in rats by docosahexaenoic acid

We evaluated the effects of dietary intake of docosahexaenoic acid (DHA) on photoreceptor cell apoptosis caused by N-methyl-N-nitrosourea (MNU). Five-week-old female Sprague-Dawley rats were fed basal diet (AIN-76A) or DHA diet (modified AIN-76A containing 9.5% DHA) for 2 weeks, and then received a single intraperitoneal injection of 60 mg/kg body weight MNU at 50 days of age. Then, rats continued to receive the same diet or were switched to the opposite diet: group 1, basal diet before and after MNU injection; group 2, DHA diet before MNU injection and basal diet after MNU injection; group 3, basal diet before MNU injection and DHA diet after MNU injection; group 4, DHA diet before and after MNU injection (10 rats in each group). Rats were starved for 24 h, then sacrificed 3 or 7 days after MNU. Morphologically, at 3 days after MNU injection, photoreceptor cell apoptosis was advanced in group 1 compared with group 4. At this time point, as evaluated by retinal damage ratio [(length of retina less than 4 photoreceptor cells thick/whole retinal length) x100], retinal damage was highest in group 1 (82.4 +/- 5.1%), followed by group 2 (41.1 +/- 7.3%), group 3 (24.7 +/- 11.5%), and group 4 (6.6 +/- 6.6%); severity tended to be inversely correlated with serum DHA composition. At 7 days after MNU injection, active signs of photoreceptor cell apoptosis ended in all MNU-treated groups, and retinal damage ratio was high in group 1 (88.4 +/- 2.8%), whereas it remained low in groups 2, 3 and 4 (38.4 +/- 15.2, 45.7 +/- 9.8 and 46.9 +/- 11.2%, respectively). High DHA composition during induction/signaling phase and/or effector phase of photoreceptor cell apoptosis can delay the onset of apoptosis and counteract progression of MNU retinotoxicity in rat retina. DHA may play a role in the suppression of MNU-induced photoreceptor cell apoptosis in rat retina.     

大鼠慢性高眼压下视网膜损伤中HIF-1α和caspase-9的作用

目的:探讨HIF-1α和caspase-9表达与高眼压视网膜损伤的关系。方法:大鼠60只随机分为6组,每组10只20眼。分别为假手术对照组;高眼压3,7,14,21,28d组。巩膜静脉烧烙法制作高眼压模型。应用免疫组织化学法,RT-PCR法,Western印迹法检测各组视网膜组织中HIF-1α和caspase-9基因mRNA及蛋白表达。结果:HIF-1α和casepase-9阳性染色主要位于视网膜内层即视网膜节细胞层和内颗粒层。HIF-1α和caspase-9mRNA和蛋白在正常视网膜中有低浓度的表达,高眼压3d后,表达明显上升,HIF-1α到7d时达到高峰,caspase-9到14d达到高峰,随后有所下降,但仍明显高于正常组的表达水平,差异有统计学意义。结论:HIF-1α和caspase-9是青光眼神经节细胞凋亡的发生和进展中重要的病理生理机制。     

葛根素对糖尿病视网膜病变中Bcl-2表达的影响

目的:通过分析凋亡细胞及凋亡通路中的关键因子Bcl-2表达的变化,阐明葛根素抗凋亡的作用和机制。方法:取成年健康大鼠60只,随机分为空白对照组、糖尿病(DM)组和DM葛根素干预组,ip链脲佐菌素建立DM大鼠视网膜病变模型,3mo时处死大鼠观察各组视网膜组织病理变化,并应用RT-PCR对Bcl-2进行定量分析。结果:DM大鼠HE染色可见神经节细胞减少,内外颗粒层平均光密度减低,有空泡形成,细胞排列紊乱稀疏。葛根素干预组细胞结构好转,未见空泡。RT-PCR可见Bcl-2在葛根素干预组表达明显高于正常组和DM组(P<0.05)。结论:葛根素可改善视网膜组织病理学变化,并增强Bcl-2的表达。     

Effect of High Dosage of Methylprednisolone on Rat Retinal Ganglion Cell Apoptosis after Optic Nerve Crush

Traumaticopticneuropathyisanuncommonbutoftendevastatingcauseofpermanentvisuallossafterbluntorpenetratinginjury.Opticnerveiscomposedoftheaxonsofretinalganglioncells(RGC).Opticnerveaxotomycausedrapiddegenerationoftheaxonsandmorethan90%oftheRGCdiedbyapoptosiswithin2weeks[1].AttemptsweremadetopreservetheinjuriedRGCbychangingtheenvironmentorbyupregulatingintrinsicgrowthfactorssurroundingtheRGC[2].Apoptosisisaregulatedprocessunderthecontrolofproteins.TheBcl鄄2genefamilyisoneofthemostimportanta…     

N-甲基-N-亚硝脲对大鼠视网膜光感受器的毒性作用

目的:观察N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)对SD大鼠视网膜光感受器细胞的毒性作用。方法:雌性SD大鼠100只,分17组,正常对照组4只,其余组各6只。在大鼠生后50 d,分别一次腹腔注射MNU 50 mg／kg、60 mg／kg、70 mg／kg和80 mg／kg。在MNU处理后24、48、72 h和7 d处死大鼠,取眼球,做组织学检查。结果:不同剂量的MNU均引起中心视网膜和周边视网膜损伤,其损害的程度与MNU的剂量呈正比。作用24 h后,可见视网膜光感受器细胞核固缩、破坏及光感受器外节部定向紊乱;48 h或72 h后,可见光感受器细胞丧失;7 d后,外颗粒层和光感受层几乎完全消失。结论:MNU对大鼠视网膜光感受器细胞有选择性的毒性作用,该作用呈剂量和时间依赖性。     

N-甲-N-亚硝脲对大鼠视网膜光感受器的毒性作用

目的观察N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)对SD大鼠视网膜光感受器细胞的毒性作用.方法雌性SD大鼠100只,分17组,正常对照组4只,其余组各6只.在大鼠生后50 d,分别一次腹腔注射MNU 50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg和80mg/kg.在MNU处理后24、48、72 h和7 d处死大鼠,取眼球,做组织学检查.结果不同剂量的MNU均引起中心视网膜和周边视网膜损伤,其损害的程度与MNU的剂量呈正比.作用24 h后,可见视网膜光感受器细胞核固缩、破坏及光感受器外节部定向紊乱;48 h或72 h后,可见光感受器细胞丧失;7 d后,外颗粒层和光感受层几乎完全消失.结论MNU对大鼠视网膜光感受器细胞有选择性的毒性作用,该作用呈剂量和时间依赖性.     

Y27632对急性视网膜缺血再灌注大鼠视网膜组织形态学的影响

研究Rho激酶抑制剂Y27632 对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜组织形态学的影响。方法：实验研究。将60只SD大鼠随机分为4组，每组15只：正常对照组（正常组）、急性缺血再灌注损伤组（IRI组）、0.9%氯化钠溶液对照组（生理盐水组）、Y27632治疗组（Y27632组）。再灌注损伤后24 h（10只）和168 h（5只）处死各组动物，行HE染色、ADP酶染色检查，光镜下观察大鼠视网膜组织病理学变化及视网膜厚度变化。数据采用单因素方差分析。结果：正常组大鼠视网膜结构清晰，三层细胞结构排列整齐。IRI组于再灌注24 h后视网膜厚度增加，内外丛状层组织疏松，视网膜节细胞、内外核层细胞水肿明显、排列紊乱，视网膜节细胞减少。168 h后，视网膜水肿消退、厚度变薄、呈萎缩状，神经节细胞及内外核层细胞数量减少，在视网膜前和神经纤维层可见毛细血管。再灌注 24 h后，IRI组视网膜厚度较正常组增加（P=0.005），Y27632组视网膜厚度低于生理盐水组（P=0.032）。再灌注168 h后，IRI组视网膜厚度低于正常组（P<0.001），Y27632组视网膜厚度较生理盐水组增加（P=0.025）。正常组大鼠视网膜血管自视乳头发出，向四周呈放射状均匀分布，毛细血管网结构清晰。再灌注24 h后，IRI组视网膜血管管径变细，走行较僵直，分支减少，视乳头周围及中周部视网膜可见大片无灌注区，无灌注区周围可见新生血管芽渐成网状。Y27632组可见视乳头周围及中周部视网膜局部无灌注区形成，无灌注区周围可见新生血管。后极部4PD无灌注区面积明显小于IRI组及生理盐水组。结论：Y27632玻璃体腔注射可以减轻视网膜缺血再灌注早期的视网膜水肿，减少视网膜神经节细胞的凋亡，减少视网膜新生血管生成，减轻再灌注晚期的视网膜萎缩，具有视神经保护作用。     

实验性糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡和微血管改变及结缔组织生长因子的表达

目的 研究糖尿病大鼠视网膜凋亡细胞和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况及其在微循环改变中的作用.方法 实验研究.55只成年雄性Wistar大鼠,以随机数字表法,随机分为正常对照(CON)组(10只鼠)和糖尿病(DM)组(45只鼠).根据病程不同,将存活的30只DM组大鼠再分为2个月组(DM2)、4个月组(DM4)及6个月组(DM6),每组各10只鼠.用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜凋亡细胞,用免疫组织化学法测定CTGF表达水平,以视网膜消化铺片过碘酸雪夫(PAS)染色法观察视网膜血管改变情况.观察并比较不同病程的DM大鼠视网膜凋亡细胞及CTGF表达情况、视网膜微血管形态变化及周细胞数量变化.对各组大鼠视网膜的细胞凋亡指数、CTGF表达阳性率及血管周细胞数量进行比较采用LSD-t检验法,两变量间的相关性分析采用线性相关法.结果 CON组大鼠视网膜细胞凋亡和CTGF表达均阴性.DM2组、DM4组、DM6组大鼠视网膜细胞凋亡指数分别为0.05±0.01、0.25±0.03及0.52±0.02;组间两两比较,差异均有统计学意义(DM2与DM4组比较t=21.432,DM2与DM6组比较t=50.843,DM4与DM6组比较t=29.410;P<0.05),表明随DM病程延长,视网膜凋亡指数逐渐增加.DM2组、DM4组、DM6组大鼠视网膜CTGF表达阳性率分别为(22.79±2.99)%、(41.73±2.59)%、(55.27±2.68)%,组间两两比较,差异均有统计学意义(DM2与DM4组比较t=15.345,DM2与DM6组比较t=26.316,DM4与DM6组比较t=10.971;P<0.05),表明随DM病程延长,视网膜CTGF表达水平逐渐增高.CON及DM2组大鼠视网膜血管走形良好,DM4组大鼠视网膜部分血管渐变僵硬、狭窄;DM6组大鼠视网膜血管主干僵硬,部分微血管狭窄明显.与CON组视网膜血管周细胞数量对比,DM2组未见明显变化;随病程延长,DM4组和DM6组大鼠视网膜血管周细胞数量较CON组逐渐减少,差异均有统计学意义(t=3.367,6.667;P<0.05).DM大鼠视网膜细胞凋亡指数与CTGF阳性表达水平呈显著正相关(r=0.958,P<0.05),凋亡指数和CTGF阳性表达水平与视网膜血管周细胞数量均呈显著负相关(r=-0.540,-0.595;P<0.05).结论 在DM大鼠视网膜组织中,凋亡细胞和致纤维化因子CTGF的产生均早于微循环血管走形及周细胞的改变.(中华眼科杂志,2011,47:521-526)

Abstract：

Objective To study the cell apoptosis and the expression of connective tissue growth factor (CTGF) in the retina of diabetic rats and to explore their contributions to the changes of microcirculation. Methods It was a experiment study. Fifty-five adult male Wistar rats were divided into two groups, normal control group (CON,10 rats) and diabetes mellitus group (DM, 45 rats). The 30 surviving rats in the DM group were further divided into 3 groups based on the time of observation, 2 month (DM2), 4 month (DM4) and 6 month (DM6) groups, with 10 rats in each group. Cell apoptosis was detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). Expression of CTGF was determined by immunohistochemical study. Retinal vessels were observed by retinal digest stretched periodic acid Schiff (PAS) staining. Results Immunohistochemical staining and TUNEL staining revealed negative results in normal control group. Retinal cell apoptosis index increased gradually from DM2 to DM6, the differences between any two groups were statistically significant (t2-4,2-6,4-6=21.432, 50.843, 29.410;P<0.05). Expression of CTGF in the retina increased from DM2-DM6, the differences between any two groups were statistically significant (t2-4,2-6,4-6=15.345, 26.316, 10.971;P<0.05). PAS staining of retinal blood vessels obtained negative results in the CON and DM2 groups. Part of retinal capillaries were slightly stiff and narrow in DM4 group. Retinal capillaries in DM6 group were trunk stiff and were narrowed obviously. The number of pericytes was reduced in DM4, and progressed following the course of diabetes. The number of pericytes in the DM2 group did not different from that in the CON group (t=0.875,P=0.387). The number of pericytes in the DM4 and DM6 group were significantly decreased as compared to the CON group (t=3.367,6.667;P<0.05). Retinal cellular apoptosis index had a significant positive correlation to the expression of CTGF (r=0.958,P<0.05). Number of pericytes was significantly correlated (negative correlation) with retinal cellular apoptosis index and the expression of CTGF (r=-0.540, -0.595; P<0.05). Conclusions The appearances of cellular apoptosis and fibrosing factor CTGF in the retina of diabetic rats occurred earlier than the changes of microcirculation and the number of capillary pericytes.